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1、有关基因工程中的酶切问题一、单选题：1. 已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现在多个上述线性DNA分子，|T若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则-I 一 ，. ,-/从理论上讲，经该酶切后，这些线性DNA分子最多能产生,一，. -长度不同的DNA片段种类数是A.3B.4C.9D. 122. 现有一长度为1000碱基对（bp）的DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是 1000bp，用KpnI单独酶切得到400bp和60
2、0bp两种长度的DNA分子，用EcoRI、KpnI同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是的r r；HlA/vaI KprdI 600 I 200 I 200B.coRlKpW EwKI Kpn200 | 2001EcoBlD,6003. 现有一长度为3000碱基对（bp）的线性DNA分子，用限制性核酸内切酶酶切后，进行凝胶电泳，使降解 产物分开。用酶H单独酶切，结果如图1；用酶B单独酶切，结果如图2；用酶H和酶B同时酶切，结果 如图3。该DNA分子的结构及其酶切图谱是（）200Obp400 0014006006D0 1DQ 60tKOOAB
3、B hBH BHzUIJUbplQQbp1OOUbpSDObp0GJbpUupIy|. .，囹1图2亩34D0 $00 6001400400 6001如口 600CD4. 在DNA测序工作中，需要将某些限制性内切核酸酶的限制位点在DNA上定位，使其成为DNA分子中 的物理参照点。这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假设有以下一项实验：用限制酶HindllL BamHl和二者的混合物分别降解一个4kb （1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如右图所示。据此分析，这两种限制性内切核酸酶在该DNA分子上的限制 位点数目是以下哪一组？A.
4、Hindm 1 个，BamH I 2 个 B. Hindlll2 个，BamH I 3 个C. Hindm2 个，BamHl 1 个 D. Hindm 和 BamH I各有 2 个J-flkl.1.2khHinillTIBamHlUkb1.0 khU.UKJ)0.3kJ)I.Skb 倾h 0.9k b、填空题:之后将这些宿主细胞接种到含;若接种到含青霉素的培养基EcoRlBamHl-引物时细国A一MN徊大柬捐7!酵明.检蛰一/ DMA图2引物对与模板结合示意图弓1物对A 、PX nAACTGA 4.ATCTAGCTATC TTAAGlCCATrACTCTAG引物对SIGTC C G A CTA
5、GTGG CTGIT；BS21. 图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉 素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复 制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的 酶切位点。据图回答：（1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产 物有、三种。若要从这些连接产物中分 离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。四环素的培养基中，
6、能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是中能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是.（4）在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是。2. （8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。 以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。表2几种限制酶识别序列及切割位点表限制酶Alu IIPsL ISma I切割位点1AG 1 CT TC f GAG 1 AATTC 仁TTAA T CCTGCA j G G T ACCTCCCC 1 GGG
7、GGG CCC请根据以上图表回答下列问题。（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶， 其最主要的特点。（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引 物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？。(3) 图1步骤所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？ 。(4) 为将外源基因转入马铃薯，图1步骤转基因所用的细菌B通常为。(5) 对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标 示的酶切位点和表
8、2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 采用EcoR I和PstI酶切，得到 种DNA片断。 采用EcoR I和SmaI酶切，得到 种DNA片断。3. (09江苏卷)(7分)苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植 物的培育过程示意图(amp r为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。(1) 将图中的DNA用Hindlll、BamH I完全酶切后，反应管中有种DNA片段。3种限制性核酸内即酶识别序列与鹿城位点limdm：BamH 1 r GGATCCList GCATCCCCTAGQf?amH IBamH IBst IBstli i I月的基因BamH J
9、 4-/J；ndlUB H被喧会带为-目大肠杆爵涂布在瓶等咨 毒素逸择平板上I 一(2) 图中表示Hindm与BamH I酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得种重组质粒；如果换用Bst l与BamH I酶切，目的基因与质粒连接后可获得种重组质粒。(3) 目的基因插入质粒后，不能影响质粒的。(4) 图中的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T-DNA导人植物细胞，并防止植物细胞中 对TDNA的降解。(5) 已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂 解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细 。(6) 生产
10、上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中白基因频率的增长速率。4. （09福建卷）（10分）转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有PstI、Smal、EcoRl、Apal 等四种限制酶切割位点。请回答：（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应 选用限制酶， 对 进行切割。（2）培养板中的卡那 霉素会抑制香蕉愈伤 组织细胞的生长，欲利用该培养筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有作为标记基因。（3）香蕉组织细胞具有，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中、依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的。5. （18分）（1）限制性
11、内切酶I的识别序列和切点是-GiGATCC，限制性内切酶II的识别序列和切点是 iGATC一。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶I的切点。 请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。 请画出目的基因两侧被限制酶I切割后所形成的黏性末端。 在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？参考答案：1.C 2.D 3.A 4.A二、填空题：1. （18分）（1）目的基因一载体连接物 载体一载体连接物 目的基因-目的基因连接 物 分离纯化（每空2分，共8分）（其他合理答案也给分）（2）载体-载体连接物（2分）； 目的 基因一载体连接物（1分）、
12、 载体一载体连接物（1分）（3）启动子 mRNA （每空2分，共4分）（4）EcoRI和BamHI （2分）（只答一个酶不给分）2. （1）耐高温2）引物对B （3）否 （4）农杆菌 （5）213. （1） 4（2） 2 1（3）复制（4） DNA水解酶（5）表面无相应的特异性受体（6）抗性4. （1） PstI、EcoRI含抗病基因的DNA、质粒（2）抗卡那霉素基因（3）全能性 脱分化、再分化5. （1）一一_ 一GiGATC C 一用酶 I 切割. GGATCC C CTAG,G-CCTAGGiGATC基因GATC用酶II切割制一GAT的基因GATC- 一CTAGjCTAGjCTAG-CTAG 可以连接。因为由两种限制性内切酶切割后所形成的黏性末端是相同的（或“是可以互补的”）。点评：限制酶所识别的是特定的碱基序列，并在特定部位进行切割，限制酶不同，所识别的碱基序列不同， 黏性末端不同。但不同的粘性末端有时是可以进行拼接的，如：黏性末端。两者不要混淆。
