生物实验室常用试剂的配制.ppt

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1、生物实验室常用试剂的配制 一、检验酸碱性的试剂 1.酚酞试液 取0.1酚酞，溶解在100mL6090%的乙醇溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。2.麝香草酚酞(百里酚酞)试液 把0.1g白色的麝香草酚酞溶解在100mL90%乙醇里制得。当pH值由9.410.6时，颜色为无色至蓝色。3.溴甲酚紫指示剂 将0.1g溴甲酚溶于9.25mL的0.02mol/L氢氧化钠溶液中，加蒸馏水稀释至250mL制得。当pH值由6.26.8时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点在pH6.7。二、定性鉴定某些物质的试剂 1.鉴定葡萄糖的试剂(1)班氏(Benedict)试剂 a.在600mL蒸馏水中

2、溶解173g柠檬酸钠和100g无水碳酸钠，冷却后稀释到850mL。,b.在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜。冷却后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。(2)裴林氏(Fehlings Solution)试剂 a.取35g硫酸铜溶解在400mL蒸馏水里，加蒸馏水到500mL。b.取85g氢氧化钾(或70g氢氧化钠)和175g酒石酸钾钠，溶解在400mL蒸馏水里，加水馏水到500mL。上述两种溶液耍分别保存，使用时再等量地混和并搅拌。如溶液里有葡萄糖，加等

3、量裴林试剂，煮沸，会产生红色的氧化亚铜沉淀。2.鉴定淀粉用的碘液 取2g碘化钾，溶解在10mL蒸馏水中，再加1g碘，待溶解后用蒸馏水稀释到300mL。即成碘液。溶液在光亮处容易变成氢碘酸，须保存在棕色玻瓶里。因为I2，不易溶于水，当加入KI后可大大增加I2的溶解度。,3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂 分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液，待用。在3毫升待测液中加入1mL10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。4.鉴定脂肪的试剂 苏丹IV溶液的配制：取0.2g苏丹IV，放入无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。过滤后倒迸试剂瓶内密闭保存备用。苏丹溶液的

4、配制：0.1g苏丹粉末加入95%乙醇100mL待全部溶解后便可使用。5.鉴定DNA的二苯胺试剂 A液:1.5g二苯胺溶于1OOmL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸用棕色瓶保存 B液:体积分数为0.2%的乙醛溶液。实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。6.鉴定二氧化碳的试剂(1)石灰水 取饱和石灰水澄清液，密闭瓶内备用。(2)氢氧化钡(Ba(OH)2)在蒸馏水中加氧化钡。氢氧化钡遇到二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊。,(3)溴代麝香草酚蓝溶液 取0.1溴代麝香草酚蓝，溶解在100mL蒸馏水里，滴入少量0.1%氢氧化钾溶液，使它成为碱性溶液而呈蓝色。本溶液pH值变化

5、范围是6.0(黄)至7.6(蓝)。待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。三、分离液 1.用于分离肌纤维的试剂(1)马克凯郎(MaecalIum)氏液 也叫硝酸甘油溶液，取1份浓硝酸、2份甘油、2份水混合制得。适于分离横纹肌和心肌组织。(2)30%氢氧化钾溶液或30%氢氧化钠溶液 肌肉小块浸泡时间0.5一1小时。2.用于分离神经细胞的试剂(1)甲醛生理盐水溶液 称取58.44g氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到1000mL加入2g40%甲醛溶液，可得甲醛生理盐水溶液。这种溶液也是很好的上皮细胞分离液，既分离迅速，又能保护纤细的上皮细胞纤毛。在上述溶液里，分离小肠和气管上皮组织需2小时，口

6、腔和皮肤上皮组织需3天。,(2)硼酸生理盐水溶液 在0.75%生埋盐水中加入硼酸，使成为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织。3.用于分离神经纤维的试剂 硝酸银溶液:取0.5G硝酸银，溶解在100mL水中即成。4.用于分离植物根尖细胞的试剂(1)盐酸乙醇溶液 在1份95%乙醇中徐徐加入1份浓盐酸，即成盐酸乙醇溶液。密闭保存。(2)4%盐酸溶液。5.用于细胞质壁分离的试剂(1)30%蔗糖液；(2)5%氯化钠溶液；(3)5%硝酸钾溶液；(4)24%尿素溶液；(5)1mol/L氯化钙溶液。四、染色剂 有些动植物组织和大多数细胞及细胞器是无色透明的，必须经染色剂染色，才能在显微镜下观察清

7、楚，常用染色剂的制法和适用范围见122表。,五、干燥剂 干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用，物理吸附作用或两种作用兼有。选用干燥剂应注意其本身和被干燥的物质有无化学作用，以免引起被干燥物质的破坏或吸收。常用干燥有:1、氧化钙(cao)白色固体，碱性氧化物，可干燥氧、氨、氨、胺等气体，不可用来干燥酸性气体，如二氧化碳、氯化氢、硫化氢。2、碱石灰 白色固体，呈碱性。它由氧化钙粉末加入氢氧化钠溶液，经充分混和后置铁皿中于200250下干燥而成。可以干燥氨、胺等气体。常用于避免水或二氧化碳进入反应系统的装置中。3、硅胶 半透明，内表面很大的多孔性固体，对水有强烈的吸附作用。可干燥氧、氮、氨、胺等气体

8、。常用于干燥器中。含有钴盐的硅胶，叫变色硅胶，干燥时呈蓝色，吸水后呈粉红色。硅胶吸附水后可以在120烘干再用。其他的干燥剂还有五氧化二磷、氯化钙、硫酸钙、氧化铝、氧化钡、硫酸镁、硫酸钠、碳酸钾和高氯酸镁等。,六、生理盐水 1.各类动物实验常用的生理盐水 两栖类生理盐水是0.65%的氯化钠溶液;鸟类是0.75%的;哺乳类和人是0.9%。2.任氏(Ringers)生理盐水 先把6.5g氯化钠、0.14g氯化钾、0.2g碳酸氢钠和0.01g磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混和后用蒸馏水稀释到980mL。取0.12g氯化钙溶解在20mL的蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液中，边滴边搅拌，以免产

9、生不溶性的磷酸钙沉淀。常用于变温动物，如两栖类。3.乐氏(Lockes)生理盐水 先把9g氯化钠、0.42g氯化钾、0.10.3g碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混和后加蒸馏水到980mL。再取0.24g氯化钙溶解在20mL蒸馏水中，逐滴加入上述溶液中，常用于恒温动物，如哺乳类。七、固定液和保存液 固定液能把有生命的材料迅速杀死，并尽可能保持它原有的形态和结构，具有防腐和保存和作用。1.甲醛也叫福尔马林液(Fomalin)，固定材料常用5%甲醛溶液，保存生物标本常用4一5%的，消毒常用3%的。市售的是40%甲醛溶液，加7、9、12倍水分别稀释成5%、4%、3%甲醛,溶液。甲醛溶液无色透明，有刺激

10、性气味，味灼烈，是良好的动、植物材料固定液，有强烈的杀菌能力，穿透力大(仅次于乙酸)，防腐性强，固定速度快，效果好。缺点是固定后可使材料少许膨胀，有浓度过高，能使材料发硬发脆，因此对于精细的解剖标本，最好用甲醛与甘油、乙醇、石炭酸等混和使用。2.乙醇(C2H5OH)有强烈的杀菌作用，渗透力较大，但固定效果不及甲醛溶液。可使蛋白质凝固，并有较强的脱水作用，因此，单纯用乙醇固定的材料会产生硬化和收缩，而使体积变小。对含水量多的材料，固定应从低浓度开始，逐步转入高浓度。从经济和效果来考虑，乙醇宜与甲醛等固定液混和使用。常用的乙醇固定液或保存液浓度都是70%左右。3.乙酸 带有刺激味的无色液体，纯乙酸

11、在 16.7以下凝固，故名冰乙酸。乙酸固定液的常用浓度是0.30.5%。乙酸能凝固细胞核内的蛋白质(核蛋白)，对染色质或染色体的固定，染色较好。用乙酸溶液固定材料，可使细胞膨胀和防止收缩，组织也不会硬化。它常跟乙醇、甲醛、铬酸等易引起硬变的收缩的液体组成混合固定液，效果较好。,4、乙酸乙醇溶液 由冰乙酸1份与纯乙醇3份混和而成，适用于动、植物组织和细胞核内DNA的测定。动物的组织固定需1.53小时后，即移入纯乙醇中15分钟，再透明。根尖固定需15分钟，花药固定需1小时。八、脱水剂 材料中含有水分，就会降低透明度。脱水剂有利于材料透明，也有利于材料的永久保存。脱水剂的种类很多、如乙醇、丙酮、甘油

12、、正丁醇和叔丁醇等。中学生物实验最常用的乙醇，而甘油则常用于菌类和藻类等。在用乙醇脱水时，为了避免材料萎缩、僵硬，应从低到高使用不同的浓度，逐渐脱水，有时还用无水乙醇脱水。一般组织(除神经组织，柔软组织外)可从70%乙醇开始经80%、95%、100%乙醇，使它逐步脱水。对一些柔软组织如胚胎组织、低等无脊椎动物组织，要从50%或30%或20%乙醇开始，否则组织收缩较严重。九、透明剂 材料经脱水后，须经透明剂透明，方能浸蜡包埋或在树胶中封藏。其目的在于使组织中的乙醇或丙酮被透明剂所替代，使石蜡能很顺利进进入组织和增强组织的折光系数，便于显微镜的观察，并能和封藏剂混和进行封藏。透明剂的种,类很多，常

13、用的有二甲苯、甲苯、苯、氯仿和香柏油。如二甲苯是应用最广的廉价透明剂。易溶于乙醇又能溶解石蜡，能与封减剂树胶混和，但不能和水混合，透明力强，作用较快。用二甲苯透明时，先经纯乙醇和二甲苯等量混合浸 12h，以置换材料中的乙醇，冉置于纯二甲苯中透明，全部时间不宜超过3h。如是染色后的制片，在二甲苯中经过510min即可透明。十、封藏剂 材料经脱水，透明或染色后，须经封藏才能长期保存。1.加拿大树胶 半透明的固体树脂，溶于二甲苯或苯里，用以封片透明度很好，干后坚硬牢固，可长期保存。2.甘油 临时封片常用的封藏剂，材料先用 10%的甘油浸润数日，待水分蒸发，浓缩成纯甘油时，再加盖玻片。3.松香 取纯松

14、香将其磨碎，放入烧杯内，置于80100处加热12h后，待松香熔解时其中挥发性杂质和气泡外逸，加入约为松香重量一半的二甲苯，搅拌均匀即成松香封藏剂，本品原料易得，效果与加拿大树胶相同。缺点是材料不纯或调制不好时，易发生结晶和褪色。,十一、消毒剂 优良的消毒剂应具有杀菌力强、性质稳定，易于溶解和穿透力大的特性，此外还要求对人和动物组织的毒性低，对器具衣服没有腐蚀性，且价格低廉。1.乙醇 它可使蛋白质脱水和变性，故有消毒和防腐的作用。70%乙醇的杀菌力最强，可在35mim内杀死细菌。且对人毒性小，适用于皮肤及器械等消毒。95100%乙醇能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使乙醇分子不易继续透入，杀

15、菌能力反而减弱。2.碘酒 它是碘和碘化钾的乙醇溶液，有稀碘酒和浓碘酒两种。市售的是2%的稀碘酒，在10min内能杀死细菌及芽抱，可用于消毒皮肤，但对皮肤的刺激性很大，故用后应以70%乙醇拭净。浓碘酒多用于手术后创面消毒。自配碘酒时，可取5g碘化钾和7g碘溶解在5mL蒸馏水中，再加无水乙醇到1OOmL。3.高锰酸钾 强氧化剂，遇到有机物即放出新生态氧而使有机物氧化，其杀菌作用强于过氧化氢。高浓度时有刺激及腐蚀作用；0.1%水溶液可作创口或粘膜洗涤剂，使皮肤消毒;25%水溶液能在24h内杀死细菌芽孢。本液在空气中易分解，失去氧,化能力，要现配现用。4.甲醛溶液 它常用来杀灭细菌、病毒。通常以25%

16、溶液消毒器具。本品又可作实验室熏蒸消毒。5.漂白粉 本品含有效氯为2530%，有强杀菌力，能消毒、防腐、防臭和溶解坏死组织，但作用时间短。十二、麻醉剂 它可分挥发性(如乙醚)和非挥发性(如氨基甲酸乙酷)两类。前者作用时间短麻醉深度容易掌握，动物麻醉后也容易苏醒；后者作用的时间比较长，用法简单，但麻醉后苏醒较慢，不大容易掌握麻醉的深浅程度。在中学生物实验申，使用较多的是乙醚和氨基甲酸乙酷两种。1.乙醚 无色液体，味灼烈，有强挥发性和易燃性。乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹。乙醚吸入法是最常用的麻醉方法。2.氨基甲酸乙脂 它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉末，其水溶液是比较温和的麻醉药，安全度大

17、，多数实验动物都可使用，更适用于小动物。,作为麻醉剂，氨基甲酸乙脂常配成20%水溶液注射入动物体内。剂量是，狗、猫、兔直肠灌注1.5gg体重，皮下静脉或腹腔注射0.751g/Kg体重。蛙类2g/Kg体重，由背部淋巴囊注射。作静脉注射时必须溶在生理盐水(哺乳类用8.59.0%)中，配成10%的溶液，每Kg体重注射10mL。十三、防腐剂 防腐剂多用于剥制标本，现将其中的防腐剂分述如下:如最简单的无毒防腐剂是用硼酸粉130g、明矾粉60g和樟脑粉60g，三种粉末混和后撤在动物皮内，效果一般，但使用安全。十四、密封剂 它常用来封标本瓶口。1石蜡 取石蜡(熔点52)1份+松香1份+甘油数滴，溶化后趁热使

18、用。2赛潞咯 取赛潞咯，如碎、废乒乓球剪碎后，浸入在乙醚、丙酮或氯仿等有机溶剂中加盖后静置二三天，等溶化成糊状时，涂在瓶口和瓶塞外面，形成不透气的薄膜。,十五、培养液和培养基1植物无土栽培完全培养液配方：(1)配方一:称取硝酸钙0.812g、硝酸钾0.506g、磷酸二氢钾0.136g、硫酸镁0.120g、酒石酸铁0.005g，把这些盐类溶解在少量水里，稀释到1000mL。(2)配方二:称取1g硝酸钙、0.25g磷酸二氢钾、0.25g硫酸镁和0.25g硝酸钾。把这些盐类先分别用少量水溶解，然后混和在一起用水稀释到1000mL最后加1滴1氯化铁溶液。2配制缺氮、缺磷和缺钾的不完全营养液：(1)缺氮

19、培养液：硫酸钙052g、磷酸二氢钾025g、硫酸镁025g、氯化钾008g、氯化铁微量。(2)缺磷培养液：硫酸钙05g、硝酸铵016g、硝酸镁025g、硝酸钾020g、氯化铁微量。(3)缺钾培养液：硫酸钙034g、硝酸铵024g、硫酸镁0.25g、磷酸氢钙0.17g、氯化铁微量。以上3种不完全营养液都用水稀释到1000mL。,2土壤浸出液 把肥沃的土壤放在等量清水申，用玻璃棒充分搅拌后静置，使土壤沉淀，取上清液用滤纸过滤即得。3牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养)牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15g，水1000mL，PH7476。4高氏1号培养基(放线菌培养)可溶性淀粉20g，kn

20、o31g，NaCl0.5g，K2HP04 3H2O05g，MgS047H2O05g，FeS047H2O001，水1000mL，pH74一76。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。5马丁氏(Martin)培养基(用于从土壤中分离真菌)K2HPO41g，MgS047H2O0.5g，蛋白陈5g，葡萄糖10g，1/30000孟加拉红水溶液100mL，水900mL，自然pH，121湿热灭菌30min，待培养基融化后冷却至5560时加入链霉素(含量30g/mL)。6马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯(去皮)200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，琼脂1520g,水100

21、0mL，PH值自然。配制万法如下:马铃薯去皮，切成小块，煮沸30min，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖及琼脂溶化后再补足水至,1000mL。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。7乳酸菌培养基(用于乳酸发酵)肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，乳糖5g，NaCl5g，水1000mL，pH6.8，12l湿热灭菌20min8酒精发酵培养基(用于酒精发酵)蔗糖10g，MgSO47H2O 05g，NH4NO30.5g，20豆芽汁2mL，KH2PO405g，水100mL，自然pH。9无氮琼脂培养基(用于从土壤中分离自生固氮菌)葡萄糖(或蔗糖)10g，磷酸氢二钾02g、氯化钠02g、硫酸镁0.2g、硫酸钾02g、碳酸钙50g，琼脂20g，蒸馏水1000mL10花粉萌发培养基 蔗糖10g、硼酸lmg、琼脂05g、水90mL，放入烧杯中，在100水浴中溶化，冷却后加水至100mL备用。,