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1、实验三,人类ABO血型检测及人血涂片的制备和观察,实验目的,了解人类血型的遗传特性及其遗传方式；掌握人体血型（ABO型）的检验方法。同时了解自己的血型。观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。掌握血涂片的制备方法；认识红细胞及各种白细胞的典型形态；,实验原理,血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的。抗体或凝集素存在于血清中，它与红细胞的不同抗原起反应，产生凝集，最后溶解，由于这种现象，临床上在输血前必须注意鉴定血型，以确保安全输血。通常输血反应中大多数注意ABO血型系统。,最早的输血试验是英国人
2、罗维尔在1665年进行的。他把一条失血过多濒于死亡的狗的静脉与另一条健康狗的静脉用鹅毛管连接起来。失血的狗逐渐从濒死状态恢复过来。1667年，法国国王的御医丹尼斯首先进行了动物血液输人人体的试验。他将400毫升羊血注入一个失血多病的青年人的静脉，这个青年人竟奇迹般地活了下来。此后他又进行了多次输血试验，也安然无恙。但他在1668年的一次试验中，却以失败而告终。他给一名患者输动物血，第一次输血后病人病情有所好转；第二次输血后，病人出现发热、腹痛、大汗、血尿等症状，第三次输血后病人死亡。死者妻子告丹尼斯犯有杀人罪，为此，法国议会特别制定法律：不许再进行输血。1825年，英国的布伦德尔医生从一个人直
3、接输血给另一个人首次成功，但是这一成功具有很大的偶然性。据医书记载：19世纪末叶有346人接受过输血治疗，另有129人被试图输人动物的血液。当时人们还没有认识到血型的不同，因输血发生的事故时有发生，因此，输血是要冒极大风险的。,输血的变迁,兰德斯坦纳（K.Landsteiner),1868年生于奥地利首都维也纳。维也纳大学医学院毕业后，继续留校，学习化学。1900年发现A、B、O3种血型。1919年在荷兰巴库的一所医院工作。1922年赴美，受聘于洛克菲勒研究所。1930年获诺贝尔生理学医学奖。1943年逝世。,兰德斯坦纳的贡献,卡尔兰德斯坦纳是奥地利著名医学家，他因发现了、血型而于年获得诺贝尔
4、医学及生理学奖。年，兰德斯坦纳在维也纳病理研究所工作时，发现一个人的血清有时会与另一个人的红细胞发生凝集。随后，兰德斯坦纳进一步发现人的血液按红细胞与血清中的不同抗原和抗体，可分为不同类型，他以、三个字母来代表他发现的三种不同类型的血液。不同血型的血液混合在一起，就会发生凝血、溶血现象。年，兰德斯坦纳的两名学生把实验范围扩大到人，又发现了较为稀少的型血。年，国际上正式采纳了兰德斯坦纳原定的字母命名，确定血型有、四种类型。至此，现代血型系统正式确立。兰德斯坦纳在认识人类血型方面的杰出研究成果，不仅为安全输血和治疗新生儿溶血症提供了科学的理论基础，而且对免疫学、遗传学、法医学的发展都带来了深远影响
5、。,红细胞血型血型（blood group）：人类血液由遗传控制的个体性状之一，是血液的遗传标记(genetic marker)红细胞血型：指红细胞表面抗原由遗传所决定的个体差异广义的血型概念：指包括血液、体液、分泌液、排泄物及组织细胞上，由遗传所控制的个体性状,血型鉴定,红细胞上不含有、抗原，而血清中含有抗和抗抗体称为型。,红细胞上含有抗原，而血清中含有抗抗体的称为型,红细胞上含有抗原，而血清中含有抗抗体的称为型,红细胞上含有和抗原，而血清中无抗、抗抗体的称为型,父母的血型与子女的血型关系,人类血型有数十亿种之多。人类除同卵双生子女外，再也找不到两个血型完全相同的人。,Rh血型,Rh是恒河猴
6、（Rhesus Macacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称D抗原）的，称为Rh阴性。这样就使已发现的红细胞A、B、O及AB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为Rh阳性和阴性两种。,随着对Rh血型的不断研究，认为Rh血型系统可能是红细胞血型中最为复杂的一个血型系。Rh血型的发现，对更加科学地指导输血工作和进一步提高新生儿溶血病的实验诊断和维护母婴健康，都有非常重要的作用。根据有关资料介绍，Rh阳性血型在我国汉族及大多数民族人中约占99.7%，个别
7、少数民族约为90%。在国外的一些民族中，Rh阳性血型的人约为85%，其中在欧美白种人钟，Rh阴性血型人约占15%。,实验材料及试剂,显微镜、载玻片、刺血针、消毒牙签、A型和B型标准血清、生理盐水、酒精棉球。受检者血液75%乙醇、瑞氏染液、磷酸盐缓冲液,1取一块清洁玻片，用蜡笔划上记号，左上角写A字，右上角写B字。2用小滴管吸A型标准血清（抗B）一滴加入左侧，用另一小滴管吸B型标准血清（抗A）一滴加入右侧。3穿刺手指取血，玻片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。,【方法与步骤】,组长领取实验用品：每两组一盒血型检测试剂每两人一只采血笔每人三片载玻片
8、、一个采血针,抗A,抗B,采血前用75酒精棉球消毒受试者的无名指指腹,采血,第一、第二滴血滴加于ABO血型检测试剂液滴中，用牙签将血液和试剂混合第三滴血滴加于一干净的载玻片一端,抗A,抗B,血液与试剂混合后，静置5-15分钟后观察结果,推片：挤出第三滴血置于载玻片的右侧,再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。,3045,两玻片的角度以30-45为宜，轻轻将推片向前快速而均匀地推进，形成头尾明显的舌形血膜。静置使其干燥。,染色,待涂片在空气中完全干燥后，滴加3-4滴瑞氏染液盖满血膜为止，染色30秒。然后滴加等量磷酸盐缓冲液，使其与染液均
9、匀混合静置1015 min用蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干，室温下干燥后显微镜观察。,观察有无凝集，并按下表判定结果,呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用“一”号表示。在试剂里凝结成絮团状，形成鲜明的对比，表明凝集，用“十”号表示。,血涂片镜检结果-红细胞,中性粒细胞,细胞核形态多样，呈腊肠、分叶、杆状等胞质呈粉红色，含淡紫色或淡红色颗粒,淋巴细胞,小、中、大淋巴细胞细胞核圆形，着色深，占细胞大部分胞质少，嗜碱性，被染成蔚蓝色，含少量嗜天青颗粒,单核细胞,白细胞中体积最大的细胞细胞呈圆形或椭圆形细胞核形态多样，呈卵圆形、肾形、马蹄形或不规则形，核常偏位胞质较多，弱嗜碱性，含有细小嗜天青颗粒,嗜酸性粒细胞,细胞核常为两叶胞质内充满粗大、均匀、略带折光性的嗜酸性颗粒（橘红色）,嗜碱性粒细胞,细胞核分叶或呈S形、不规则形，着色较浅胞质含有染成蓝紫色的嗜碱性颗粒，大小不等，分布不均。,实验要求,记录结果。血型检测结果描述用你制备的血涂片在显微镜下观察到的各种血细胞,
