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1、不同生姜提取物的急性毒性及体外抑癌作用研究,The study of acute toxicity and invitro anticancer effect of gingers extract,申请答辩人：黄玉艾 指导教师：卢静 2009年6月5日,内 容,试验结果及结论,试验方法,试验中的关键技术,生姜提取物的制备,背景介绍,前人对生姜的药理生理活性已研究的比较多，生姜能维持抗氧化酶系(SOD、过氧化氢酶、GSH过氧化物酶)的活性，显著降低大鼠的脂质过氧化反应，降低血液中丙二醛（MDA）含量从而具有抗氧化活性。生姜还含有较多的挥发油，可以抑制人体对胆固醇的吸收，防止肝脏和血清胆固醇的蓄积
2、。,生姜,预防和控制癌症的发生和进展一直是全世界积极探索的课题。前人研究的生姜抗肿瘤原理有抑制肿瘤组织中血管的生成作用、通过免疫调节抗肿瘤、对癌细胞转移的影响、通过细胞毒作用抗肿瘤等。抗肿瘤作用研究相对较少，研究时间也相对较短。至今没有人用MTT法从对肿瘤细胞毒性的方面对生姜粗提物的抗肿瘤活性进行研究。,生姜中某些有效成分抗癌作用研究进展,试验内容,制备生姜提取物急性毒性试验细胞毒性试验抗肿瘤试验,生姜提取物的制备,急性毒性试验,细胞相关试验,姜粉的制备,姜粉,50水浴3h,生姜醇提物,生姜水提物,10倍70%乙醇,煮煎3次,过滤,浓缩,10倍水,水提法和醇提法,生姜水提物和生姜醇提物浓度,试
3、验中的关键技术,动物实验的灌胃技术细胞培养技术,细胞复苏,细胞传代培养,细胞冻存,试验原理,试验方法,急性毒性试验,急性毒性试验选取健康小鼠60只，每组10只，为雄性空白对照组、雄性水提组、雄性醇提组、雌性空白对照组、雌性生姜水提组和雌性生姜醇提组。采用小鼠经口灌胃，按体重给药，0.2ml/10g，灌胃两次。,基于MTT法的细胞试验,MTT法操作步骤,试验结果,灌胃后性别对小鼠长势的影响,在急性毒性试验中，灌胃一周后，小鼠无中毒和死亡现象，通过分析灌胃一周后体重增长的数值，我们可以看到：空白组之间差异不显著，雄性组与雌性组间的差异也不显著（P0.01），但是与对应的空白组之间的差异显著。,灌胃
4、后提取方法对小鼠长势的影响,生姜水提物和生姜醇提物各剂量组OD值及抑制率,在细胞毒性试验中以10为底0.5的对数为组距，两种提取物均设置六个剂量组，作用于人正常肝细胞系。,加入生理盐水的阴性对照组细胞的状态,加入生理盐水的阴性对照组的细胞生长状态良好，结构清晰，边缘整齐，细胞外围有光晕，折光性好,不同剂量的生姜水提物作用后细胞的生长状态,不同剂量的生姜醇提物作用后细胞的生长状态,生姜提取物各剂量组OD值及抑制率,低浓度组的细胞状态与阴性对照组相似，毒性很小，低于0.1g/ml的抑制率小于5.63%,抗肿瘤试验浓度设置及实验结果,OD值越高说明肿瘤细胞活性越强，OD值越低说明肿瘤细胞被杀死的越多
5、，该组别抑制肿瘤效果越明显。,不同浓度生姜提取物对BEL-7404抑制作用,*表示与BEL比较P0.05,*表示与BEL比较P0.01;#表示与BEL比较P0.05,#表示与CXT比较P0.01,对于BEL-7404肿瘤细胞系，有水提一组，醇提一组，和醇提二组三个实验组的抑制效果好与环磷酰胺组。,不同浓度生姜提取物对SMMC-7721抑制作用,*表示与SMMC比较P0.05,*表示与SMMC比较P0.01;#表示与SMMC比较P0.05,#表示与CXT比较P0.01,生姜提取物对SMMC的抑制效果比BEL还要略好一些，有四个实验组的抑制效果好于环磷酰胺,提取物对人正常细胞和肿瘤细胞抑制率的比较,通过与细胞毒性试验中生姜提取物对正常细胞的抑制率比较，发现0.1g/ml和0.01g/ml浓度的生姜提取物，对正常细胞的抑制率均远远小于对肿瘤细胞的抑制率。,结 论,若能将生姜的天然提取物研制为抗癌药物，取代现在广泛应用的对人体有很大副作用的抗癌药物环磷酰胺，将会有很好的发展前景。,恳请评委老师指正！,谢谢！,
