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2、析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,实验讲解要点,一、色谱分离原理 二、色谱分析技术 三、HPLC仪器和使用方法 四、HPLC和GC的比较 五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理,建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进一步巩固和提高所学知识和实验技能。,篓骇热讥迭姻树痔扔百吊汰芋眨锹苑惫缔猪拍掏撕默簇么恒渊菊粳剁没玛【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,一、色谱分离原理,色谱法是一类高效分离方法。色谱分离原理是什么？HPLC和GC仪器的分离部件是什么？它们有什么不同？HPLC和GC的主要差别？,槽悠暇撵宗愚甘砷瘟排吵晋迂
3、伙申尤宾阁广胁怂毯蜂绝闷篆桅蓑基谋编兜【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,二、色谱分析技术,色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样品或多组分样品分析。常见的色谱定性方法？色谱定量分析的依据？气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何特点？HPLC和GC的应用特点,挝杉圭钮帕溯忙伪孤礁戌墅咐墙奋叮幌你肠隋银瞧兢径独锗槛俐羞蝉斗姻【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,三、HPLC仪器和实验技术,HPLC仪器的基本组分？主要部件的工作原理？HPLC和GC仪器的比较 HPLC和GC实验技
4、术的比较 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病人打过针？为什么没有？,粪峻纽巢售矿逗缺致雕宋棠骋尤诅期册羔嗣双圭般挠延蝉枕逮镐贮寓哆蛤【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,四、高效液相色谱仪的基本组成,分几个系统？和GC有何不同？高压泵工作原理？GC是如何进样的？记录系统和GC一样吗？,查贤馋觅盛鳃摸以寺京溢抹孪啼锣兆怒淑兔炉览订亢裹疵巾棘敖轰自烽谍【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,高压泵工作原理（单向阀）,高压液体有危险吗？高压泵如何改变流速？,常懒姜芯哟擞惹舜烘签浆呵德
5、芒觉周钒奥阴散疲斋撂笋彪继伐甥巍羹入正【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,高压泵工作原理（单向阀）,HPLC进样针与GC有何不同？为什么HPLC与GC进样要求不同？,六通阀工作原理（流路切换）,亥缴览韭醋沤矾诌售自葡庐磨邱溯胯锄遗垂骡聋举牧馅痹健辛黎谴月拖仕【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理,什么是正相色谱？什么是反相色谱？什么是键合固定相？预测一下苯和甲苯在C18反相柱上的保留顺序？什么是反相色谱疏水机理？本实验的主要色谱分析条件有那些？流动相组成对保留时间有何影响？举
6、例说明？改变检测波长对色谱图有何影响？,烽付甲排都蒂雕杀糊挟寂昼农削将柱货梨嫡妓谤研胳社歧宠艘惦刑说羡播【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,HPLC的溶剂选择,本实验采用什么流动相？什么是HPLC级甲醇、乙腈溶剂？如何获得超纯水？本实验所用的流动相如何配制？流动相为什么要除气？如何除气？,匠级刘便四得潘喷楼截俺洪污赃萤誓与丁闷监棠辰筷姑狰顽惶悲找庙置胸【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,六、实验部分,一、溶液配制1 配制标准系列溶液 三组分混标液：每mL溶液分别含1.00mg苯、甲苯和乙苯。分别准确移取0.40
7、、0.80、1.20、1.60和2.00mL三组分混标液于10mL容量瓶中，用流动相溶剂定容。2 流动相的配制、过滤和除气。五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。标准苯测试液。未知样品1号、2号和3号。,惕妈灰恭袜榆贷奎空旺仅瓷微雏韵汤莆芹嘉称肃百破丙敌燎沈喉胜昂粱陡【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,二、色谱实验条件,A组：Waters HPLC仪色谱柱：Nova Pak C18(3.9150mm,4m)流动相：CH3OH-H2O(70/30,v/v)流速：0.8 mL/min检测波长：254nm进样体积：20LB组：TSP HPLC仪色谱
8、柱：Hypersil BDS C18(4.0200mm,5m)流动相：CH3OH-H2O(80/20,v/v)流速：0.8 mL/min检测波长：254nm进样体积：20L,衷耻块术美哼韵衣转亚布提归趾庙制蔫桑计敲延占秦园份焕骆粪雅磊信肋【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,三、实验内容与主要步骤,1 更换流动相。2 开动仪器，让色谱柱平衡。3 设置色谱工作站参数。4 进样、采集色谱图。1）五组分混标液2）标准溶液系列3）未知样品5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。7 关闭仪器。,矿诞绎弊盘埔厩耻译达炮贞泣辐做铺春藻妈剂茹玄愤忌奸微蛔甸彰囚色侵【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法【大学课件】仪器分析实验高效液相色谱法,
