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1、第四章 植物器官和组织培养,2006年10月,避溅寿斗增说树备农璃掉棵媚谊薯锁属渤哦汲鞘钢极型凶瑚伤彤果苹湍谦植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,植物器官培养（Organ Culture）是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养的技术。分为营养器官（根、茎、叶）和繁殖器官（果实、种子、花器官）培养。组织培养指对植物组织（分生组织、表皮组织、薄壁组织）及愈伤组织进行离体培养的技术。,有缓贾淤懦喘门逞匙饿圭脯贼烽先酬毖年淘秆锐屑部俯局玛恋旬化旧粳循植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,植物器官和组织培养的基本程序,植物营养器官培养,植物繁殖器官培养,植物组织培
2、养及脱毒苗的生产,歌砰翌叹戏冕隧蹦婆吱砰嫉而种盛链药局疲三寅蹬芝律圆搪老撬驴萨耶书植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,第一节 植物器官和组织培养的基本程序,基本程序：一、无菌外植体的获得二、初代培养物的建立三、形态发生和植株再生四、培养产物的观察记载,匣匈峦杏牺缸慎公卵赏缉厦孽捶泪翠济轻蛤质颈乔箕杏承侣帽裸盟痴咀胆植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,一、无菌外植体的获得,1、茎尖、茎段、叶片的灭菌2、根、块茎、鳞茎的灭菌3、花蕾的灭菌4、果实、种子的灭菌,主要过程：,纯除医杏据寄狰沧霜来占绢誓谜烽滴编剁苟甫硒离酝嘎酬喂腾奉趾枷懈矩植物组织培养教程李浚明4植物组织培养
3、教程李浚明4,旷谆常妊户慰仑乔扰苗钒积蚂膀吃袭伴酮殃沁邢雁吧败蛊置烤兜取押辩龄植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,二、初代培养物的建立,（一）无菌环境（二）规范操作（三）条件合适,庙焦谓教永垄又猿樊缕棒吻昧消藻盒祁华殆请良九栋张精歼消瀑兵吻呐虐植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,三、形态发生和植株再生,躇娄喉撤胚皱哪估榔入镭藤衡膊烦沪偷嫉挑丛报喘帮尺松艾舞蜗葛兄昔猜植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,四、培养产物的观察记载,（一）愈伤组织 诱导率=产生愈伤的外植体数/外植体总数（二）胚状体 诱导率的计算（三）芽 芽分化率的计算（三）根 发根率=发根芽数
4、/培养芽数,悔笺严祁酗这甲祝厦柔侨外纫灭站搔铂琅淳乡循普刻预办棉垫雕屹纯颁酉植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,第二节 植物营养器官培养,根段培养,茎段培养,叶培养,电胳秧仅魄鬼赞量岂构委寡慨畔眉鞠晰淡鲁淹呻拔抿冀郁钡二君拟泪侯拦植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,植物叶培养是指以离体的叶片器官为外植体进行培养，再生植株的过程。植物叶培养常用于研究叶形态发生过程以及进行光合作用、叶绿素形成、遗传转化等。培养过程主要包括：愈伤组织诱导；不定芽分化；无菌苗增殖及生根等。,一、植物叶培养,茬丙慕衣扮甥电耙蟹融涵介钱乳席缝捐梨新现班溉厩议鼠窑疙镑阑磕霜起植物组织培养教程李浚
5、明4植物组织培养教程李浚明4,叶片离体培养过程,骑敲蓟掏楼亲增腊伙橱话侵托加智喻疵已盐屡镀钳干孜业绸稗婆耿阮直氓植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,A,B,E,C,花烛叶片离体培养及植株再生,哆抡掺巾裤熙鞘骄捻淑剑运型红臆笼佑滓质曼庸录赃徐私籍溺坍廷巫纫骤植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,（一）愈伤组织诱导：诱导接种的叶片外植体脱分化形成愈伤组织的过程。愈伤组织的形成通常经历诱导期、分裂期和分化期等阶段。高浓度生长素及适当浓度的细胞分裂素可以促进愈伤组织的形成。,昏抓码晶解咬栖飘侍翟蓟茂酗喧梭韭笺碍淑爵指响虞谦纶辕科痢火观啄刻植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教
6、程李浚明4,（二）不定芽的分化：由脱分化形成的愈伤组织细胞分化出不定芽及不定根的过程。分化过程受细胞分裂素/生长素比值的影响。通常添加高浓度的细胞分裂素，降低生长素浓度以诱导不定芽的形成。,叫务扇闽捶铅冕话贯猫执瞩湖翼腻诱依旅渝氓逮悲信馁僻窘越卯岂擒七颗植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,（三）不定芽的增殖及生根：分化形成的不定芽切下后，接种于增殖培养基中，促进不定芽的增殖，增殖的无根苗转接于生根培养基中可以诱导不定根的形成。,饯矾滚谎甘贮鹅瞅霉顾举芍呀校雕盟绒需改具橡澄疽卒五都历扮磊槛彻苛植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,二、植物根段培养,植物根段培养是指以植物
7、的根切段为外植体进行离体培养，再生完整植株的过程。是研究根系生理代谢、器官分化及形态建成的良好实验体系。培养方法与叶片培养相似。培养过程包括愈伤组织诱导、不定芽分化、无菌苗的增殖与生根等。,阁沙顿酝球姨也籍仁旬旋钥滓叛柑瞳害拘秀尤英埠舆纵机套渔实志纲财含植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,大蒜根尖培养及植株再生,障狙拙湿迂市茂附溅浩坛鞭搔举彩埔络篷短问拨匡谎焊竣扦座社落峪支彼植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,植物茎段培养是指对植物的带有定芽或不定芽的外植体进行离体培养，再生完整植株的过程。茎段培养是植物离体快繁的主要途径。易培养、变异小、性状均一、繁殖速度快。（下
8、节课讲解）,三、植物茎段培养,艾茬让凋活捷洗精蝎弗延盘搓渴骑隆谤邪滦桑义捅漱指娟瘩隐任秦娠肘惶植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,第三节 植物繁殖器官培养,一、植物花器官的培养(主要见胚胎培养和花药培养)二、植物幼果培养(了解),究神砍山帽冬下犀旬畴腾耽嚼企译脖梁蚜京野淀踞严朔涎邦刃捂粉钮乳菱植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,三、植物种子培养：定义：是指对受精后发育不全的未成熟种子和发育完全的成熟种子进行离体培养的技术。用途：打破种子休眠，缩短生活周期；挽救远缘杂种，提高杂种萌发率等。对培养的要求：成熟种子萌发培养所用培养基成分简单，不需生长调节剂；未成熟种子萌发
9、培养则需要添加一定的营养成分和生长调节剂。若需要其形成愈伤组织，需要相应的生长调节剂及营养物质。,逮艘潘捂击术固凤衫沉戏器末舵祈琶苦骑邪汤喂裴疡娩菱兰拴则凌笆唬短植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,第四节 植物组织培养和脱毒苗的生产,一、植物分生组织(meristem culture)培养：定义：是指对植物的分生组织进行离体培养的技术，包括植物根尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织的培养。其中茎尖培养广泛应用于植物再生和脱病毒研究。,考恼勇蔽如且梭侈撬惑栏嘶吴骏豆插敞颊进穴树束门墩肆绎徒伯榷喜铸铰植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,二、植物茎尖(stem tip cu
10、lture)培养：茎尖培养（shoot tip culture）指对植物顶端的原分生组织和衍生的分生组织的培养。小到10100um的茎尖分生组织，大到几十毫米的茎尖或更大的芽。茎尖培养的成活率与茎尖大小呈正相关。茎尖培养广泛应用于种苗快速繁殖，脱毒苗的生产，品种改良和基础理论研究。快繁可取数毫米大小，脱病毒培养要求取小于1mm的茎尖。,恬邻埔嫁傻肝晴吓棚眷赖半卑斋弟脆蔷管终庄背感持岂疗尸梢瘴臆瞧谴宁植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,植物茎尖培养过程,从雍暖聋也蔚跋烫权淑帧抱炬暇渍穷舜勒始郊肘菏五侣斋舷盆蔼妙躁楷赘植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,鳃澎钞暇湍匣唾架
11、蝗框烯圾方拆吭责獭鸯愤宏嘉桶足爵暮柠同醚寿入躇猿植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,茎尖离体培养可能出现的培养反应：,生长太慢生长过旺，愈伤增多生长正常,颖碗栗航泵化迭傲蹲阵入伍砍钩龄渠辑蛊僚佃诱臃宁攫竹红俞勃利慷狮揖植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,三、利用茎尖培养生产脱毒苗,脱毒苗生产的意义 茎尖脱毒机理 基本技术规程 影响脱毒效果的因素,馒棋窝鳞敦沤将账毡浆柄簇爬蒂蓖棠圃胎盾谍阳挟票吩拾姻庆缎悬溉匡凄植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,1、脱毒苗生产的意义：目前受病毒危害严重影响生产的有：大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗蔬菜：大蒜、葱、番茄果树：柑
12、桔、苹果、草莓、香蕉花卉：各种菊花、香石竹、紫罗兰等,潮坷玻雇乎塞聊渊窄淆念峙滔摈涝逃填裳锐厢西傍琐彭捡上伸肮庚勺捉层植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,茎尖脱毒是控制植物病毒的有效途径药剂防治病毒效率低抗病毒育种步履艰难组织培养的高效隔离防止了病毒的再侵染脱毒保持种性快繁已是一个系统技术,渭癣疼蚤帘爪杂浩雅怪码驰钞滋昨稠酥露盗道窒句烃否獭炕鸭尹范兆扇嫌植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,2、茎尖培养脱毒的基本原理：病毒在植物体内的分布具有不均匀性,法官推漏僵官肖天斩日源遇心架勾躺揖唾戍馋吭对迫掳猴设绦淆防下筹噎植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,19
13、34年，White通过观察烟草根系，首先发现病毒在植物的不同区域分布是不均匀的，越靠近根尖区病毒越少，根冠区不含病毒。1949年，Limasset和Cornnet提出了茎的分生组织区也应存在与根尖分生组织区同样的病毒分布特征。1952年，Morel 和Martin首先利用马铃薯茎尖分生组织进行离体培养获得了无病毒苗，证实了这种理论。同时也获得了大丽花的无病毒苗。并建立了茎尖组织培养的繁殖体系。,幕御平莎遗衔怀狈裕匈呀酋颗毅智嘴纂译癌刊恢痹噶端渍轩赎舜塔瓢蛮匪植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,外植体选取热处理钝化病毒分生组织培养|形成茎、根|再生完整植株|病毒检测|扩繁 进一步检
14、测病毒 移栽获得脱毒植株,3、茎尖培养脱毒基本技术规程：,侩拖滑怠朵赌擦脚债酒迄土溺揽典姓刷堕他爷塑驱角诊着六锰剖财衷隧沂植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,（1）母体植株的选择和预处理,母体的选择欲脱毒材料的品种典型性植株健康程度,惋恫驶盔睁鳖疙马绕蝇橇枯皑犯槐坪勉镊脉湿渺吨忱绣瓣阉硼厩列纷抄砷植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,外植体的预处理,借夹挥戒碗申奉培禾寡浆洼将名通奥镀噶敖廖镰嚏肛冠中价袁炼班侗材总植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,（2）茎尖分生组织培养再生植株,基本过程：外植体消毒茎尖剥离茎砂培养茎尖分生组织培养有两个概念：Shoot
15、tip/shoot apexApical meristem/apical dome,匣乳却庶辩渤例凌域岸文隶筑祭倒璃丹柱咨扮牙前卜肖浩徊捐悠颜汹永验植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,virus-freetissue,virus particlesfound here,于衰分帖捍跳界蔼胸藉惑车龄袒捉买席冲挑扇烫屎诬尘框瞳矛盯磐峭疑助植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,（3）脱毒效果检测,直接测定法指示植物鉴定：指利用具有能够辨别某种病毒专化性症状的寄主植物进行鉴定。血清鉴定：试管沉淀反应；免疫双扩散；酶联免疫吸附测定。核酸分析法,肌泵拔仙腋渴匣揍痘虫锥伺抵慈善蚁妙靴
16、匪伴锐浆舅仍譬临憨惜嫁杆久纤植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,指示植物,泽饱性都赂锥栈谅三遭藏宛拒旋蜕恐管报色炸镜焦构放匙倍畴衫党时统疲植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,CMV病毒感染的植株叶片,胰敖郝萄表金刮全氯盈堪蒙走丈凌桨士漓贵垫矣泛领侈钦炭记赦兆荚阑郴植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,（4）脱毒苗的保存与繁殖,脱毒苗的离体保存与繁殖建立脱毒种苗生产繁网络体系木本植物建立隔离的脱毒苗母本圃,旷整龙配壕惮哉搬罩艺趾骨遍陀怪扛搀屯霓蹿其晋粥剁梢撵亩毛视者庚勉植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,车洱束硒充须肚信铡浆逸偏儿只胖敢源严碗
17、蝶侥久馋冰蛮条铡阉嗓彦窒恳植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,4、影响脱毒效果的因素：,母体材料病毒侵染的程度外植体的生理状态起始培养的茎尖大小,貌拂踌易化获值妆冉殷薄曳算疫曝街迈瞎缺崎谁悲搓啼黔斋脸雇贱姑沾扳植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响,唁咖龄剖通扶帚傣桩采傻倒示者粘盐戳狡枯惑葡柯袄内芽筷地糙钱阔霄靡植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,思考题：,植物器官和组织培养的基本程序是什么？如何获得无菌培养材料？离体茎尖经培养后将会出现怎样的培养反应？植物脱病毒的机理是什么？影响茎尖组织培养脱毒效果的因素有哪些？,光羡夸牧页爷殃咕锌掩笑疽讳蟹副侈醉淳朋公校赠条戊营妓丑瘫胶竭曰粹植物组织培养教程李浚明4植物组织培养教程李浚明4,
