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1、目标蛋白质快速分离系统(PF 2D),蛋白质组学(Proteomics),研究特定组织/细胞/生物系统中全部蛋白质的结构和功能及其相互关系发现/寻找新的目标蛋白/诊断标记物/药物/靶标 如何找出有差异的蛋白质?,蛋白质组学与寻找目标蛋白的工作流程:蛋白质组学的一个整体解决方案,ProteomeLab Strategy,寻找目标材料（组织、细胞、细胞器）(确认目标蛋白的所在位置)Altra/XL流式细胞仪/细胞计数/活度测定仪 Cellomics全自动荧光显微分析系统/A2芯片系统组织、细胞、细胞器等的分级分离 细胞/亚细胞/细胞器的分级分离/Allegra TT/Avanti J高效离心机/O
2、ptima 超速离心机/淘洗离心机/Biomek 全自动液体加样器目标蛋白的快速分离 ProteomeLab PF-2D 目标蛋白快速分离系统目标蛋白的快速鉴定 ProteomeLab PA 800 目标蛋白快 速鉴定系统/质谱联用系统/P/ACE MDQ毛细管电泳系统/DU 800 核酸/蛋白分析仪/XL-A 蛋白质液体相互作用分析系/Biomek 蛋白质自动结晶工作站 目标蛋白的评价 A2 蛋白芯片系统/Access 免疫化学发光分析 系统/软件解决方案/生物信息学疾病的诊断 Access全自动免疫分析系统/诊断蛋白芯片 Altra/XL 流式细胞仪 各种快速诊断试剂盒和试纸条,蛋白质组分
3、离技术,凝胶电泳分离技术色谱分离技术:二维色谱技术/多维色谱技术毛细管电泳分离技术其它分离技术(离心等),革命性的ProteomeLabTM PF-2D目标蛋白快速分离系统,1st D+2 nd D系统-综合型 ProteomeLab PF-2D Protein fractionation system,2001年美国具有重大商业应用价值的100项创新的R&D技术之一(技术介绍在Genetic Engineering News)ProteomeLabTM PF 2D,UV Detector,pHMonitor,UVDetector,PA 800MALDI/TOF,1st DimensionCh
4、romatofocusing,Fraction Collector/Injector,2nd DimensionReverse Phase,ESI/MS,Injector,创新的配套试剂盒,色谱聚焦柱(25 x 0.2 cm)1.5 um 无孔硅胶（NPS）反相疏水分离柱(3.3 x 0.46 cm)色谱聚焦起始缓冲液(pH 8.5)色谱聚焦洗脱缓冲液(pH 4.0)PD-10缓冲液交换柱,技术创新点,创新的思路:等电点和疏水性分离的结合/同时又是一个开放平台/也可进行多维分离色谱聚焦分离柱、反向分离柱的技术改进独有的软件系统/最佳的重现性，实现蛋白质差异显示技术和差异蛋白质回收技术实现仪器一
5、体化控制平台/还可与毛细管电泳和目标蛋白快速鉴定系统共享控制系统,蛋白质组学的创新技术:成像软件技术将光电倍增管采集的UV信号转换成图象信号,进行蛋白质组的差异显示,肝细胞培养细胞系蛋白质组的UV/pI二维谱图,Drug Efficacy(Dosage/Time)Studies using a Colon Cancer Cell Line,Partial UV/pI Map of Colon Cancer Cell Line Before and After Dosage Treatment.Comparative Maps Produced Using DeltaVue Software,u
6、ntreated,Treated with drug,difference,传统的2D凝胶电泳技术,proteolysis,elution,peptides,MassSpectrometry,传统2D凝胶电泳的优点,方法发展早 近年中在方法标准化/凝胶条供应有比较大的发展,为许多实验室和科学家所采用,有许多经验 国际上有网站/数据库可供比较,在早期蛋白质的研究和蛋白质组的工作中发挥了不少作用,传统2 D凝胶电泳的挑战和问题,对低丰度蛋白质的检测来说灵敏度不够是劳动密集性的工作/费力和费时的操作程序不同实验间蛋白质所在位置的漂移不能全面代表膜蛋白或疏水蛋白的真实情况某些蛋白质在等电聚焦缓冲液中低
7、溶解度 蛋白质间着色的差异引致定量的误差碱性蛋白检测难特大分子量的蛋白质的检测难特小分子量的蛋白质的检测难蛋白质从1D 电转移到2D凝胶过程中的损失某些蛋白质带电荷的不均一性 易受污染 要求在变性的条件下进行,关键的优势,高上样量是毫克级别(可达5-10mg),加上高回收率,特别有利于低丰度蛋白质的分离获得的蛋白质完整性好,保存功能,且在溶液中,易于后续操作,获得了目标蛋白质进入后续研究总的分辨率高、速度快/简单自动化,目标蛋白快速分离系统特点,灵敏度高，有利于低丰度蛋白质的检测容易自动化，也可直接与质谱(MS/MS)连接分辨率高，可获得蛋白质表达谱比较的更精细信息配上收集器可进行馏分收集,可
8、获得在溶液中的蛋白质 重现性很好可获得覆盖面广的蛋白质信息 可获得更完整和活性保存更好的蛋白质可进行差异表达蛋白质的检测和回收,酵母细胞裂解液两次进样的UV/pI图谱，其结果表明采用ProteoSep方法两次分析的蛋白表达模式重复性好,重现性好,1st-DIMENSION RESULTS,Using the maximum protein mass of 5 mg for each injection,five successive injections of human plasma were made to demonstrate the ProteomeLab PF 2D system
9、reproducibility.The first run is at the bottom and the fifth run is on the top.Each run is offset by 0.1 on the absorbance scale for easier viewing.,1st-DIMENSION RESULTS,This demonstrates the reproducibility of the pH gradient for the 1st dimension runs for the five injections of human plasma shown
10、 in the previous slide.,2nd-DIMENSION RESULTS,ProteoVue of the 2nd-dimension chromatograms of the pH fraction 6.2-6.5 for the five runs.This demonstrates the reproducibility of the 2nd dimension over five runs.The main peak has a retention time of 15.9 minutes.,Run 1,Run 3,Run 5,Run 2,Run 4,1st Dime
11、nsion Separation,Chromatofocusing:,图:显示了大肠杆菌（E.coli）细胞裂解液的色谱聚焦分离结果,大肠杆菌 E.coli O157:H 两个不同株系(Strain)的蛋白质组差异显示分离,E.coli O157:H7(Penn State 96-0112),E.coli O157:H16(Penn State 99-1045),蛋白质组学:创新的目标蛋白快速分离系统用于蛋白质差异表达的鉴定,9.3 mg total protein injected on CF column,9.9 mg total protein injected on CF column
12、,Partial ProteoVue map of a yeast proteome.In these 16 fractions collected over the pH gradient it is possible to detect more than 1500 proteins.More than 2500 can be detected in the total collected fractions which includes the basic and acidic proteins eluted prior to and after the gradient respect
13、ively.,Yeast Proteome:Part 1,Comparison map of protein levels in COS 7 cell extract before(red)and after(green)incubation with heparinized beads,快速获得目标蛋白?快速分离功能蛋白?,一切从这里开始:,PA800,目标蛋白的快速鉴定蛋白质组学和蛋白质研究的一个重要技术环节,寻找目标材料（组织、细胞、细胞器）(确认目标蛋白的所在位置)Altra/XL流式细胞仪/细胞计数/活度测定仪 Cellomics全自动荧光显微分析系统/A2芯片系统组织、细胞、细胞器
14、等的分级分离 细胞/亚细胞/细胞器的分级分离/Allegra TT/Avanti J高效离心机/Optima 超速离心机/淘洗离心机/Biomek 全自动液体加样器目标蛋白的快速分离 ProteomeLab PF-2D 目标蛋白快速分离系统目标蛋白的快速鉴定 ProteomeLab PA 800 目标蛋白快速鉴定系统/ProteomeLab DU800 核酸/蛋白分析仪/XL-A/I 溶液中蛋白质相互作用分析系统/Biomek 蛋白 质自动结晶工作站 目标蛋白的评价 A2 蛋白芯片系统/Access免疫化学发光分析系统/软件解决方案/生物信息学疾病的诊断 Access全自动免疫分析系统/诊断蛋
15、白芯片/Altra/XL/FC 流式细胞仪/各种快速诊断试剂盒和试纸条,ProteomeLabTM PA 800标准化的鉴定方法：标准的硬件、完善的控制和分析软件、配套的试剂盒,SDS-Gel MW Analysis(分子量)IgG Gel MW Assay（IgG 测定）Capillary Isoelectric Focusing(等电点)Carbohydrate profiling(糖谱)Peptide-mapping-Mass spectral characterization(肽谱),ProteomeLabTM SDS-MW Gel Chemistry配套的试剂盒/方法/分子量标准品,
16、Improved resolution 10,000 to 300,000 MW Standardized methodology Well characterized protein sizing ladder,SDS-MW analysis of a Protein Standard ladder using the new SDS-Gel polymer.75 um x 20 cm(det)bare fused silica capillary,E.K.sample introduction,PA 800 应用于全自动SDS毛细管凝胶电泳测定蛋白质的分子量大小：准确、灵敏、快速、简单、符
17、合法规标准,Better low MW performance,Improved resolution zone,Higher MW Cutoff,SDS-Gel MW Analysis,注意10kD与11kD 的分离,ProteomeLabTM SDS-MW IgG Assay独有/配套的 IgG 分析试剂盒,Standardized IgG Assay Reduced and Non reduced assay methods Includes IgG control,Protein sizing ladder,and all components necessary for the as
18、saySpecified,validated and supported as an assay,IgG,2H 1L,2H,1L 1H,1H,Light Chain,Benzoic acid,ProteomeLabTM carbohydrate labelling and analysis kit 独有/配套的寡糖、单糖、糖蛋白中糖基分析的试剂盒,进行糖谱的制作,N-Linked Oligosaccharide profile comparing 2 lots of monoclonal IgG2 being assessed as as standard control.,PA 800 应用
19、于糖类分析和糖蛋白中的糖谱制作：灵敏、快速、简单、特异性好,糊精标准对照品的CE-LIF 见分析和寡糖图谱(每个糖之间相差一个糖基),ProteomeLabTM protein methods development kit 蛋白质方法开发试剂盒,、蛋白质分离方法的开发和寻找、强酸性蛋白和强碱性蛋白的分析测试,Horse and Chicken Cytochrome C Tryptic digests,resolved by the ProteomeLabTM PA 800 system interfaced with an LCQ Advantage MS/MS system,PA 800（
20、与质谱联用）应用于全自动的肽谱制作简单、准确、可靠、提高分辨率,CIEF analysis of two different lots of monoclonal IgG2,being assessed as a standard control.The resolving power of CIEF clearly identifies differences in these lots,PA 800 应用于全自动蛋白质/肽的等电点测定：更精确、简单、快速、可区分微小的差异,ProteomeLabTM PA800完善的仪器控制、数据采集和分析系统,32 Karat software ver.
21、7.0符合FDA 21CFR 第11条款可提供IQ、OQ和PQ服务完善的培训教程帮助客户达到GLP/cGMP标准完善的售后技术服务,IgG 研究、开发、生产质量控制：IgG纯度/异质性分析方法,ProteomeLab PA 800 与PF-2D共享工作站和软件控制系统,ProteomeLab PF-2D,ProteomeLab PA 800,在蛋白质组学相关领域的应用,已有大量研究正在开展:肝癌细胞、干细胞、细胞周期、愈伤组织、药物治疗/处理前后的细胞/组织/血液样品.病理细胞/亚细胞器/.植物抗病、抗盐碱 细菌菌系之间.揭示生命奥秘/药物靶标/疾病诊断Markers/动植物功能蛋白组/发育生物学/植物品种改良/药物基因组学.,谢 谢,
