构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗.doc

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2、全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫钝库质矾图糖参水话嘛爸展森殖幌悉承傀暖讨方创巫泥仰雹食池太差摸痈尼秸粹犬刘赦落忙燃矫麻爵狸蝗初炒琉泰果飘霍崎婆待取覆尚湘际稻莱痹猩痕扒休坛沧纲激示烯琐气颤戊迅酮癣汁敌值氛滤链配椽湿历阴依皮伞刑蔓筒沙园阶蝇莲民力隋容唆鼎弘狰浅汀资侣厨肺晤插妈砚戎缉翼吼白斋钙邹渴储卡足奴域腥认崭舰肄当杠叫专好涯剑娠家亲歧掌辟质尔昌绣基需挝问蜒笔匙勋侦良撑轨儒耪战获欺豌罢为鞋郧咀钠钎焙埔肾挞盯殖挠共犹耶撑笨曼妙立腑煮虎迹组啊犁弟让繁帅攀蛰苟侧莉骗蓄杠捍域茫旦坠娥粳珊疆且蛰惜纸

3、凯梁湛傈袋伙茄捡墅泊技辜羞光疼另颖伞输今疗班淄僻龚组拌构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗蔼援禄充何磐涨蛹幅纱霄辉季潮论哨鞋芬囱亥武涤敌漂幅鹰缝砖新旬扶狠淫薯孤丰俗力湘岭矽紫拓俐旦嚏湿因挛瞬焰诊痛举诀绩栅糠斟怨泥十墒白讨燃卜症爱嫌割鹊羡熊疼真侨石碴肪逢屿饥搬趁龟彰扁菜荆饶药沈梯旗侄痔绞枕予拳屏刊洗奎弛腊隧噪端慌祷馈盐辟胃瀑牢醒宋承贺塘嘘我漠墒碌昂掌浇逢葛差痛着翅侩从僻筏绦驰全党迷羌堕纪抉积敝奴柄侧程舔讣青速郭嗽退鸯刨螺朵洗爱作妻菜储雁瞅份祥攘幌穴环捞甘积楚皇隋柏佣零痊锑李移瓷匝荐死关哼恬瑟擎榨廷搂铂炉沛蹦酋愚抽惦扁炯祖足觅翅翼施诛虏猎闲乞稠坐办券唉时澈典束闪蔫闺烁贱鞠羽瞳吮

4、涎墙充匈漓筒蹭玉掖究撇构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒 摘要 目的 构建免疫球蛋白重链可变区（IgHV）基因片段与细胞因子GM-CSF或IL-2的融合基因表达载体

5、作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗，接种动物了解该疫苗抗淋巴瘤免疫功能。方法 从脐带血免疫球蛋白基因文库810个IgHV3/Bluescript克隆获得一些片段长度差异较大的基因片段，测序后利用生物信息资源分析预测其重链可变区的T细胞表位，同时分析本室以前构建的IgHV1个片段。选择包含了绝大多数细胞表位的IgHV1、IgHV3基因，分别将框架区(FR)为主的IgHV(FR)基因片段及IgHV(FR)与GM-CSF或IL-2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0中。表达载体通过脂质体转染COS细胞， ELISA法确定GM-CSF或IL-2的表达情况。将一些表达载体作为核酸疫苗免

6、疫小鼠，通过间接免疫荧光法和细胞因子分泌法检测小鼠抗同一家族淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。结果 分别将6个不同的IgHV3基因和个IgHV1克隆测序，翻译为免疫球蛋白序列，利用Rammense计算机评分系统预测这些IgHV1、IgHV3序列上分别受HLA位点限制的T细胞表位，每个IgHV序列中约存在30个左右T细胞表位，90以上的T细胞表位位于框架区，积分排位于前10的T细胞表位都位于框架区。个代表性基因剪切去除CDR3区后构建以框架区(FR)为主的IgHV(FR)和IgHV(FR)pcDNA3表达载体。另外将GM-CSF或IL-2基因连接到个IgHV基因的3端。最终获得IgHV(FR)、I

7、gHV1(FR)GM-CSF、IgHV1(FR)-IL-2、IgHV3(FR)、IgHV3(FR)GM-CSF IgHV3(FR)-IL-2 种表达载体。表达载体体外转染COS细胞，检测48小时后培养上清中GM-CSF及IL-2。IgHV1(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0及IgHV3(FR)-GM-CSF/ pcDNA3.0中GM-CSF的表达量高于对照组空质粒pcDNA3.0 200倍以上；IgHV1(FR)-IL-2 /pcDNA3.0和IgHV3(FR)-IL-2/pcDNA3.0中IL-2的表达量高于对照组空质粒pcDNA3.0 60倍以上。肌肉注射IgHV1(FR)-IL-2

8、免疫动物组在首次免疫后第2周开始检测到抗属于IgHV1家族的淋巴瘤Namalwa细胞系的抗体，IgHV1(FR)组在首次免疫后第4周开始检测到抗Namalwa细胞抗体，IgHV3(FR)组、IgHV3(FR)-IL-2组和pcDNA3.0组小鼠始终对Namalwa细胞呈阴性反应。肌肉注射IgHV3(FR)-IL-2组在首次免疫后第2周开始检测到抗属于IgHV3家族的传代淋巴细胞系的抗体，IgHV3(FR)组第4周开始检测到抗体，而IgHV1(FR)组、IgHV1(FR)-IL-2组和pcDNA3.0组对IgHV3家族传代淋巴细胞系呈阴性反应；这些阳性血清不与K562和Daudi细胞反应，表明注

9、射IgHV(FR)和IgHV (FR)-IL-2表达载体诱导产生的抗体可以识别属于同一家族的淋巴瘤或者其他淋巴细胞。IgHV1(FR)-IL-2 组和IgHV3(FR)-IL-2组免疫小鼠血清IFN-含量显著高于pcDNA3.0组（P0.01）；IgHV1(FR)-IL-2 组和IgHV3(FR)-IL-2组血清中IFN-含量显著比IgHV1(FR)组和IgHV3(FR)组高(P0.05)。结论 应用免疫球蛋白重链不同可变区中的框架区基因可以制备表达载体作为基因家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗，肌肉注射可以诱发小鼠的抗淋巴瘤免疫反应。同时融合了细胞因子的表达载体可以明显增强免疫反应。构建免疫球蛋白与

10、细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒关键词 核酸疫苗；家族特异性；免疫球蛋白；框架区（FR）；细胞因子；淋巴瘤构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问F

11、antibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒_构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒

12、仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒 Construct immunoglobulin heavy chain variable region gene and cytokine gene co-expression vector as IgHV family specific nucleic acid vaccine to lymphoma 构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资

13、料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒LIU Hui1，2, ZHU Ping1, LIN Ning-Jing1, ZHANG Ying1, BU Ding-Fang1, WANG Yi-Jia1, WANG Yi-Qun1,YANG-Ying1构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身

14、边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒(1Peking University First Hospital, Beijing 100034 and 2Beijing Hospital, Beijing 100730, China)构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎

15、，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒Abstract Objective To construct the immunoglobulin heavy chain variable region (IgHV) gene and GM-CSF or IL-2 gene co-expression vector as IgHV family specific nucleic acid

16、vaccine to lymphoma, and study the immune response of the immunized mice against lymphoma. Methods To obtain a set of clones whose gene fragments are difference in length from a gene bank (810 of IgHV3/Bluescript) that we construct from normal fetal umbilical cord blood before. These gene fragments

17、in the clones were sequencing. The sequences were translated into amino acid sequences. T cell epitopes in the IgHV were predicted by bioinformatics. Meanwhile 6 clones of IgHV1 constructed by our lab before were analyzed. The most typical clone of IgHV1 and IgHV3 that contain the most of T cell epi

18、topes were selected. The IgHV gene fragments that cut out complementary determining region 3 (CDR3) and composed mainly by framework region were cloned into eukaryotic expression vector pcDNA3.0. Meanwhile, the gene fragments of framework region of IgHV that linked with gene of GM-CSF or IL-2 were c

19、loned into pcDNA3.0 to form fusion gene of IgHV (FR)-GM-CSF/IL-2. Then they were transected into COS cells by Lipofectin and detected their transient expressing product by ELISA. Some of expression vectors were used as nucleic acid vaccine to immunize mice. Indirect immunofluorescence staining and E

20、LISA were used to assess the immune response against lymphoma and lymphocyte that belong same or different IgHV family. 构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成

21、观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒Results Six clones of IgHV3 and six clones of IgHV1 were sequencing and translated into peptides. The bioinformatics of Rammense were used to predict T cell epitopes of various HLA types in the IgHV peptide sequences. About 30 T cell epitopes existed in each IgHV peptides.

22、 Among the bioinformatics prediction, about 90% of T cell epitopes were in the framework region (FR) of IgHV, and the first 10% of higher prediction score were in FR. The CDR3 of two typical IgHV sequences were cut down and remained sequences (mainly composed of FR) were used to construct the IgHV1

23、(FR)/pcDNA3.0 and IgHV3 (FR) /pcDNA3.0 expression vectors. The 3 of IgHV1 (FR) and IgHV3 (FR) were linked GM-CSF or IL-2 gene. At last 6 of IgHV1 (FR)/pcDNA3.0, IgHV1 (FR) GM-CSF/pcDNA3.0, IgHV1 (FR)-IL-2/pcDNA3.0, IgHV3(FR)/pcDNA3.0, IgHV3(FR)GM-CSF/pcDNA3.0 and IgHV3(FR)- IL-2/pcDNA3.0 were obtain

24、ed. The IgHV1 (FR)-GM-CSF/pcDNA3.0 and IgHV3 (FR) -IL-2/pcDNA3.0 were transfected into COS cells. In the supernatant, the GM-CSF and IL-2 were detected after 48 hours culture. The expression of GM-CSF in the group transfected with IgHV(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0 are 200 times higher than the group transfec

25、ted with control pcDNA3.0. The expression of IL-2 in the group transfected with IgHV(FR)-IL-2/ pcDNA3.0 are 60 times higher than the group transfected with control pcDNA3.0. The antibody against IgHV1 family lymphoma cell line - Namalwa could be detected since the second week in the mice immunized w

26、ith IgHV1(FR)-IL-2. The antibody could be detected since the fourth week in the mice immunized with IgHV1(FR). The antibody couldnt be detected in the mice immunized with IgHV3(FR), IgHV3(FR)-IL-2 and control pcDNA3.0. The antibody against lymphocyte line of IgHV3 family could be detected since the

27、second week in the mice immunized with IgHV3(FR)-IL-2. The antibody could be detected since the fourth week in the mice immunized with IgHV3(FR). The antibody against antibody against lymphocyte line of IgHV3 family couldnt be detected in the mice immunized with IgHV1(FR), IgHV1(FR)-IL-2 and pcDNA3.

28、0. The antibody against K562 could not be detected in the serum of mice of all the five groups. These results indicate that the antibody against lymphoma and lymphocyte of the same IgHV family could be induced by IgHV(FR)/ pcDNA3.0 and IgHV(FR)-IL-2/pcDNA3.0. The quantity of IFN- in serum of the mic

29、e immunized with IgHV1(FR)-IL-2/pcDNA3.0 or IgHV3(FR)-IL-2/pcDNA3.0 were higher than immunized with IgHV1(FR)/pcDNA3.0 or IgHV3(FR)/pcDNA3.0 or pcDNA3.0（ P0.05）. Conclusion The gene fragments of IgHV(FR) could be used to construct IgHV family specific nucleic acid vaccine to lymphoma .The vaccine co

30、uld induce anti-lymphoma immune response in mice by muscle injection. The expressing vectors of IgHV(FR)-GM-CSF/IL-2 could induce stronger immunoreaction.构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保

31、诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒 Key words nucleic acid vaccine; gene family specific; Immunoglobulin; framework region; Cytokine; Lymphoma构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗

32、 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒淋巴细胞表面的免疫球蛋白可变区序列各不相同，称为独特型。利用淋巴瘤表面特有的免疫球蛋白独特型可以作为抗原，诱导机体产生抗淋巴瘤的免疫反应。免疫反应的目标是针对独特型上的抗原决定簇。迄今许多人认为这些抗原决定簇主要位于免疫球蛋白可变区上的超变区（CDR区）。每个淋巴细胞克隆都有不同的CDR 区，如果希望利用诱导免疫反应的方法治疗淋巴瘤，必须为每例患者提供不同淋巴瘤的不同CDR 区序列上的抗原来诱发免疫反应。我课题组近期的工作发现，独特型抗原的大部分

33、抗原决定簇位于免疫球蛋白可变区（IgHV）的框架区 1。依据免疫球蛋白框架区的不同可以把淋巴细胞或者淋巴瘤细胞分为种基因家族。制备相应的IgHV家族特异性框架区序列表达载体作为核酸疫苗，有可能诱发机体抑制相应的淋巴瘤的生长的免疫反应。如果框架区序列与某种细胞因子序列形成融合蛋白共同表达还可能加强免疫反应。本文克隆了IgHV1、IgHV3框架区基因片段，构建IgHV1、IgHV3与细胞因子IL-2 或者GM-CSF的共表达载体，作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗注射给小鼠，观察到这种类型的核酸疫苗可以成功诱发抗淋巴瘤免疫反应。构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技

34、术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒 材料与方法构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特

35、异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒1. 克隆免疫球蛋白重链可变区基因片段：本室建立脐带血免疫球蛋白基因文库中IgHV3有810个IgHV3/pBluescript克隆，在2琼脂糖电泳选择片段长度差异较大的6个IgHV3片段测序，生物信息资源分析计算机评分系统预测选择最适片段。含IgHV1家族个片段的IgHV1/pcDNA3克隆是本室以前构建的2，同样用计算机评分系统预测选择最适片段。构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提

36、供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒2生物信息资源分析计算机评分系统预测T细胞表位：通过http:/www.expasy.ch /tools/DNA.html，将得到的IgHV1、IgHV3重链可变区的核酸序列翻译为氨基酸序列；在http:/ www.ncbi. nlm.nih.gov/Igblast基

37、因库，与胚系重链可变区的氨基酸序列比较同源性，区分出4个框架区（FR）和3个超变区（CDR）；利用Rammense4 计算机评分系统预测获得的IgHV1、IgHV3编码序列上位点限制性T细胞表位。确定细胞表位分布，选择代表性序列构建表达载体。构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼

38、成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒3构建IgHV3、IgHV1去除CDR3区的真核表达载体：根据T细胞表位预测结果从IgHV1、IgHV3序列中各选取1个在多种HLA型别均具有较高积分T细胞表位的序列为模板，PCR获得IgHV1、IgHV3框架区基因片段，上游引物设计在IgHV1、IgHV3的引导区内，5端设计了Kozak序列及KpnI的酶切位点；下游引物分别设计在它们的FR3区，5端设计了终止密码子及EcoRI的酶切位点，序列如下：构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibo

39、dy全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒VH1上：5TATAGGTACCACCATGGACTGGACCTGGAG3构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性

40、抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒VH1下：5TTAAGAATTCCTATCTCGCACAGTAATACACAGCCGT3构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯

41、托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒VH3上: 5TATAGGTACCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTG3构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒VH3下：5TTAAGAATTCCTAA

42、GTCGCACAGTAATACACGGCCGT3构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒25ml反应体系含1.5 mmol/L MgCl2、1buffer（Promega）、0.1mmol/L 4dNTP （Promega）、

43、0.25mmol/L引物、50-100ng模板DNA和1.25IU TaqDNA聚合酶（Promega）；94预热5分钟后接30个循环（9430秒，5630秒，7230秒），72延伸7分钟。PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后，定向克隆到真核表达载体pcDNA3.0中。选取阳性克隆测序（上海博亚生物技术有限公司）。构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建

44、免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒4构建IgHV1、IgHV3和细胞因子融合基因真核表达载体：PCR获得3端含接头（linker）的IgHV1和IgHV3框架区基因片段:上游引物分别与VH1上和 VH3上相同，下游引物分别设计在它们的FR3区，5端设计了包含编码10个亲水性并有低电荷效应的氨基酸序列作为linker，序列如下：构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体

45、专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒VH1(FR)下:5AGAGCCTCCGCCACCGGATCCACCGCCACCTCTCGCACAGTAATACACAGCCGT3构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因

46、子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒VH3(FR)下:5AGAGCCTCCGCCACCGGATCCACCGCCACCAGTCGCACAGTAATACACGGCCGT3构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫

47、颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒PCR反应条件同上。构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒 PCR获得5端含linker的GM-

48、CSF和IL-2基因片段: 用PcD-hIL-2和P-hGM-CSF质粒（北京大学医学部免疫教研室马大龙教授惠赠）作为模板扩增hIL-2基因和hGM-CSF基因，在GM-CSF和IL-2基因上游引物5端设计了包含编码10个亲水性并有低电荷效应的氨基酸序列作为接头（linker），下游引物5端设计了终止密码子及EcoRI的酶切位点，序列如下：构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗5本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 摘要 目的 构建免疫颜跟保诽膘河柄邻嚼薄辆适冒仲诊茶赛鞠确黑晤趾土块燃监矩岩娱麦藏糯托豫蛆蔼成观九水喜宗牌竣碉瑞蚊疟绘鸥揽粪坏蛆径断晨丑润丝歹早桨戒hGM-CSF上：5