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1、临床标本的细菌学检查,一 血液标本,血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。,（一）标本采集,1.采血时间及次数2.抽血部位及抽血量,(二)检验方法和操作流程,1.操作过程,血液及骨髓标本细菌学检验方法和操作流程,3.报告方式 培养7d无菌生长者报告“培养7d无菌生长”。查见细菌报告菌名和药敏结果。4.菌血症、败血症的诊断标准 1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）；2）发病星期后血中抗体滴度上
2、升。,2.培养瓶中有细菌生长时的不同表现。,第二节 脑脊液标本,脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、链球菌（A、B群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。,（一）标本的采集,脑脊液无论涂片或培养必须于采集后立即送检不宜将其置于冰箱保存，否则影响检出率。,脑脊液标本细菌学检验方法和操作流程图,（二）检验方法和操作流程,1.涂片检查(1)一般细菌涂片检查：例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等
3、多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。(2)结核分枝杆菌涂片检查(3)新生隐球菌涂片检查2.分离培养3.报告方式 培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。,第三节 呼吸系统标本,下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示有上呼吸道感染。常见的病原菌主要有肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌和军团菌。,一 痰标本,（一）标本采集1.痰标本的采集时间2.标本采集方法(1)
4、自然咳痰法(2)气管镜下采集法(3)气管穿刺法(4)结核分枝杆菌标本收集法：收集24H痰液以提高阳性检出率。,呼吸系统标本细菌学检验方法和操作流程,（二）检验方法和操作流程,1.肉眼观察2.涂片检查 其一依据100镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定(如表)；其二是初步判定是否有病原存在。,痰标本镜下分类,注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本,（1）一般细菌涂片（2）结核分枝杆菌涂片（3）放线菌及诺卡菌涂片3.培养（1）培养标本的选择：应选择粘液痰作涂片。（2）痰标本培养前处理：用无菌盐水将痰洗涤3次，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6)，37C水浴90min，使痰液
5、均质化后备用。（3）分离培养4.报告方式 痰标本培养48小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长，报告“正常菌群”。查出的致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌的量化指标。,表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标,二 咽拭标本,正常咽试有多种上呼吸道的正常菌群（如草绿色链球菌）。若从患者标本中查出致病菌提示上呼吸道有细菌感染（如急、慢性扁桃体炎，咽炎，喉炎等）常见的病原菌主要有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、微球菌和棒状杆菌等）。,（一）标本采集（二）检验方法和操作流程 1.涂片检查（先培养后涂片）2.分离培养 3.报告方式 同痰标本检查。,第四节 穿刺液标本,穿刺液包括胸水、腹
6、水、心包液、关节液及鞘膜液等）。正常穿刺液是无菌的，若从患者穿刺液中查见致病菌或条件致病菌提示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见：腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠挨希菌、粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见：心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌多见。,（一）标本采集（二）检验方法和操作流程 1.涂片检查（先接种后涂片）2.分离培养（1）普通细菌培养：（2）厌氧菌培养（3）结核菌培养 3.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“培养2 天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名和药敏结果。,穿刺液标本细菌学检验方法和操作流程,第五节 泌尿、生殖道标本,一 尿
7、液标本中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数105/ml，提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。,（一）标本采集 1.中段尿标本采集法（1）女性：,（2）男性（3）儿童、婴儿（4）两侧肾盂尿（5）膀胱穿刺,（二）检验方法和操作流程 1.涂片检查（1）一般细菌及淋病奈瑟菌（2）念珠菌（3）结核分枝杆菌 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃去。（1）倾注平板法（2）平板接种环法（3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml
8、，则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数105/ml”。（4）Uricult 半定量法,尿液标本细菌检验方法和操作流程,Uricult 操作步骤,Uricult 菌落比密图,Uricult 细菌种类标准模式图,4.特殊菌落培养（1）淋病奈瑟菌培养（2）厌氧菌培养（3）结核分枝杆菌培养5.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。,二 生殖道标本正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细菌寄生。查见病原菌提示有细菌感染。常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形
9、杆菌等。,（一）标本采集 1.女性生殖道标本 2.男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本,（二）检验方法和操作流程 1.涂片检查（1）革兰染色镜检（2）梅毒螺旋体涂片检查 2.分离培养（1）普通细菌培养（2）淋病奈瑟菌培养（3）阴道加特纳菌培养（4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。,生殖道标本细菌学检验方法和操作流程,第六节 粪便标本,正常情况下肠道中有多种细菌。引起感染性腹泻的病原微生物有：（1）细菌性：产毒素型腹泻、侵袭型腹泻、食物中毒、慢性腹泻。（2）真菌性（3）病毒性,粪便标本细菌学检验方法和操作流程,（一）标本采集1.自然排便采集2.直肠试子（二）检
10、验方法和操作流程1.涂片检查 粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。2.培养（1）沙门-志贺菌培养：直接划线接种于腔选择性培养基；用接种针挑选SS上不发酵乳糖菌落，分别接种于三糖铁琼脂（KIA)和尿素-动力-靛基质培养基；生化反应，A-F多价“O”血清或因子血清进行鉴定。,（2）致病性大肠埃细菌培养（3）霍乱弧菌培养（4）副溶血弧菌培养（5）小肠结肠炎耶尔森菌培养（6）空肠弯曲菌培养（7）葡萄球菌培养（8）艰难梭菌培养（9）真菌培养（10）菌群失调的细菌学检验3.报告方式,第7节 脓液及创伤感染分泌物标本,化脓性感染可由单种或多种细菌引起。常见病原菌主要有金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌和结核分枝杆菌、诺卡菌，以及梭杆菌和拟杆菌等。,脓液和创面分泌物标本细菌学检查方法和操作流程,（一）标本采集 1.开放性脓肿和脓性分泌物 2.大面积烧伤的创面分泌物 3.封闭性脓肿（二）检验方法和操作流程 1.涂片检查 根据形态和染色特点，可报告“查见革兰性细菌，形似 菌”或报告“未查见习菌”。2.培养（1）普通菌培养（2）厌氧菌培养（3）嗜血杆菌及奈瑟菌培养（4）结核分枝杆菌培养（5）真菌培养 3.报告方式 查见致病菌，报告菌名和药敏结果。,
