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1、图4-2HP4瓢（湖叮仪器分流/不分流进样口禀理示意图木令流状态：（不殆流状态1-总流重控制阀；2-注样口； 3-隔垫吹扫气调节阀；4-隔垫吹扫气出口； 5-分流器；也- 分流/不分流电磁耐；7-柱前压调节阀；灯柱前压表；P分流出口： 14色谱柱；11-捂检测器分流/不分流进样一一气相色谱方法及应用一、进样口结构分流/不分流进样口是毛细管GC最常用的进样口，它既可用作分流进样，也可用作不分流 进样口图4-2是典型的分流/不分流进样口示意图。从结构上看，分流/不分流进样口与填充 柱进样有明显的不同，一是前者有分流气出口及其控制装置，二是除了进样口前有一个控制 阀外，在分流气路上还有一个柱前压调节
2、阀，二是二者使用的衬管结构不同。而分流进样和 不分流进样在操作参数的设置，对样品的要求以及衬管结构方面也有很大区别，下面分别讨 论之。二、分流进样（一）载气流路和衬管选择分流进样时载气流路如图4-2a所示。进入进样口的载气总流量由一个总流量阀控制，而后 载气分成两部分:一是隔垫吹扫气（13mL/min），二是进入汽化室的载气。进入汽化室的载 气与样品气体混合后又分为两部分：大部分经分流出口放空，小部分进样色谱柱。以总流量 为104 m1/min为例，如果隔垫吹扫气流设置为3m1/min，则另101mL/min进入汽化室。当 分流流量为100mL/min时。柱内流量为lml/min，这时分流比为
3、100:1。注意。此仪器设计 将柱前压调节阀置于分流气路上，这就可在总流量不变的情况下，改变柱前压。柱前压越高， 柱流速越大，分析速度越快。而要在柱前压不变（柱流速不变）的条件下改变分流比，则必须 调节总流最。总流量越大，分流比越大。分流进样口可采用多种衬管，用于分流进样的衬管大都不是直通的，管内有缩径处或者烧结 板，或者有玻瑞珠，或者填充有玻璃毛。这主要是为了增大.与样品接触的比表面，保证样 品完全汽化.减小分流歧视见下面关于分流歧视问题的讨询。同时也是为了防止固体颗粒 和不挥发的样品组分进入色谱柱。注意，填充物应位于衬管的中间，即温度最高的地方，也 是注射器针尖所到达的地方，这样对提高汽化
4、效率，减少注射器针尖对样品的歧视更为有效。 另外，玻璃毛活性较大，不适合于分析极性化合物。此时可用经硅烷化处理的石英玻璃毛。衬管的上端常用“O”形硅橡胶环密封。用一段时间后该环会老化而造成漏气。故要及时更 换。当进样口温度超过400C时，最好采用石墨密封环。（二）样品的适用性分流进样适合于大部分可挥发样品，包括液体和气体样品，特别是对一些化学试剂（如将剂） 的分折。因为其中一些组分会在主峰前流出。而且样品不能稀释、故分流进样住往是理想的 选择。此外，在毛细管GC的方法开发过程中，如果对样品的组成不很清楚。也应首先采用 分流进样口对于一些相对“脏”的样品，更应采用分流进样，因为分流进样时大部分样
5、品被 放空，只有一小部分样品进入色谱柱，这在很大程度上防止了柱污染。只是在分流进样不能 满足分析要求时（灵敏度太低），才考虑其他进样方式，如不分流进样和柱上进_样等。总之，分流进样的适用范围宽，灵话性很大。分流比可调范围广，故成为毛细管GC的首选 进样方式。（三）操作参数设置1. 温度进样口温度应接近于或等于样品中最重组分沸的点，以保证样品快速汽化，减小初始谱带宽 度。但溢度太高有使样品组分分解的可能性。对于个未知的新样品。可将进样口温度设置为 300度进行试验。2. 载气流速常用毛细管GC所用柱内载气线流速为：氨气3050cm/s，氮气2040cm/s，氢气4060cm/s。实际流速可通过测
6、定死时间来计算，通过调节柱前从来控制。对于分流进样，还要 测定隔垫吹扫气流量和分流流量，前者一般为23mL/min，后者则要依据样品情况（如待侧 组分浓度等）、进样量大小和分析要求来改变。常用分流比范围为20:1200:1,样品浓度大 或进样量大时，分流比可相应增大，反之则减小。用大口径柱时分流比小一些（或采用不分 流进样）。用微径柱作快速GC分析时，分流比要求很大（如1000:1或更高）。另一方面，分流 比小时，分流歧视（见下面关于分流歧视问题的讨论）效应可能小一些，但初始谱带（主要是溶 剂谱带）宽度要大一些。必要时可采用聚焦技术。而分流比大时，初始谱带宽度小，但分流 歧视效应可能会增大。所
7、以，在实际工作中应据样品情况和分析要求选择一个合适的折衷点。3. 进样量和进样速度分流进样的进样量一般不超过2应,最好控制在0.5皿以下，因为衬管的容积有限，液体汽化 时体积要膨胀数百倍（见表4-1）。当然。进样量还和分流比是相关的，分流比大时，进样量 可大一些。至于进样速度应当越快越好，一是防止不均匀汽化，二是保持窄的初始谱带宽度。 因此，快速自动进样往往比手动进样的效果好。*4-1.蒸汽膨胀因子溶剂分子重估计膨胀因子溶剂密度分子重估计膨胀因子异辛烷.114138:1.氢仿i：4s.41.9284:1己烷.顷.书6174:1二氟甲烷1,3385356:1;戊烷方1 猝:1甲醇0793253:
8、1乙酸乙酯0.90.,典233:1水口；1.落.注m进样口温度2丸度，柱前压90Kpa（四）分流歧视问题所谓分流歧视 是指在一定分流比条件下，不同样品组分的实际分流比是不同的，这就会 造成进入色谱柱的样品组成不同于原来的样品组成，从而影响定是分析的准确度。因此，采 用分流进样时必须注意这个问题。那么，是什么因素造成分流歧视的呢？不均匀汽化是分流歧视的上要原因之一，即由于样品中各组分的极性不同，沸点各异，因而 汽化速度各不相同。理论上讲，只要汽化温度足够高，就能使样品的全部组分迅速汽化。只 要汽化室内样品处于均相气体状态，分流歧视就是可以忽略的。然而，实际上样品在汽化室 是处于一种运动状态，即必
9、须随载气流动。从汽化室汽化到进入色谱柱的时间很短（以秒计）， 沸点不同的组分到达分流点时，汽化状态可能不完全相同。这样，由于分流流量远大于柱内 流量，汽化不太完全的组分就比完全汽化的组分可能多分流掉一些样品。造成分流歧视的另 外一个原因是不同样品组分在载气中的扩散速度不同。而扩散速度与温度是成正比的。所以。 尽量使样品快速汽化是消除分流歧视的重要措施，包括采用较高的汽化温度，也包括使用合 适的衬管。分流比的大小也会影响分流歧视口一般地讲，分流比越大，越有可能造成分流歧视口所以， 在样品浓度和柱容量允许的条件下，分流比小一些有利。至于分流比的测定定是很简单的， 只要在分流出口用皂膜流量计测定分流
10、流量，再测定柱内流量（因为柱内流量很小，用皂膜 流量计测定时误差较大，故常用测定死时间的办法进行流量计第。二者之比即为分流比。 严格地讲，两个流量值应校正到相同的温度和压力条件下，才能获得准确的分流比。实际工 作中人们更关心的是分流比的重现性，分流比则常用整数之比表示，故一般不需要很准确地 测定。具体分析中要消除分流歧视，还应注意色谱柱的初始温度尽可能高一些。这样，汽化温度和 柱箱温度之差就会小一些，因而样品在汽化室经历的温度梯度就会小一些，可避免汽化后的 样品发生部分冷凝。最后一个问题是色谱柱的安装，一是要保证柱入口端超过了分流点。二 是保证柱入口端处于汽化室衬管的中央，即汽化室内色谱柱与衬
11、管是同轴的（参看上一章有 关色谱柱安装的内容）。尽管分流进样有歧视间题，但它仍然是毛细管GC中最常用的进样方式。在实际工作中。分 流歧视是很难完全消除的，但只要操作是重现的，一定程度的歧视是重现的。就可以通过标 准样品的校准来消除歧视效应对定量精度的影响另一方面。由于分流进样给检测灵敏度提出了更高的要求，而当样品浓度太低时。分流进样 并不总是合适的选择。除了进行样品预处理（如浓缩）外。读者很容易想到不分流进样。既然 分流进样是因为柱容量小、样品浓度高而不得不采用的方法。那么低浓度样品采用不分流进 样，以提高检测灵敏度就是理所当然的选择了。三、不分流进样（一）载气流路和衬管选择不分流进样与分流进
12、样采用同一个进样口，顾名思义，不分流进样就是将分流气路的电磁阀关闭图4-2（b），让样品全部进入色潜柱。不芬浦进样的港制敏应这样做的好处是显而易见的，既可提高分析灵敏 度，又能消除分流歧视的影响。然而，在实际工 作中、不分流进样的应用远没有分流进样普遍，只是在分流进样不能满足分析要求时（主要是灵 敏度要求），才考虑使用不分流进样。这是因为不 分流进样的操作条件优化较为复杂。对操作技术 的要求高。其中一个最突出的问题是样品初始谱 带较宽（样品汽化后的体积相对于柱内载气流量 太大）。汽化的样品中溶剂是大量的，不可能瞬间 进入色谱柱，结果溶剂峰就会严重拖尾，使早流 出组分的峰被掩盖在溶剂拖尾峰中如图
13、4-3（a）所 示，从而使分析变得困难，甚至不可能。有人也 将这一现象叫做溶剂效应。消除这种溶剂效应可从几个方面考虑，但就载气的流路来说，主要是采用所谓瞬间不分流技 术。即进样开始时关闭分流电磁阀，使系统处于不分流状态图4-2（b）。待大部分汽化的样 品进入色醉柱后，开启分流阀，使系统处于分流状态图4-2（a）。这样，汽化室内残留的溶剂 气体（当然包括一小部分样品组分）就很快从分流出口放空，从而在很大程度上消除了溶剂拖 尾如图4-2（b）所示。分流状态一直持续到分析结束，注射下一个样品时再关闭分流阀。所 以我们说，不分流进样并不是绝对不分流，而是分流与不分流的结合。这里，确定一个瞬间 不分流时
14、间（从进样到开启分流阀的时间）往往是分析成败的关键。原则上讲，这一时间应足 够长。以保证绝大部分样品进人色谱柱，避免分流歧视的影响；同时又要尽可能短，以最大 限度地消除溶剂抢尾、使早流出峰的分析更为准确。这显然是有矛盾的。在实际工作中，常 常是根据样品的具体情况（如溶剂沸点、待测组分沸点和浓度等）或操作条件来确定一个优化的折衷点。研究结果表明， 这一时间值一般在3080S之间。文献报道多采用0.75min，即从进样到开启分流阀的时问 为0.75min，通常能保证95%以上的样品进入色谱柱，本节后而将介绍如何用实验方法确定 优化的不分流时间。衬管的尺寸是影响不分流进样性能的另一个重要因素。为了使
15、样品在汽化室尽可能少地稀 释，从而减小初始谱带宽度，衬管的容积小一些有利，一般为0.251mL，且最好使用直通 式衬管。当用自动进样器进样时，因进样速度快，样品挥发快，故建议 采用容积稍大一些的直通式衬管。对于干净样品，衬管内可不填充玻璃毛，对于 相对脏的样品，则需要填充玻瑞或石英毛，以保证分析的重现性并保护色谱柱不被污染。但 要注意，由于不分流进样时样品在汽化室滞留的时间比分流进样时长，热不稳定化合物的分 解可能性也大，故衬管和其中填充的石英毛都必须经硅烷化处理，且要及时清洗，更换和重 新硅烷化。（二）样品的适用性不分流进样具有明显高于分流进样的灵敏度，它通常用于环境分析（如水和大气中痕量污
16、染 物的检测）、食品中的农药残留监测，以及临床和药物分析等。这些药品往往都比较脏，所 以样品的预处理是保护色谱柱所必须注意的问题。此外，待测痕量组分如果在溶剂拖尾处出 蜂，还可采用溶剂聚焦的方法来提高分析灵敏度。不分流进样对样品溶剂有较严格的要求。因为进样口温度、色谱柱初始温度、瞬间不分流的 时间和进样体积都与溶剂沸点有关。一般地讲，使用高沸点溶剂比低沸点溶剂有利，因为溶 剂沸点高时，容易实现溶剂聚焦，且可使用较高的色谱柱初始温度，还可降低注射器针尖歧 视以及汽化室的压力突变。表4-2列出了常见的溶剂及其沸点和实现溶剂聚焦宜采用的色谱 柱初始温度。另一方面，洛剂的极性一定要与样品的极性相匹配，
17、且要保证溶剂在所有被测样品组分之前 出峰，否则早流出的峰就会被溶剂的大峰掩盖。同时，溶剂还要与固定相匹配，才能实现有 效的溶剂聚焦。必要时可采用保留间隙管来达到聚焦的目的。对于高沸点痕量组分的分析，不分流进样就容易多了。此时可以不考虑溶剂的沸点，因为有 周定相聚焦就完全能保证窄的初始谱带，采用高的初始柱温还可缩短分析时间。事实上，不 分流进样应是分析高沸点痕最组分的首选方法。强4 2章配咨摺的漏点和契瑞溶帮JR*莒果捐的色滑牲机殖*度断始柱U/T隔1R名箱点？C36正己炮694 Or3610室湖已俄乙维如7?45二现甲烷1。-霓19825。*9670庭is7&5_3$_Hl血只能朋于国定心取的
18、色谱帜.vMW.bbigE)(三) 操作参数设置进样口温度进样口温度的设置可以比分流进样时稍低一些，因为不分流进样时样品在汽 化室滞留时问长，汽化速度稍慢一些不会影响分离结果，还可通过溶剂聚焦和/或固定相聚 焦来补偿汽化速度慢的问题。不过，进样口温度的低限是能保证待测组分在瞬间不分流时完 全汽化，否则，过低的进样口温度会造成高沸点组分的损失，影响分析灵敏度和重现性。当 然，过高的温度又会造成样品的分解。因此，要根据样品的具体情况优化进样口温度。而当 改变进样口温度后，又必须重新优化设置瞬间不分流时间:.(2) 载气流速从减小初始谱带宽度的角度考虑，不分流进样的载气流速应当高一些，其上限 应以保
19、证分离度为准。分流出口的流量(开启分流阀后)一般为3060mL/min。只要 开启分流阀的时间设置正确，分流出口流最在此范围内变化对分析结果的影响很小。(3) 进样量和进样速度进样量一般不超过2rL。进样量大时应选用容积大的衬管，否则会发 生样品倒灌。进样速度则应快一些，最好用自动进样器。若采用手动进样，进样速度的重现 性会影响分析结果。(4) 瞬间不分流时间的实验确定方法如前文所述，瞬间不分流时间(也有人叫分流延迟时间、 溶剂吹扫时间)的确定依赖于样品和溶剂的性质，衬管的容积、进样最，进样速度以及载 气流速。所以这一时问的确定应在其余所有条件都确定之后进行。下面介绍一个简单的实验 确定方法。
20、首先将这一时间设置长一些(90120s),以保证全部样品组分进入色谱柱。对样 品进行分析之后，选择一个待测组分的峰面积（该峰的k值应大于5）作为测定指标，该峰面积值就代表100%的样品进入了色谱柱。然后逐步缩短不分流时间（如70, 50, 30s）分别进样分析，计算同一组分 在不同溶剂吹扫时间条件下的峰面积与第一次分析的峰面积之比，直 到此比值小于0.95，此时的不分流时间为最短时间。最后，再进一步微调不分流时，使同一组分的峰面积达到第一次分析时峰面积的 95%-99%，此时的吹扫时间即为最佳条件。对于高沸点样品，不分流时间长一些有利于提高分析灵敏度。而不影响测定准确度；对于低 沸点样品。则要尽可能使不分流时间短一些，最大限度地消除溶剂拖尾，以保证分析准确度。 对于热不稳定的化合物，最好用下节将要介绍的冷柱上进样技术。例如要测定试样中组分（质量为mQ的质量分数可于试样中加入质量为的内标物，试样质量为m, &为相对质量校正因子，贝上皿顼 用aWi = xlOO% = X100%mAsfi m般常以内标物为基准，则&=L此时计算可简化为p忡1 =空竺,万xl00%4As m如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合!
