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1、专题一：植物组织培养,1、营养供应：常用的培养基是MS培养基。,无机物（矿质元素）,有机物：蔗糖、维生素、甘氨酸等,大量元素：如N、P、K等,微量元素：如Fe、Zn等,作为C源、提供能量（作为能源物质）、维持渗透压等功能,1、营养供应：常用的培养基是MS培养基，一般需要添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。,2、培养基种类,脱分化培养基、发芽培养基、生根培养基三种,萘乙酸,苄基腺嘌呤,3、制备MS培养基并灭菌,高压蒸汽灭菌法,4、材料选择和外植体的消毒,花药离体培养时（获得单倍体）：作物脱毒（获得无毒植株）：,挑选完全未开放的花蕾,茎（芽）尖,细胞的全能性强,4、材料选择和外植体的消毒,（2）外
2、植体消毒,70%乙醇消毒,5%次氯酸钠消毒,5%次氯酸钠消毒,无菌水清洗,5、接种：始终在酒精灯火焰旁进行，对接种工具要用火焰灼烧灭菌。将菊花茎段插入培养基中时注意不要倒插。6、培养与移栽：在1822的无菌箱中培养，得到试管苗后进行移栽锻炼（炼苗）。最后移至土中培养（定植）,至少3次,4、材料选择和外植体的消毒,（2）外植体消毒,70%乙醇消毒,5%次氯酸钠消毒,5%次氯酸钠消毒,无菌水清洗,5、接种：始终在酒精灯火焰旁进行，对接种工具要用火焰灼烧灭菌。将菊花茎段插入培养基中时注意不要倒插。6、培养与移栽：在1822的无菌箱中培养，得到试管苗后进行移栽锻炼（炼苗）。最后移至土中培养（定植）,光
3、照,植物组织培养（即组织培养）：就是取一部分植物组织，如叶、根、茎或花药等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。为此必须在培养基中加入生长素和细胞分裂素，两者的摩尔浓度比绝对组织是生根，还是生芽。,关键条件,使培养基呈固体状态，有利于离体植物细胞的培养,1，植物无性生殖的方法有扦插、嫁接和组织培养等。植物组织培养的原理是细胞的全能性。植物组织培养的应用在快速繁殖、除去植物病毒、新品种的培育（诱变育种、花药或花粉的单倍体培育、细胞融合、基因工程等）、品种资源的保护、某些代谢产物（如色素、芳香物质等）的生产等方面。植物组织培养的过程包括
4、脱分化和再分化。,2，外植体通常用70%乙醇和5%的次氯酸钠消毒。3，培养过程应该在无菌的条件下进行，实验经过外植体愈伤组织丛状苗生根苗移栽锻炼植株 定植。需要一定的光照和温度的条件。移栽锻炼的方法是通过逐渐降低幼苗生长环境中的湿度，直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。,4，培养基是组织培养时植物组织或器官赖以生长和发育的营养条件。包括植物需要的大量元素、微量元素、有机成分、激素和琼脂。培养基中通常加一定量的蔗糖是除作为营养成分（能源物质、C源）外，还用于维持一定的渗透压。细胞分裂素/生长素的摩尔浓度比决定组织是生根还是生芽，当两者比例高时（细胞分裂素生长素），诱导芽的生成；两者大致相等时（细
5、胞分裂素=生长素），愈伤组织继续生长而不分化；两者比例低时（细胞分裂素生长素），诱导根的形成。但实验中不用天然激素而是用人工合成的激素（如奈乙酸NAA、6苄基氨基腺嘌呤BA等）是因为植物中存在相应的分解天然激素的酶而没有人工合成激素的相应的酶，所以天然激素在植物体内作用和存在的时间短，人工合成激素的作用和存在的时间长，作用效果明显。最常用的MS培养基（发芽培养基、生根培养基）。配制过程包括称量、溶解、调PH、融化、分装（三角瓶）、加盖灭菌等步骤。也可将大量元素、微量元素、激素等分别配成浓度为配方的510倍的母液，用时稀释。,组织培养是近几年发展起来的一种植物无性繁殖技术，特别是在繁殖名贵经济作
6、物、珍稀濒危植物方面。以下是实验室进行植物组织培养的一般过程。植物组织接种培养移栽定植（1）植物组织培养就是取离体植物组织，在 条件下接种到三角瓶中的琼脂培养基中，给予一定的 条件，使之产生。(2)植物组织培养的各个步骤应严格执行_技术，所以在生产时为了防止污染，植物组织必须先进_，常用的试剂是：70%酒精和_。各种器皿和培养基等通常用_法灭菌。(3)与微生物培养基相比，植物组织培养基中要添加生长素和_，两者的摩尔浓度比决定组织是生根，还是发芽（即组织分化的方向）。一般先用_培养基进行培养，使之长出较多的丛状苗，然后将丛状苗分株培养。（4）生根后，要对幼苗进行锻炼，方法是逐渐减低幼苗生长空间的，直到与自然环境的相似为止。,无菌操作,无菌,温度和光照,愈伤组织,消毒,次氯酸钠,高压蒸汽灭菌,细胞分裂素,发芽,湿度,
