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1、超氧化物歧化酶（SOD）的生产,生物技术 林志豪,拙某丽息丢铸搐欲耙焙呈讳澎帽撩盐镑颈碗婿乐图庶苏岔悯疥驹膘寿磊齐超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,目录,一.SOD的概况二.SOD的运用三.SOD的生产四.SOD使用及生产时的注意事项五.注意事项,何妆算复态倚獭舱带窜御档旗爹吹渺佐北孜衣腔返择眩酮孟鸣钥捐若苹澄超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,一.SOD的概况,1.超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把
2、有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内 6性极强的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧链条。2.SOD的分类 按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种,搔拈尊琴茶必亡笺脂涪威鸡般械育暇枫邱涧别鹏伶钥鞘瞒允厂屋嗡突猜台超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,3.SOD的理化性质 3.1 SOD对氰化物和H2O2的敏感性 3.2 SOD的吸收光谱特性 3.3 SOD稳定性及影响因素4.SOD的作用 1、抗氧化 2、预防慢性病及其并发
3、症 3、抗衰老 4、抗疲劳 5、化疗副作用的消除剂 6、避免手术的二次伤害 7、化解妇女的氧化压力危机,皱郡绞觉陈灭浦垛的吸擦弓柱呆艰媳仿伪杂储疲句泅膊互碘擎败煤才酵蔷超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,二.SOD的运用,1药物类，主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者；2用于生化制药，作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上，具有极强的抗衰老，抗肿瘤、调节人体内分泌系统作用；3用于化妆品类，可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以 SOD为主要成份的产品风靡世界，引发了化妆
4、品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真；4.用作保健食品、饮料、如SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销!在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统。,蔷蚀旋县虹坤中匹吟呛权鞘江宿洛施隶倒候揪赫琉键数蹋纳揖滔偷裔棘匆超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内的SOD活性越高，寿命就越长。,晨趋炯稀呕抓舒疵箩
5、帐阜腑捷扭邹爱刘牺挎壬剐迂驾妖诚岗丰硷刺其舞榜超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,三.SOD的生产,1.SOD酶的提取 称取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞 后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸缓冲液（pH7.8）15ml，继续研磨20min,使SOD酶充分 溶解到缓冲液中，然后6000r/min冰冻离心 15min，放弃沉淀，取上清液。2.去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积的氯仿乙醇混合液 搅拌15min,6000r/min离心15min，放弃沉淀，得到的上清液即是粗酶液,获如脂租残镐聚秀性障门昼区遇鄂颂茫继暴包耐裴仑挛黍猿蜒爵玉钉恭潜超氧化
6、物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,3.SOD酶的沉淀分离 粗酶液在搅拌下缓慢加入固体硫酸铵至饱和浓 度60%，持续搅拌15min，6000r/min离心 15min，得到SOD酶沉淀4.将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液 5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉 淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯 化，然后超滤浓缩。5.用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量6.将浓缩冷冻干燥后即得成品。,宴估悸抒披住押箕虑杭治甥嗜瓢渣蜕用义经都反黍琶臂潜穷谢噶垂属闲现超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪
7、,四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定,原理 连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放 出O2-,生成带色的中间产物。在自氧化过程的初 始阶段，黄色中间产物的积累在滞后30-45s后 就与时间呈现性关系。中间产物在325nm处有 强烈的光吸收，在有SOD存在时能催化生成O2 和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，通过计 算就可以求出SOD的活力。,冈次勒煽果宠嘘良岿擎亏哨缎泉潞拟廓升赫福鸥丘肥趴涯酿豫督障荐找饮超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,仪器 紫外分光光度计、pH计,离心机试剂 0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用 0.01mol/L
8、盐酸溶液溶解并定容至500ml pH=8.3 Tris-HCl缓冲溶液 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液:NH2C(CH2OH)3 121.14 取12.114g,溶解，定容至100ml,缕戒堤鳖椭矾疥冷谆酣芜厦绽茶辜尝扣快稠访结戳尧之池蛰宏冯赛响阑鞘超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,0.1mol/L盐酸:取8.6(9)ml浓盐酸，稀释至 1000ml 5 0毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶 液 19.9_毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100 毫升。(保存温度:常温密封避光保存),帽武扣砂歹通剖镊决溯臼乌镭帆芭枝催亦焊
9、吞珠怕鲍贡麦料区长蜡混裂点超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,测定步骤 1、称取6g样品，加于现在冰箱中放置的缓冲液60ml(样品的10倍，视情况定)，在冰浴中研磨成匀浆，四层纱布过滤，滤液经4000r/min 离心20min,取上清液用于酶活测定。2、连苯三酚自氧化速率的测定 取4.5ml缓冲液，在25水浴中保温15min,加入10 连苯三酚液，迅速摇匀 空白：取4.5ml缓冲液，在25水浴中保温15min,加入10 缓,锗尊起尸兜俗云平尽十滞掳穷邯柱彼娠谅盗熔附侥盒担渠寥隐吞疙肩侵兜超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,冲液
10、，迅速摇匀倒入光径1cm的比色杯中，在325nm波长下于恒温池中每隔30s测A值一次计算线形范围内，每1minA的增值，此即连苯三酚的自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min3.酶活测定测定方法与测连苯三酚自氧化速率相同，取1.5ml缓冲液，在25水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10 连苯三酚液，迅速摇匀空白：取1.5ml缓冲液，在25水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10 缓冲液，迅速摇匀计算加酶后连苯三酚自氧化速率,范支执盯坤辙胆鸳硕柠馁芹雏悼梆陛氮罚脓材腥绊博辑痈裁渤套衫住诧滓超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,4.结果计算
11、样品酶活单位表示，SOD酶活单位（U）/g鲜重样品酶活单位=式中酶样品在325nm处每分钟光密度变化值 V反应液体积 n酶液稀释倍数（若酶液足够多，可不稀释即n为1）,凹磨郁内董胆顷掐散灵线蛆口康偿箭了嘘呛埂退给草醉牺兢赖狭讨驶媒奴超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,五.注意事项,1.SOD的安全性大量试验和临床应用表明，无论何种给药方式，除罕见的超敏反应外，SOD对人体无毒性。虽然SOD是Mr在30 000以上的蛋白质，但却未发现具有抗原性，其原因也正在进一步研究中。2.SOD生产时的注意事项 2.1 在破碎细胞时要注意安全，一定要破碎的彻底 2.2 PH的控制力度很重要，以及在实验中的温度等 2.3 要学会正确使用分光光度计,携十株滥仙笨逻渔扔哩嘶谴侍尝鳃娜冤歹嘴育驱狐端婴索墅宜烙剖卵膛物超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,谢谢！,折滥毗丸侍娩摆钡皮结挥仆首荚磕怀溉痹毖冕饿计帚柠栏者抱颇缠帖蚀炕超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪,
