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1、,专题2 细胞工程动物细胞融合与单克隆抗体,2002年月日，两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批”太空娃娃”终于顺利诞生。对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。,STS,“太空婚礼”,神舟放飞强国梦,“太空婚礼”科研项目一：,“太空婚礼”科研项目二：,你能主持“太空婚礼”中的科研项目吗？,挑战自我,植物体细胞杂交技术,动物细胞融合技术,植物体细胞杂交过程示意图,“太空婚礼”植物科研项目计划书,细胞膜的流动性、细
2、胞的全能性,酶解法去壁,物理法化学法,原生质体的制备,原生质体的融合与筛选,杂种细胞的形成与培养,杂种植株的鉴定与筛选,克服远缘杂交不亲和获得具优良性状的杂种植株,同核体,同核体,异核体（杂交细胞）,人工诱导,还有3个3个以上细胞的融合-,A,A,B,B,B,A,筛选,元贝驾考 元贝驾考2016科目一 科目四金手指考试 金手指驾驶员考试,物理法 的融合效率较高,且对细胞（原生质体）的伤害小,易操作、控制和观察。,太空中处于失重状态，不同种细胞（原生质体）更容易亲近；,为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会大大上升？为什么选用物理法诱导？,请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容问题：什么是动物细
3、胞融合？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？,1.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法,为什么灭活的病毒能作诱导剂？,灭活丧失感染性,保留融合活性,1.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法,鼠B淋巴细胞,鼠骨髓瘤细胞,人工诱导,1.2动物细胞融合的概念,杂交瘤细胞,动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。,1.3动物细胞融合技术的意义和应用,问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？,2.1单克隆抗体的概念,一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺
4、激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的效应B细胞，分泌特异性抗体。,抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,2.1单克隆抗体的概念,单:单个细胞 克隆:无性繁殖单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体
5、,提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？,问题：如何大量生产单克隆抗体？,2.2单克隆抗体的制备,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,设计方案：,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞,实验目的:制备单克隆抗体.实验原理：实验过程：,1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验,2.2单克隆抗体的制备,看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确
6、顺序连接起来。顺序是？,描述单克隆抗体制备过程步骤,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,1.注射抗原的目的是什么？,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,2.诱导细胞融合的手段有哪些？,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,3.若细胞两两融合后，有几种融合情况？,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂
7、交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？,问题：单克隆抗体的突出优点是什么？,特异性强、灵敏度高,克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。,2.3单克隆抗体的应用,诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速,运载药物(“生物导弹”单抗导向，药物为弹头),治疗疾病,现在你能主持“太空婚礼”动物科研项目了吗？,细胞膜的流动性、细胞的全能性,膜的流动性、细胞增殖,酶解法去壁,小鼠免疫处理、细胞分散,物理法化学法,物理、化学、生物法,原生质体的制备,融合亲本细胞的准备,原生质体的融合与筛选,动物细胞融合与两次筛选,杂种细胞的形成与培养,产特定抗体的杂交瘤细胞培养,杂种植株的鉴定,单克隆抗体的分离提纯,单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防,获得具优良性状的杂种植株,课后作业,通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写一篇综述报告。参考选题：1、1984年诺贝尔生理学或医学奖2、单克隆抗体的种类；3、单克隆抗体与疾病诊断；4、生物导弹；,谢谢!,
