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1、,汇报人：夏效东 西北农林科技大学 教授,尿石素A对ox-LDL诱导的内皮细胞功能紊乱的影响及机制,3,2,1,4,目录Contents,研究内容,研究背景,研究结论,研究结果,1,2,4,3,5,瘫痪,中风,死亡,据统计：我国每5个成人中有1人患有心血管疾病动脉粥样硬化是诱发心血管疾病的主要病理基础,1.1 动脉粥样硬化发病率高,一、研究背景,1 动脉粥样硬化研究概况,巨噬-泡沫细胞形成-关键环节,在胞内胆固醇合成过多或者摄入过多的情况下，促进巨噬细胞胆固醇外流对抑制泡沫细胞形成和防治动脉粥样硬化起到关键作用。,内皮细胞功能紊乱启动环节,动脉硬化发展的重要表征。体现出促炎、促血小板聚集、促血
2、管收缩、促凝等机能转变。,microRNA新型药物靶点,进行转录后基因调控。参与动脉粥样硬化进程的种类繁多，主要调节炎症反应、脂质代谢、细胞增殖等。,1.2 动脉粥样硬化分子机制,1 动脉粥样硬化研究概况,一、研究背景,尿石素A(Urolithin A,Uro-A)是石榴、草莓、花生等富含鞣花单宁的食物经肠道微生物代谢生成的。尿石素A在血浆中的浓度可达1425 M。,图1-2.尿石素在肠道中的代谢过程,2.1 尿石素的形成,2 尿石素A研究概况,一、研究背景,2.2 尿石素生物活性,一、研究背景,2 尿石素A研究概况,在人动脉内皮细胞、THP-1源性巨噬细胞、LPS诱导的RAW264.7中，尿
3、石素A可以显著抑制促炎因子表达上调，表现出强于其他种类尿石素的抗炎作用(Gimenez-Bastida et al.2012，Piwowarski et al.2014)。,尿石素A能够显著减弱人肝细胞和脂肪细胞中甘油三酯的累积并有效抑制THP-1/巨噬细胞中胆固醇的募集(Mele L et al.2016,Kang I et al.2016)。因此推测尿石素A在小鼠RAW264.7巨噬细胞中具有潜在的抑制胆固醇摄入和合成的作用。,2.3 尿石素A研究进展,一、研究背景,2 尿石素A研究概况,第二部分研究内容,人动脉内皮细胞,尿石素A,细胞活性,NO释放,单核-内皮黏附和黏附因子表达分析,炎症
4、因子表达分析,炎症信号转导途径分析,细胞结构（LDH）,相关基因表达分析,从细胞水平阐明尿石素A防治动脉粥样硬化的机制,二、研究内容,二、研究内容,内皮细胞炎症反应,单核-内皮细胞粘附,尿石素A对动脉内皮细胞功能的影响,MTT毒性,乳酸脱氢酶含量及一氧化氮含量及表达分析,单核-内皮黏附和黏附因子表达分析,炎症因子表达分析,炎症信号转导途径分析,分子机制,尿石素A抗动脉粥样硬化形成的作用机制,研究技术路线,第三部分研究结果,工作浓度：0.5 2.5 5 孵育时间：24 h,1.1 低浓度尿石素A促进内皮细胞存活率,1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响,三、研究结果,1 尿
5、石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响,三、研究结果,1.3 尿石素A提高一氧化氮（NO）含量,图1-3.Uro-A对NO含量的影响,一氧化氮含量,1.2 尿石素A抑制乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,图1-2.Uro-A对LDH漏出率的影响,乳酸脱氢酶漏出率,1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响,三、研究结果,图1-4.Uro-A对eNOS和ET-1基因表达量的影响,基因相对表达,1.4 尿石素A对内皮一氧化氮合成酶（eNOS）和内皮素1（ET-1）表达量的影响,1.5 尿石素A减少单核-内皮粘附细胞总数,图1-5,6 孟加拉红染色法检测Uro-A对单核-内
6、皮粘附细胞总数的影响。(A)对照组；(B)ox-LDL组；(C)ox-LDL+0.5 M Uro-A组；(D)ox-LDL+2.5 M Uro-A组；(E)ox-LDL+5 M Uro-A组,细胞总数比值,1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响,三、研究结果,1.6 尿石素A对单核细胞粘附内皮细胞的影响,图1-7.pH荧光探针法检测Uro-A对单核细胞粘附内皮细胞的影响。(A)对照组；(B)ox-LDL组；(C)ox-LDL+0.5 M Uro-A组；(D)ox-LDL+2.5 M Uro-A组；(E)ox-LDL+5 M Uro-A组,图1-8.定量分析Uro-A对单核
7、细胞粘附内皮细胞的影响,荧光强度,1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响,三、研究结果,图1-9.Uro-A对粘附因子表达量的影响,1.7 尿石素A抑制粘附因子表达,基因相对表达,1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响,三、研究结果,尿石素A可降低由氧化低密度脂蛋白诱导的黏附因子的表达,下调细胞间粘附因子ICAM-1和单核细胞趋化蛋白MCP-1的基因表达对单核-内皮细胞粘附进行调控。,维持内皮细胞完整性和一氧化氮/内皮素含量平衡，从而改善内皮细胞功能紊乱的作用。,1.8 小结,人动脉内皮细胞,尿石素A,1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细
8、胞粘附的影响,三、研究结果,2.1 尿石素A降低ox-LDL诱导的内皮细胞炎症因子含量,图2-1.Uro-A对IL-6浓度的影响,图2-2.Uro-A对TNF-浓度的影响,图2-3.Uro-A对IFN-浓度的影响,白介素6含量,干扰素含量,肿瘤坏死因子含量,2 尿石素A通过调控MAPK信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响,三、研究结果,ox-LDL可诱导IL-6、TNF-产生诱导炎症反应，Uro-A可有效改善这种作用；ox-LDL不能直接通过IFN-对HEAC造成炎症反应，且Uro-A不是通过响IFN-相关基因或蛋白的表达对炎症反应进行调控。,2.2 尿石素A通过调控miRNA-
9、27促进过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR-）基因表达,2 尿石素A通过调控MAPK信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响,三、研究结果,Uro-A改善经氧化低密度脂蛋白对PPAR-基因表达的抑制作用,尿石素A通过抑制miR-27表达提高PPAR-转录水平,2.2 尿石素A通过调控miRNA-27促进过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR-）基因表达,2 尿石素A通过调控MAPK信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响,三、研究结果,Thanks,2.2 尿石素A抑制ERK 1/2、SAPK/JNK和p38信号通路关键蛋白的表达,2 尿石素A通过调控MAPK信号通路对ox
10、-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响,三、研究结果,图2-7.U0126和Uro-A对ERK 1/2、P-ERK 1/2蛋白表达的影响,图2-8.SP600126和Uro-A对SAPK/JNK、P-SAPK/JNK蛋白表达的影响,Thanks,图2-9.Uro-A对p38和p-p38蛋白表达的影响,2.2 尿石素A抑制ERK 1/2、SAPK/JNK和p38信号通路关键蛋白的表达,2 尿石素A通过调控MAPK信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响,三、研究结果,Uro-A能够明显抑制50 g/m L ox-LDL激活的ERK 1/2、SAPK/JNK和p38磷酸化，并且和通路抑制剂
11、U0126 及SP600125具有一定的协同作用。,2.3 尿石素A通过调控ERK/PPAR-信号转导途径抑制ICAM-1表达,图2-10.U0126和2.5 M Uro-A对PPAR-蛋白表达的影响,图2-11.PPAR-siRNA和2.5 M Uro-A对ICAM-1 mRNA表达的影响,尿石素A调控ERK/PPAR/ICAM-1信号转导途径,2 尿石素A通过调控MAPK信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响,三、研究结果,降低炎症因子含量,通过miR-27途径调控PPAR-,抑制ox-LDL诱导的MAPK通路激活,通过ERK/PPAR途径调控ICAM-1表达,2.4 小结,2 尿石素A通过调控MAPK信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响,三、研究结果,人动脉内皮细胞,尿石素A,第四部分研究结论,Thanks,人动脉内皮细胞,尿石素A,尿石素A通过下调细胞间粘附因子1和单核趋化蛋白1的基因表达抑制氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的作用。通过调控MAPK信号通路抑制ox-LDL诱导的人动脉内皮细胞炎症反应进而维持内皮细胞功能稳定。,四、研究结论,致 谢,感 谢 聆 听欢 迎 批 评 指 正！,
