染色体涂染技术.ppt
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1、染色体涂染技术Chromosome painting techniques,染色体涂染技术,染色体涂染技术即将整条染色体、某条染色体臂(长臂或短臂)或者染色体某个片断的DNA制备成探针,然后用荧光原位杂交的方法,将探针杂交到中期分裂相染色体上,在荧光显微镜下观察荧光素在染色体上标记的颜色,从而分析和研究染色体的重组、畸变以及同源基因等的一种新技术。,染色体涂染技术,1.染色体DNA探针的制备;2.荧光原位杂交。,1.染色体DNA探针的制备,流式细胞分类法;克隆基因库或体细胞杂交株;染色体显微切割和PCR扩增等途径。,1.染色体DNA探针的制备,流式细胞分类法(flow cytometry)该法
2、是用一种或多种荧光染料将悬浮液中的中期分裂相染色体染色。由于染色体大小、形态、组成和结构的不同,所染色的特征有其特异性,从而可以通过流式细胞术将特定的染色体收集起来。,1.染色体DNA探针的制备,流式细胞分类法(flow cytometry)局限性:如果受试物的染色体形态单一、数目较多,如牛(2n=60)和狗(2n=78)的所有常染色体及绵羊(2n=54)和马(2n=64)的大部分常染色体都是端位着丝点,因此,仅根据染色体的形态和大小很难将所有的染色体准确地区分开来。,1.染色体DNA探针的制备,克隆基因库或体细胞杂交株 通过特定的克隆基因文库或者特异性的体细胞杂交细胞系制备某条染色体整个或部
3、分DNA探针。该法特异性强,准确性高,并且可以与功能遗传学的研究结合起来,但对实验室要求较高,取材来源和研究范围有所限制。,1.染色体DNA探针的制备,染色体显微切割和PCR扩增 显微切割(microdissection)技术是在显微状态或显微镜直视下直接或通过显微操作系统对欲选取的材料进行切割分离并收集用于后续研究的技术。染色体显微切割分手工切割和激光切割法,倒置显微镜上装配切割臂,安上硅化玻璃针,找到分散良好的分裂相来切割所需染色体片段。,1.染色体DNA探针的制备,染色体显微切割和PCR扩增 早在上世纪70年代,染色体显微切割已应用于多线染色体的研究,是细胞生物学常用的实验方法之一。当时
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