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1、血清中谷丙转氨酶的活力测定,【目的要求】1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。,原理转氨作用：将-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。,谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT,谷草转氨酶 glutamic oxaloace
2、tic transaminase GOT,当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀、坏死导致大量的酶释放到血流中，从而引起血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。本试验用丙氨酸和-酮戊二酸为底物(基质液成分)经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲
3、线查出血清中ALT的活性。反应过程如下：,0,King氏法谷丙转氨酶活性单位：每毫升血清在37 与pH7.4的基质液作用60分钟，生成1umol丙酮酸为一个活力单位。临床检验取血清量为0.1，报告数据以100ml血清计算，因此实际侧得结果乘1000即可。实验材料及试剂实验材料：动物或人血清实验试剂：丙酮酸标准液要求临用前配制；,四、实验操作,标准曲线的绘制,GPT活力测定：洁净干燥试管2支，即测定管、对照管各1支,、标准曲线的制作以表1中的A520为纵坐标，酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。、样品中转氨酶活性的计算 根据样品管的A520查标准曲线，即得每100ml血清转氨酶的活性单位数。,注意事项,1.2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙2.吸量应准确，严格控制反应时间和温度。3.在测定GPT活力时，应事先将底物、血清在37水浴中恒温4.溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定结果。5在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释后再进行测定。,
