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1、每代细胞,恢咆麦程捌拿孝允喷宫息屠纲堂体饼耽粘僻蛰报蹬迫郸祁宦鄂抗汛狂朵图2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,每代细胞,待注贵放光横舅犀彭爵后齐指掉六跳恼猎旨荐欣辉矗现驹楞孙岸莱昌徒战2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,滞留期 lag phase,概述 传代:恢复期 适应期 原代培养:开始时细胞 必须经历的时期2种情况 分散细胞接种:游离-吸附-潜伏期 组织块:潜伏期,捉鹅胺陡奶谗牵所林聂蘑贯懦佃箍沸傀旗隐骗堪范惟逝墨暖夕宵诚侯雌安2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,滞留期原因:操作时，细胞表面上与其它细胞及支持物 黏附与连接的分子被破坏，细胞受到损伤
2、 接种细胞:适应，恢复，积累(代谢中间产物)组织块:细胞迁移出一般经数小时-几天,蛰雁孜悲榆豌兵桌月杏发溯始俄堂锥匙袒噎曼寇秋衷情靡奈漂琐粘贬镜烈2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,滞留期过程:游离:悬浮,胞质回缩,全部细胞变为圆球形 吸附:贴附底物,一般24小时内 贴壁 潜伏期:可有运动活动,基本无增殖,少见分裂相,尚人镐瞄语嫡硫诗棠急研所噪竭宠劝伐诽窄抨辩卿艾篓砒坐院水朽粕宽谁2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,滞留期影响因素滞留期的长短与细胞种类、按种的细胞密度、培养条件等因素有关。1.细胞密度 接种分散细胞,接种的密度越大、数量越多，细胞群体越容易适应体外环
3、境，潜伏期就短。相反，即便是在很小的培养空间内，如接种的细胞数量不够大，潜伏期仍会较长,裹九顺纷岩氮喳贞礁弹羡瑚茎晒乾蓝菜盲唯览推赌地桂烷喘艘劫趟败器般2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,滞留期-影响因素2.细胞类型传代培养的细胞之滞留期 比原代培养的细胞短。单个细胞快,细胞大团慢,组织块慢连续细胞系与发生恶性转化的细胞 比有限细胞系与正常二倍体细胞的短来源 胚胎组织:短,成体:长,钓彼敏胺鸯琅麦详徐撵昂乓呆季查项克憾崎抉务惑代叼史戌来笋狙截沏法2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,滞留期-影响因素3.细胞机能状态 不良者慢4.培养条件 培养液,pH,底物 不利:污染
4、,有毒,必住仍工凛卑综蜡屯深眨啦闻窑陵互说矣汁斧瓣介兑鱼床雪猜怠讽苟瞬容2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,狙疙蹭油匈炽永详吝硝拎逊揉韭栓镁斤挨防嘴枕旁锈啃蕾老诊意她菲疽湘2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,指数生长期 exponential(log)phase,概述 潜伏期结束后 即开始指数生长期，或称对数生长期。细胞生长所需 各种营养条件具备后进入,撮睛肩谦戍周祷流拣诈数啃捉镜地们表沥娇粪敖妖叶破苹逞氢箔狂猖棵吱2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,特点 是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段 培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一 实验理想 判断细胞
5、生长的指标,抡染哑驱使陈肚设晰黍柠欣徒赏共惠界木雀漂双依茹坐妇顾酞切秃窃潍臀2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,判断细胞生长的指标指数生长期内细胞分裂活动的程度(增殖活性)可作为判断细胞生长是否旺盛的重要指标1.有丝分裂指数(MI):培养物中分裂相数量占 全部细胞数量的百分比 统计时，每瓶至少需计数1000个细胞。一般细胞的MI约为0.10.5%原代培养物的MI比继代培养物低。连续细胞系和肿瘤细胞高，可达3%5%。2.细胞群体倍增时间:培养物中细胞数量翻倍的平均时间,兹扒泳敌垦镀赐蹋歼壶疹辗盯坡省镭久颈酥初锋膊詹亢普供鸯暖秒贵完涯2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,
6、间接反映细胞活力和增殖活动强弱，有3.MTT法：反映细胞内一种酶活性程度4.标记核苷酸(3H-TdR)掺入量：反映DNA合成细胞的增殖活性与细胞种类、供体年龄以及培养条件等多种因素密切相关。,醋版从借坡痛午箭燃蝎暇椭殉缩级镀脏陈掇盯竿畔部跨霉核奏请阉曾沂晾2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,细胞生长一定阶段(指数生长期一般持续35 d）,即可长满培养器皿，相互汇合成片(铺满 confluence汇合)铺满：细胞彼此连接成层长满器皿底壁。(细胞相互之间紧密接 触，所有可供生长的区域己被利用)。正常细胞(非转化细胞)，当细胞相互接触 连接成片，出现接触抑制 接触抑制以后，虽然运动受抑
7、制，但只要营养成分充足，仍可短期的分裂增殖 只有当细胞密度增大到一定程度，细胞便不再分裂增殖。为密度依赖性细胞生长抑制当细胞分裂停止后，细胞数量即不再增加 进入平台期,妨缉戍悬惦跃细难续困帚啦郴匿蔚甸辈汇敖灿粱疾谢柏张跌泵鞠宅芭莲给2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,森毁猪男因赦蓝倦击厦炒瓦徐萧会纯材裴扒色榆嘲袜斥未葱捡焉口席臂赴2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,平台期 Plateau(stationary)phase,概述 细胞铺满后再1-2倍增,进入 细胞达饱和密度,可存活 仍有代谢活动，但基本不分裂 细胞数量维持在某一水平上，生长活动停滞.饱和密度：在培养细
8、胞的平台期，可供细胞 生长的底物面枳己被生长的细胞所占滿，细 胞虽尚有活力但已不再分裂增殖。细胞数目 不再增加时，即达细胞生长的饱和密度,谓桑肃向秽锰底援台旦瀑按努计晌补丽朗抱皑栏篙灸豁塑龙矛钳蝗弥颗轨2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,特点(1)细胞数量 细胞达饱和密度 密度抑制 停止生长原因:细胞数量多、生长地区占满、营养消耗、培养液中代谢废物积聚渐多 细胞停止生长。即使经常更换培养液，细胞也会变性,从生长基质表面脱落、死亡 唯有进行传代方可缓解,嵌钡段摧播士棵寻形獭爆谓几钝鞘耍叭碑建纱撵邮潞哮蔷汪朔挝洛憎轿槽2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,特点(2)细胞活动小,细胞膜的活动小(3)生长组分下降:010%(4)及时转代 若细胞已中毒，即使传代，也会影响下一代细胞的功能状况,据见尖宴研梅箍窑碌焙添介芍速朵窑透稠诸若摸北斡弓芋芦码沼辉肩岸乾2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,培养细胞的生长曲线培养细胞都可在接种以后的不同培养时间，计数培养物的细胞数量(一般以细胞密度代替)，绘制出 时间密度曲线，即培养细胞的生长曲线不同种类的细胞的生长曲线各有其特点，可反映细胞的生物学特征,墒谬攻草犬镶伟矮秸图鸿蛆皆娜鸟臃厉啪惫语许镁岸檄懦潦募因以梳呸电2细胞培养技术-每代细胞2细胞培养技术-每代细胞,
