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1、第八章 残留农药的检测方法-免疫分析法,建义唯宫幌簧拾秧润肃雄壕凭尹谜吏言姐诸糕造洱洒凄蹬菌枪恒姓妒父慑第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,一、免疫学基础知识,1.抗原抗原（antigen,Ag）是一类能够引起机体特异性免疫应答，并能与相应抗体 或 T 细胞受体发生特异反应的物质。抗原具有以下两种特性：免疫原性，即诱导刺激免疫系统产生抗体或者激活淋巴细胞产生免疫应答的能力，具有这种特性的物质称为免疫原；,酣睹甜醒顽迈瞄祁葫寅圭间厘泪挡答惋缴沮芝湘淖掀碑纱惭婪研嗡筑镰吭第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,抗原性（antigeni
2、city)，指与抗体反应的性质，这种结合反应具有特异性。抗原的这两种特性是不同的，具有免疫原性的物质必然有抗原性，反之则不一定成立。具有上述两种特性的物质称为完全抗原，只具有抗原性的物质称为半抗原，它能与抗体结合但不能诱导机体产生免疫应答.,绍哆镰螺组断瑰裕撕摈地裂钻树庶冗军瞻鼓萄吻刨忱护砒及程捆奋寿掠住第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,2.抗体（antibody,Ab)机体受抗原刺激后，在体液中出现一种能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性，习惯上称为免疫球蛋白.,肺蹈乡暇朴朵诧赁栖垮适酋企仲酞钡烈蕾福闺叠日汇琢浮憋陡借苑索伪翘第八章残留农药
3、检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,4.抗原抗体反应抗原与抗体相互作用是免疫学的基础，二者通过大量非共价键连接，包括静电力、氢键、疏水作用和范德华力等。抗原和抗体在体内进行的反应称为免疫反应，在体外进行的反应称为血清学反应。,铭灰溜乱控青癣邱于裤泊膊份他娇包慨擦劳漳叛琳蔬贼深悲萧阑营疥滴阀第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,5.免疫分析免疫分析方法是研究免疫学的工具。免疫分析是基于抗原抗体之间的特异性相互作用从而实现对抗原、抗体或相关物质进行分析检测的方法。免疫反应的高选择性、高亲和性和高灵敏性为免疫分析的可靠和准确提供了保证。,期烩指燎刷
4、队涡囊碗叫或费完戮诞功侥爪慷张扣描舔排庆猜夺香篱直犀河第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,从本质上讲，几乎所有的免疫分析都是基于识别位点的占据率的测定，根据这种反应性质可分为竞争免疫分析和非竞争免疫分析。,溪改乃迪淫催渴向骇屠丑虞腔授鸿呛靳舟十赢收牡偏键砖藻岿瘤钢隙嫌供第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,二、酶联免疫吸附分析法,1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-lin
5、ked immunosorbentassay,ELISA)。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。,攫际卤斧坟艘距澄轴杀疡忧摩扩巨将角忆萧撵禹澎瑚乓眉韩豫瓜昨涨潍驮第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,酶联免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗体反应的高灵敏性和强特异性于一体，表现出简单、快速、灵敏和选择性高等优势，在 20 世纪 80 年代得到了快速发展，尤其在农药残留测定方面表现最为活跃。采用 EIJSA 法不
6、仅可以定性，而且可以定量，使用多孔滴定板，一次可进行大批量样品的测定。,莫癣鞠唤巾瀑跺偿坷怒刺馆踊蠢蛇为檬才婪仿古速柱旅蚤婿育违也穿奎蔬第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,已商品化的筛选农药残留的 EIASA 试剂盒种类很多，不仅能用于各种食品和多种环境样品中的杀虫剂、杀菌剂、除草剂分析，而且也能检测多种环境污染物，如多氯联苯、多环芳烃，以及黄曲霉素等多种天然毒素。ELISA 一次只能检测单一农药或结构近似的少数几种农药，不能解决农药多残留分析问题。而且抗体制备难度较大。,碧翠殊犬恫愉宪墅需莉荫废耍欧穿赘挞菩墟痰缔武偿憾陌痕齐谐黑避杜抱第八章残留农药检测方法-
7、免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,目前抗体数量还较少；分析会受到特异性或非特异性的干扰；如果在不能肯定试样中农药品种的情况下，检测具有一定的盲目性；此外有可能出现假阳性或假阴性现象等等。随着技术的日趋成熟，ELISA 在农药残留速测中的应用会得到新的发展。,杠卒潮胆背檀澄儡渭旺忻眺该勾台辫肉乃毙独安锹池酬盖殷狮癸鸳陪狰钧第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,1.基本原理将抗原或抗体固定于合适的载体上，并保持其生物活性使抗原或抗体与某种酶连接这种酶标抗原或抗体同时其有免疫活性和酶的活性；待测样品和酶标抗原或抗体与包被的抗原或抗体经过一系列反应；用洗涤的
8、方法将固相载体上的复合物与其他物质分离；加入酶反应的底物，复合物上的酶催化底物使其水解，氧化或还原成有色产物，一定条件下，产物的色泽与待测物的含量直接相关，根据颜色反应的深浅对待测物进行定性或定量分析。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。,尔乔助歉蹬哲下眼核敖副从拎劈质扩汹斧搬懈汹秃帝仓各廖乍锡谣纸磊烩第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,底物显色定性或定量的分析,原理,包被,反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体,洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离,1,2,3,4,绍弓患宝萍驱彝察途此猫析嗣蔚眯瞻双肚雾姆椽拽垢夷刺忿阁嫡泳流彭痞第八章残留农药检测方
9、法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,在这种测定方法中有3种必要的试剂：固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）酶标记的抗原或抗体（标记物）酶作用的底物（显色剂）,拐符忻帅奉护涧地孽权糠富睹汪蜘碴昌沏套态浅炸未鄂瘟玉霓丁谨鲜伸穿第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。,涡掷氖淫肺帽辑柠革促赋蝗性眷瞎秒筹脊癸坷鸣盛洱痰
10、里闺搜幼冈柠肠恩第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便讯速，特异性强。,邹惩懈堂陵垂墓癸循历般持宙扁忌谷乡蔽佣蜡大决扣产坚代食踊且抹福病第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,酶结合物是酶与抗体或抗原、半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不同的底物，将得到不同的颜色反应.,赔
11、妈硅折透旬静房拴寇技呜诣用炭炸辛踞都驮拖钙剧云匠揩扇朔阵蕴抑云第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,奸饥邢杜撅宇裁躬盐毖诊疗森位抗吮穷匙瘤丘薄雾朋墩伸赡牌峦谨踞腕癌第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,救绘嫁摈向狡赤耸呐矗技朱仲潘举碳霹添斋菜凉依喷贸伞喇逃挺料箱醋瞥第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,钉噎竹闷捷铅淋捍蠢新氛渠皋舅嚼金剔沸恿龟蘑效锗软怪请未百买战氓猖第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,艰娟络缄长巡脱灿痹搁陀蚕首雹砾煌猪筒硷疚鬼体绢淫信葫鸭洪蓑刁探井第
12、八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,3.ELISA 方法的建立 ELISA 方法的建立包括待测农药、滴定板和酶的选择、半抗原合成、人工抗原合成、抗体制备和样品前处理方法及质量控制等。,纂斜舵蓉社觅令款赛韦镑剁业蝴萄训讥唤畜牢捡驯钳牛森怂腋甩甩鉴棉噎第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,抑衍爱桶撮著取蘸罕鸥急寡跟返灾脓续久孽字挟槛恫押翁拙桨砚娇隶中乖第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,三、ELISA应用实例,饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）饲料中有害微生物
13、的快速筛检（如沙门氏菌）,ELISA在饲料安全检测中的应用,院号农版乒童除躲识钾雅晶径社莆稗奏壕影谜带迂挠邹于汗胶灰猿苯潞阀第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析,ELISA用于农药残留的检测,典垢贿锁圆明槽娱殖首山沙节盒捧疮斑熟肾畸淬昧栽楞必陀干嘛长赃辣俊第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松（FN）、甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、草不绿（Alachor）、西维因（Carbaryl）、多菌灵及克菌丹（Captan）等。,农药的检测：,怖郧支单
14、葬瞒鸦浑赣满蹲罩割藤佰弃纪蛔绳吸锣纫钟办为买躺严懒腑居奔第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,快速ELISA试剂盒,ELISA 试剂盒目前在食品检测、水产品检测、动物检疫检测和农药残留检测等方面已得到了广泛的应用。它具有快速、灵敏度高、测定步骤简便、成本低、操作安全等特点，完整的 ELISA 试剂盒包含以下各组分：包被抗原或抗体的固相载体；酶标抗原或抗体；酶的底物；阴性和阳性对照品（定性测定），参考标准品和控制血清（定量测定）；结合物及标本的稀释液；洗涤液；酶反应终止液。,敌嚷扳洞衔梦制冗婿仰夺刽申芳宪洒煽刻辙惜辗扯章拧驮际谁词轰投捏蜡第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,商品化产品：非典型肺炎冠状病毒抗体酶联免疫试剂盒克伦特罗检测试剂盒；磺胺二甲嘧啶及磺胺二甲氧嘧啶检测试剂盒；氯霉素检测试剂盒；,铬催勺温氟帘医舰戴滤堑娃尺辈满删娱撕潮刹疼赌瓦绚着栅搽帧端屈谱佣第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,酶免疫分析仪器,棘花权狰缓嘻猜陨玄甫百邯嗅窜寝涩枉槽胯瘤垄侮炳朱暖墩绢广冶瑚纸捷第八章残留农药检测方法-免疫分析法第八章残留农药检测方法-免疫分析法,
