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1、四、血细胞比容测定 血细胞比容（Hct，HCT，PCV）是指一定体积的全血中红细胞所占体积的相对比例。HCT高低与红细胞数量、平均体积及血浆量有关，主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断、血液稀释和血液浓缩变化的测定、红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白浓度的计算等。,【检测原理】HCT直接测定采用离心法，间接测定采用血液分析仪法。1离心法 常用微量法和温氏法，其检测原理基本相同，但离心力不同。血液离心后分5层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。读取结果以还原红细胞层为准（图2-19）。,图2-19 血细胞比容结果判断,2血液分析仪法 由
2、红细胞计数和红细胞平均体积导出HCT，HCT红细胞计数红细胞平均体积。【方法学评价】HCT测定的方法学评价见表2-18。,【质量保证】,【参考区间】成年 男性：0.400.50；女性：0.370.48。新生儿0.470.67。儿童：0.330.42。【临床意义】HCT的临床意义与红细胞计数相似。HCT减低是诊断贫血的指标，若红细胞数量正常，血浆量增加，为假性贫血；HCT增加可因红细胞数量绝对增加或血浆量减少所致（表2-19）。HCT的主要应用价值为：1临床补液量的参考 2真性红细胞增多症诊断指标 3计算红细胞平均指数的基础,五、红细胞平均指数 红细胞平均指数包括红细胞平均体积（MCV）、红细胞
3、平均血红蛋白量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）。红细胞平均指数有助于深入认识红细胞特征，为贫血的鉴别诊断提供线索。,【检测原理】1手工法 根据RBC、Hb、HCT测定结果计算红细胞平均指数（表2-20）。2血液分析仪法 MCV由血液分析仪直接测定导出；由仪器测定HGB、RBC可计算出MCHHGB/RBC；MCHCHGB/（RBCMCV）。,【方法学评价】手工法红细胞平均指数由RBC、HGB、HCT测定后计算而来，因此，必须采用同一抗凝血标本，且所检测的结果必须准确。仪器法红细胞平均指数的测定同样依赖于RBC、HGB和MCV测定的准确性。,【参考区间】MCV、MCH、MCHC的参考
4、区间见表2-21。,【临床意义】红细胞平均指数可用于贫血形态学分类（表2-22）及提示贫血的可能原因。但红细胞平均指数仅反映了红细胞群体平均情况，无法阐明红细胞彼此之间的差异。,图2-20 网织红细胞,六、网织红细胞计数,网织红细胞（Ret，RET）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，略大于成熟红细胞，其胞质中残存的嗜碱性物质RNA经碱性染料活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。ICSH将网织红细胞分为4型（表2-23，图2-20）。,网织红细胞检测的目的：鉴别贫血的类型（增生性、非增生性、增生增高性）。检查骨髓的功能。检测贫血的治疗效果。评估骨髓移植后、再生障碍性贫血细胞
5、毒药物诱导治疗后或EPO治疗后的红细胞造血情况。,【检测原理】1普通显微镜法 活体染料的碱性着色基团可与网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结构。2血液分析仪法 特殊染料与网织红细胞中RNA结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。,【方法学评价】网织红细胞计数的方法学评价见表2-24。,【质量保证】以手工计数法为重点。1选择合适的染料 用于网织红细胞检测的活体染料很多，有煌焦油蓝（brilliant cresyl blue）、新亚甲蓝（new
6、 methylene blue）、中性红、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。网织红细胞活体染料的评价见表2-25。,2.正确辨认网织红细胞 外周血液网织红细胞主要为型，凡含有2个或2个以上颗粒、且颗粒必须远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。红细胞各种颗粒或包涵体的鉴别见表2-26。,3网织红细胞计数方法（1）Miller窥盘法：ICSH及我国卫生部临床检验中心推荐使用Miller窥盘法（图2-21）进行网织红细胞计数。（2）显微成像系统：,图2-21 Miller窥盘结构示意图,ICSH建议，为控制CV在10%内，应根据网织红细胞比率，决定在连续视野中Miller窥盘小方格内实际需要计数的红细胞数量（表
7、2-27）。,【参考区间】成人、儿童：0.51.5。新生儿：2.06.0。成人绝对值：（2484）109/L。【临床意义】网织红细胞计数是反映骨髓造血功能的重要指标，常见网织红细胞参数及评价见表2-28。,1评价骨髓增生能力，判断贫血类型2评价疗效3放疗和化疗的监测4药物影响,七、嗜碱性点彩红细胞计数 嗜碱性点彩红细胞是不完全成熟的红细胞，胞质内残存的核酸变性、聚集形成颗粒，经碱性染料（如亚甲蓝）染色后，细胞内可见到深染的颗粒；若以Wright染色，则在粉红色的胞质中出现蓝黑色颗粒，故名嗜碱性点彩红细胞。,【检测原理】制备血涂片，甲醇固定，亚甲蓝染色。选择细胞分布均匀的区域，油镜下计数1 00
8、0个红细胞中嗜碱性点彩红细胞的数量，或油镜下计数50个视野中的嗜碱性点彩红细胞，同时计数5个视野中的正常红细胞数量，计算百分率。,【参考区间】0.03%。【临床意义】嗜碱性点彩红细胞计数增高主要见于铅、汞、银、铋等重金属及硝基苯、苯胺中毒，对慢性重金属中毒具有辅助诊断价值。溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、白血病、恶性肿瘤时也可见嗜碱性点彩红细胞增高。,八、红细胞沉降率测定 红细胞沉降率（ESR）简称血沉，是指在规定条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。ESR是传统且应用较广的指标，用于诊断疾病虽然缺乏特异性，但操作简便，具有动态观察病情与疗效的实用价值。,【检测原理】1魏氏（Westerg
9、ren）法 将枸橼酸钠抗凝血置于特制的刻度血沉管内，在室温下垂直立于血沉架1h后，读取上层血浆的高度，即为红细胞沉降率。血沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段的高度，而并非真正红细胞沉降的速度。2自动血沉仪法 全自动血沉仪根据红细胞下沉过程中血浆浊度的改变，采用光电比浊法、红外线扫描法或摄影法，动态分析红细胞下沉各个时段血浆的透光度，以微电脑记录并打印结果。,【方法学评价】魏氏法为传统方法，为国内规范方法。ICSH、CLSI以及WHO均有血沉检测的标准化文件。ICSH方法（1993）及CLSI（2000）方法均以魏氏法为基础，建立了新的ESR检验“参考方法”和供常规使用的“选择方法”
10、，后者简称“常规工作方法”，分别制定了新的操作规程。血沉测定的方法学评价见表2-29。,【质量保证】血沉测定迄今仍未建立决定性方法，目前首选参考方法，其次为标准化方法（相当于二级参考方法），再次为选择方法即常规工作方法。1ICSH规定的参考方法 可用于验证其他方法的可靠性 未稀释标本结果纠正公式为：纠正ESR（mm/h）（未稀释标本ESR0.86）12 其结果在95%限定值范围内（表2-30），表明方法满意。因ESR影响因素复杂，新方法应建立特定的自身参考区间。,2魏氏法对抗凝剂、血液标本及物理条件的要求 魏氏法对抗凝剂、血液标本及物理条件的要求见表2-31。,3质控方法 参考方法常作为常规试
11、验的质控方法，但参考方法费时、费力，通常采用替代的稳定化全血质控品作为每日质控。进行质控必须要满足以下条件：EDTA抗凝，HCT为0.35左右，ESR在15105 mm/h范围，检测前将标本颠倒混匀16次。4.血沉测定影响因素 影响血沉测定的因素见表2-32。,【参考区间】魏氏法：男性015mm/h，女性020mm/h。【临床意义】血沉是一项常规筛检试验，虽然特异性差，但仍然具有一定的参考价值。临床上，血沉主要用于观察病情的动态变化、区别功能性与器质性病变、鉴别良性与恶性肿瘤等。,1血沉加快（1）生理性血沉加快：血沉受年龄、性别、月经周期等影响。,（2）病理性血沉加快：对于疾病鉴别和动态观察具有一定参考价值，病理性血沉加快的临床意义见表2-33。2血沉减慢 见于真性红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形态异常等。,
