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1、第11讲 免疫学检测技术 的基本原理,免疫学检测方法：依据免疫学理论设计的测定抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子的实验方法。,一、基本原理,抗原与相应抗体特异性结合，并呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，以此检测抗原或抗体。,第一节 体外抗原抗体结合反应 的特点及其影响因素,抗原抗体反应的特点,1.抗原抗体结合的特异性,抗原抗体结合除空间构型互补外，还以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等非共价方式结合，一定条件下复合物可解离成游离状态，且仍保持原有性质。,2.抗原抗体结合的可逆性,复合物解离度主要取决于特异性抗体超变区与相应抗原表位三维空间构型的互补程度，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，两者结
2、合越牢固，不易解离；反之，则容易发生解离。,3.抗原抗体结合的比例与浓度,抗原与抗体结合比例合适，则可形成肉眼可见的大结合物；反之形成肉眼不可见的小结合物。,4.抗原抗体反应的阶段性,第二阶段：可见反应阶段。数分钟、数小时至数日，因素影响多。,第一阶段：特异结合阶段。仅几秒到几分钟、尚无可见反应；,抗原抗体反应的主要影响因素,1.抗原和抗体浓度、比例,2.电解质,3.温度,4.酸碱度,二、血清学反应的种类,1.凝集反应,细菌、细胞等颗粒性抗原与相应的抗体，或表面包被抗原的颗粒状物质与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。,2.沉淀反应,毒素、组织浸液以及血清中的蛋白等可
3、溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物。,3.免疫标记技术,用酶、荧光素、同位素等物质标记抗体或抗原进行抗原抗体反应，检测抗原或抗体的技术。,如免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫测定。,第一抗体,抗原,第一抗体抗原,第二抗体,生物酶,第一抗体抗原-第二抗体,显色,第二节 免疫细胞的测定,淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。一、淋巴细胞的分离 常用ficoll（淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（PBMC），再经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离T细胞，可用尼龙毛柱、抗CD3单抗、E花结试验等分离。,二、免
4、疫细胞细胞的鉴定 根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同类型和比例。（一）T细胞功能测定 1.T细胞增殖试验 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等丝裂原及抗CD3单抗等能非特异性激活培养的T细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。,淋巴细胞功能测定,在该增殖过程中，细胞DNA、RNA、蛋白质的合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原致敏的T细胞。（1）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁仪），易有放射性污染。（2）MTT法：该法操作简单，无放射性污染，但敏感性相对较差。,淋巴细胞功能测定,2.细胞毒试验：Tc
5、、NK细胞对靶细胞有直接杀伤作用，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶细胞。（1）51Cr释放法：用51Cr标记靶细胞，记数仪测定释放的51C活性。（2）MTT法：其原理与增殖试验相同，但甲 生成量与靶细胞溶解破坏水平呈负相关。（3）乳酸脱氢酶释放法：细胞受损致膜通透性改变，乳酸脱氢酶释放到培养液中。,3 细胞因子检测：CK的检测有助于了解其在免疫调节中的作用，鉴定分离的淋巴细胞，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。常用的检测方法有以下三种：（1）ELISA法：（2）生物活性测定法：（3）聚合酶链反应（PCR）：,淋巴细胞功能测定,4 皮肤实验 正常机体对某种抗原产生细胞免疫后，用相同抗原做皮肤
6、试验时出现以局部红肿为特征的DTH。细胞免疫正常时出现阳性反应，细胞免疫低下则呈阴性反应。该方法简便，可帮助诊断某些病原微生物感染（如结核杆菌、麻风杆菌等）及免疫缺陷病等。,淋巴细胞功能测定,（二）B细胞功能测定 B细胞介导体液免疫，检查B细胞的数量与功能是确定体液免疫是否正常的重要手段。1 B细胞增殖试验2 抗体形成细胞的测定：吸附有特异性抗原的SRBC与抗体形成细胞分泌的Ig特异性结合后活化补体，溶解SRBC。又称溶血空斑试验。,第12讲 免疫学防治,“国防建设”,学习要求：1.掌握人工主动免疫与人工被动免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。,免疫学防治：应用
7、免疫学理论预防和治疗疾病，包括免疫预防和免疫治疗。,一、疫苗,1.定义：为预防、控制传染病的发生和流行，用于人体预防接种的生物制品。包括疫苗、菌苗和类毒素。,2.基本要求：,安全,实用,有效,对绝大多数人群有保护性作用，使用后群体抗感染能力强，理想的疫苗：同时诱导细胞和体液免疫，维持时间长。,接种程序简单，无严重不良反应，便于运输和储存，价格低。,活疫苗要求遗传性状稳定，无返祖、致癌和致畸作用，无热原性和过敏原。,抗感染抗肿瘤计划生育防止免疫病理损伤,3.疫苗应用,二、免疫预防方式,免疫预防,自然免疫：显性或隐性感染，胎儿从母亲获得,人工免疫：人工主动免疫 人工被动免疫,免疫预防,自然免疫：显
8、性或隐性感染，胎儿从母亲获得,人工免疫：人工主动免疫 人工被动免疫,（一）人工主动免疫,1.定义：用疫苗接种机体，使之产生 特异性免疫，从而预防感染的措施。,2.疫苗,灭活疫苗（死疫苗）与减毒活疫苗,活疫苗：人工的方法使病原体减毒或从自然界筛选病原体无毒株或微毒株所制成的活的微生物制剂。也称减毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。,死疫苗：选用免疫原性强的病原微生物，经人工大量培养，经理化方法将其杀死后制成的疫苗。无毒力，但仍保持其免疫原性。伤寒、百日咳、钩端螺旋体、斑疹伤寒、乙型脑炎等疫苗,死疫苗与活疫苗特点的比较,含义：细菌外毒素经0.30.4%甲醛处理。,类毒素,特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。
9、,新型疫苗,亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。食用转基因植物以预防接种已初步成功。,含义：细菌外毒素经0.30.4%甲醛处理。,类毒素,特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。,（二）人工被动免疫,1.定义：给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。,2.制剂,抗毒素：细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的血清。注意：对人而言既是抗体也是抗原，因而要防止超敏反应的发生，使用前需皮试。举例：破伤风抗毒素，白喉抗毒素,人免疫球蛋白制剂：混合血浆或胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓缩剂。举例：肝炎、麻疹、脊髓灰质炎。,细胞因子和单克隆抗体：IFN-IFN-、G-CSF、GM-
10、CSF、IL-2，人源单抗。举例：肿瘤、艾滋病有效预防手段。,（三）人工主动与被动免疫的特点比较,3.计划免疫,第三节 免疫治疗,针对异常的免疫状态，应用免疫制剂、免疫调节药物或其他措施来调节或重建免疫功能，以达到治疗疾病的目的。,免疫增强疗法,免疫抑制疗法,感染、肿瘤,超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应、严重炎症,免疫重建疗法,再障、免疫缺陷,主动免疫治疗,被动免疫治疗,刺激或增强机体免疫系统，使机体自身产生抵抗疾病的能力,输注免疫效应细胞或分子，发挥治疗疾病的作用,又称 过继免疫疗法,特异性免疫疗法,非特异性免疫疗法,主动被动,主动被动,瘤苗,抗体、TIL,佐剂（卡介苗）,LAK、细胞因子,可用于治疗的一些成分：,抗原抗体细胞细胞因子化学制剂生物制剂中药制剂,疫苗、瘤苗、多肽疫苗、基因工程疫苗,免疫血清、单克隆抗体、基因工程抗体,骨髓、淋巴细胞、LAK、CIK、TIL、APC,TNF、IL-2、IFN、EPO,左旋咪唑、西米替丁、抗代谢药、激素,卡介苗、短小棒状杆菌、转移因子、iRNA,真菌多糖、植物多糖、雷公藤,
