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1、球菌及其检验,王频佳检验医学院,病原性球菌(pathogenic coccus),又称为化脓性球菌(pyogenic coccus)根据革兰染色性的不同可分成革兰阳性：葡萄球菌、链球菌、肠球菌等。革兰阴性：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌等。,第一节 葡萄球菌属(Staphylococcus),概 述,分布广泛医院内交叉感染的重要传染源所致疾病（常见、特殊）化脓性炎症食物中毒烫伤样皮肤综合征毒性休克综合征耐药性,Percentage of strains of methicillin-resistantStaphylococcus aureus(MRSA)by year.,一、生物学特性
2、,1.分类及分型,Bergs 分类：32个种15个亚种凝固酶分类：凝固酶阳性 如：金黄色葡萄球菌(S.aureus)凝固酶阴性 如：表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)噬菌体分类：将金葡分为5群26型,2.形态与染色,革兰阳性球菌球形或略呈椭圆形，典型排列呈葡萄串状无鞭毛，无芽胞，某些菌株能形成荚膜,葡萄球菌,葡萄球菌,金黄色葡萄球菌镜下形态(电镜和光镜),Scanning electron micrograph of Staphylococcus aureus,3.培养特性,需氧或兼性厌氧菌，营养要求不高，最适生长温度为3537。最适pH
3、为7.47.6。具有耐盐性，能在含10%15%的NaCl的培养基中生长。,3.培养特性,菌落特点：普通琼脂平板：中等大小、圆形凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐，不透明，菌落因种不同而出现金黄色、白色或柠檬色等色素。,3.培养特性,血琼脂平板：金黄色葡萄球菌菌落周围形成明显的透明溶血环（溶血）。,S.aureus,3.培养特性,高盐卵黄琼脂平板：金黄色葡萄球菌产生卵磷脂酶，分解卵黄，在菌落周围出现一圈白色沉淀环。高盐甘露醇琼脂：金黄色葡萄球菌分解甘露醇，呈黄色菌落。,Mannitol-Salt Agar,4.生化反应,触酶阳性、O/F试验为发酵型金黄色葡萄球菌能分解甘露醇，且凝固酶试验阳性，耐热核
4、酸酶试验阳性。,5.抗原构造,葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A,SPA）多糖抗原,二、临床意义,(一)致病物质,酶凝固酶、纤维蛋白溶酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等毒素细胞毒素（、杀白细胞素）、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等其他粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖等,1.凝固酶（coagulase）,意义：鉴别有无致病性的重要指标。致病机理：抵抗吞噬细胞的吞噬保护细菌不受血液中杀菌物质的破坏使感染局限化和形成血栓,Coagulase test,A=negative,B=positive,2.葡萄球菌溶素（staphylolysin）,损伤细胞膜的毒素，主要
5、是溶素。溶素，对多种哺乳动物RBC有溶血作用。对白细胞、血小板、肝细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞等均有损伤作用。溶素是一种外毒素，具有良好的抗原性，经甲醛液脱毒后可制成类毒素。,3.杀白细胞素（leukocidin）,攻击中性粒细胞和巨噬细胞，在抵抗宿主吞噬细胞，增强病菌侵袭力方面有意义。,4.肠毒素（enterotoxin）,约30%50%临床分离的金黄色葡萄球菌可产生肠毒素。引起急性胃肠炎即食物中毒。作用机制：到达中枢神经系统后刺激呕吐中枢而导致以呕吐为主要症状的食物中毒。,5.剥脱毒素（exfoliative toxin）,表皮剥脱毒素引起的烫伤样皮肤综合征（staphylococca
6、l scalded skin syndrome,SSSS），又称剥脱性皮炎，多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人。具有抗原性，可被甲醛液脱毒成类毒素。,烫伤样皮肤综合征,6.毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）,TSST-1可引起机体发热，增加对内毒素的敏感性。感染产毒菌株后可引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征（TSS）。TSST-1可能不是引起TSS的唯一病因，革兰阴性杆菌内毒素、葡萄球菌肠毒素和溶血素等与TSS的发病也有密切关系。,7.耐热核酸酶（heat-stable nuclease）,致病性葡萄球菌能产生该酶。耐热，经100 15min或60 2h不被破坏；能较强的降
7、解DNA和RNA。耐热核酸酶可作为测定葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。,(二)所致疾病,侵袭性疾病(化脓性炎症)局部感染全身感染毒素性疾病食物中毒假膜性肠炎烫伤样皮肤综合征毒性休克综合征,三、微生物检验,标本采集：根据病变部位不同，采集相应的标本。直接涂片镜检分离培养和鉴定葡萄球菌肠毒素检查,检验程序,脓、穿刺液、尿液、痰,脑脊液,血液,粪便、呕吐物,增菌培养,分离培养,分离培养,分离培养,直接涂片染色,鉴定试验和药敏试验,菌落涂片染色,血浆凝固酶,耐热核酸酶,药敏试验,其它试验,报告,Novobiocin susceptibility,葡萄球菌与类似菌的鉴别,与链球菌的鉴别：触酶试验与微球菌的鉴别：,Bacitracin susceptibility,
