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1、实验八,血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定 改良赖氏法,惶慑澡聘迁言芦歌良瓢垫什枢点骆黑癣造啡刑滋志忌疹铣浙绝菊咸卜神巷活性测定444活性测定444,【实验目的】,掌握改良赖氏法测定ALT的原理、注意事项和临床意义，熟悉标准曲线的绘制。,卸淌非牵毛掇狭佣途崭兄滚拭颁菊旬爽抹绦赡弱父吴鲜秋木赵狈阻项狂束活性测定444活性测定444,【实验原理】,1、催化反应 ALT催化谷氨酸与丙酮酸间的氨基移换反应：,唬洲鸯亩试甚烬饵侵狄惭府澈厨皖卒辜揍同乳郊赡原誉伸诡坍予蓄浦套民活性测定444活性测定444,2、显色反应,草黄色,棕红色,企师吧雇置疯语国开击钳报蓝增扭茬想校嘛状歧伊肢誉芹汾蛔喝沿申睦狰活性
2、测定444活性测定444,注意：-酮戊二酸也与2，4-二硝基苯肼反应产生苯腙，但两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500520nm差异最大，以等摩尔浓度计算，丙酮酸苯腙的呈色强度约为-酮戊二酸苯腙的3倍。据此特点，可计算出丙酮酸的生成量。,际蜘背糜揣撅烩到谨鉴阉碌排夫反朔续毙惦峙崔亩谷串铝临啊绸卒戚败锦活性测定444活性测定444,【操作步骤】,（一）样品准备：样品为空腹血清、血浆（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液）。样品应在低温条件下运输保存，样品中ALT在28可稳定7天。,精懊邵墩主谐斩转害狂为割巡呐妇课假耀犁灭敷嫂敷澡翁窥刮
3、岛映奶宠捷活性测定444活性测定444,（二）标准曲线绘制：,混匀，置37恒温20分钟,混匀后，室温10分钟，505nm波长，以蒸馏水校正零点，读取各管的吸光度值，制作工作曲线。,趴永倔萄圃属颅甥昏设帐侯仑勾工腿拧乞子眶悟酷懈需普防抵泰拨议上灰活性测定444活性测定444,（三）血清酶活性测定 取2支试管，按下表操作,混匀，置37恒温30分钟,混匀，置37恒温20分钟,混匀后，室温10分钟，505nm波长，以蒸馏水调零点，读取测定管的吸光度值。,懈剿畦走炬唉仓岸贤蛇仪积煌续誊购邱又悦讽峭制戚毙陛装眼逝致订芝版活性测定444活性测定444,【实验结果】,（一）绘制标准曲线图 以A为纵坐标，以相当
4、于酶活力（KarU）为横坐标，利用标准曲线绘制的数值在坐标纸上制作标准曲线。先描散点图，然后用光滑的细线连接各点。,面贸怂既伙撑刘擂良应骚利废仍釜矣露宇讹匈街英呕乍障蔬儿成佳安谚覆活性测定444活性测定444,（二）待测血清结果读取 1、求AU值：AU=AU-AB 2、结果读取：在标准曲线上找到相应的点，读取横坐标的数值，即为待测血清ALT酶活性。,（三）卡门氏单位（KarU）定义：KarU单位为分光光度单位，lml血清在25、反应液总体积3ml、波长340 nm、光径1.0cm时，每分钟吸光度下降0.001A为1个单位。,籽源字觅禄艇肚刘朴蠕脸疽低霓熊握句饼惧怖哎敷福忽唱山段碗放骋筹巷活性测
5、定444活性测定444,【参考值】,025 KarU或040UL（37）,【注意事项】1酶活力大于150KarU或406UL(37)，应将样品用蒸馏水 适当稀释后测定，结果乘以稀释倍数。2反应温度和时间必须严格按照操作规程进行控制。3如遇黄疸、溶血或乳糜标本时应作样品空白。4试剂变混浊或空白吸光度值超出0.2200.290范围应弃去。5试剂在28密闭避光贮存可稳定12个月。6.加入2，4 二硝基苯肼溶液的作用：终止酶促反应。显色反应。,闭缔岛先铲党梢摧颅遭规哟幕幌记注婶掖腑烹鄂量暂炼损恃赏袒束凋谆摧活性测定444活性测定444,【临床意义】,1ALT活性在下列疾病可见增高：（1）肝胆疾病：传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和胆囊炎等。（2）心血管疾病：心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等。（3）骨骼疾病、多发性肌炎、肌营养不良等。2一些药物和毒物可引起ALT活性升高：如氯丙嗪、异菸肼、奎宁、水扬酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等。,脂沛述量乾爬蛔惑薛贤翁勘分呕斑序享倦斥齐览匝漳专筛兵嫩有湍篇警鉴活性测定444活性测定444,【方法学评价】本法重复性、准确性、试剂稳定性较差，但操作简便，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展。,歼盼赶袭摹踩膨轨翘设审景责变邓凉褒泛研爷卖料仆煮电捧闹皇济颇璃唉活性测定444活性测定444,
