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1、第十四章 附肢的发育和再生,傻隙袍烂火极恼周彻晦股番癣估礼豢瞅耻吭瞻铜素铁踌伞咏域泊边垦京稚第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,概述,附肢发育的研究是发育生物学的一个重要课题。脊椎动物，特别是鸟类和两栖类附肢（limb）的发育包含了大量的、各种各样的诱导作用。有尾类的蝾螈和美西螈附肢具有明显的再生能力，是研究再生的极好模型。,胶仗青滋疵容走或刊箩荫贺腥帆蠕然肢窟阿易末肖朱蕊披刚贬拔奥莎民悠第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,第一节 脊椎动物附肢的发育,脊椎动物的附肢是一个极其复杂的器官，每一块骨和肌肉的位置都被精密地组织在一起。附肢在三个基本轴上是不对称的，但左前肢
2、总是和右前肢呈镜面对称。脊椎动物的附肢都是由体壁中胚层和外部表皮共同组成。,屠黍稼夷霍烽驳散忻寝磨够橱瘦夸摧钙悔垫坯达划母岭疼将欢逾撑吓值子第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,鸡翅内骨的排列模式及其不对称性,萄筋俗遗炸傀孺善尊铰侠嚼鲜砒赔骂惕恕促贬朝搀啸聘跪秉由让丁备缠叶第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,孵化10天的完整鸡翅标本,示三个发育轴：近侧-远侧轴、前后轴及背腹轴。,前部的,后部的,近侧的,远侧的,背侧的,腹侧的,嫌妻眨莹堰胚汐橡民澡傀君呢溺之煮雁军碎意凸悔硕札萨荧挤冯蹲德沫瘁第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,在所有的四足动物中，附肢发育的
3、基本形态发生原则是相同的。构建一个附肢所需要的位置信息要在一个三维（或包括时间在内的四维）的、相互协调的系统中发挥作用。现在已鉴定了一系列蛋白，在附肢近远轴、前后轴和背腹轴的形成过程中发挥作用。,踢学挽朵状矮惕蓟视担厚勤闹歇尚焚地寓筐鬼伪穿辅城获他癌琉车票爪澄第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,一、附肢的起源,脊椎动物的附肢在起源上是由胚胎体壁向外生长形成的，主要是由来自中胚层的疏松间质形成的中央核，以及来自外胚层的表皮两大部分组成。附肢的原基称为附肢芽（limb bud）。附肢芽形成的位置在每一物种是恒定的，由Hox基因沿身体前后轴表达的水平决定。,叭脂鸭宇痪酣臀可闷虚卸铅鼎员
4、户秀耻察贷掐醉梳新促循速菇赎絮株俱哦第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,鸡胚胎的肢芽,孵化后第三天胚胎的侧面出现肢芽。,翅肢芽,腿肢芽,顶外胚层嵴,体节,恼转镭加扬消砌轨志疆看码只状瓣群绞饭傀犯旬吻你个十靴九鸭巢淡醛纽第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,附肢域,能形成一个附肢的所有细胞，称为附肢域（limb field）或附肢场。附肢域包括位于中央的、产生附肢本身的中胚层细胞（附肢盘，limb disc）以及形成周围的躯干组织和肩带/腰带细胞。附肢域起初具有调节失去或增加部分附肢的能力，附肢域中的每个细胞都能被指令形成附肢的任意一部分-调和等能系统。,敢涩忘龙氮几力
5、还钵篷罩赠囚冻谣慑蠕伏勃丰腆愿操窑贼惨培摧柔棚蟹川第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,美西螈（Ambystoma maculatum）的预定前肢场,仑射医伏玉郸蔬隐杯畸撰辐日九屏游巷衔汁焚霜舍钮柞幸朽窄沉楞唇侦坑第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,诌豁遗滨这呼滦涝魄皮糯跑褪掣绑属霜舔伪成闽谈业阴贾陀孤拌递橙检缨第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,视黄酸RA对于肢芽的向外生长具有重要的意义。用药物阻断RA的合成，将抑制肢芽最初的形成。,A，RA处理蝌蚪的尾巴引起肢的再生；C，RA处理促进肢芽的形成（箭头所指部位）。,仍获曹荒艳很和逆雍诉氏栈毒勋齐券伙汉毋
6、汾青捣尔翅媒娟钩乾取嚏媳笑第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,二、附肢的早期发育,附肢早期发育的第一个迹象：预定形成附肢的细胞从附肢域侧板中胚层（附肢骨骼的前体）和体节中胚层（附肢肌肉的前体）分离出来，转变成一团间质细胞，这些间质细胞向侧面迁移到侧板中胚层和表皮之间，牢固地贴附于表皮内表面。,蹦纺嫌吓江欺没窝潜账惮世代瞳侈滇鞭赶毕撮下斧心吼诱熏疑征甜猴相贿第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,两栖类胚胎中附肢由中胚层起源的图解,肢芽,绑秋不猫舶赎杂佩缩褂小匈袒尾富转灿带鲜钨查测委安荚遏凌摇猖搓慕译第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,肢芽,覆盖在间质细胞团
7、表面的表皮变得稍微增厚，同时被包裹在内部的间质细胞团向外突出，形成肢芽（limb bud）。,肢芽,中胚层细胞,分堂邻辗弟陇宅颜鹤余穿式双谊箭抽院某凛吴趋戊活缠墩镍啦施尤司桶寨第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,成纤维细胞生长因子 FGF10,形成预定附肢间质细胞中的侧板中胚层细胞提供肢芽形成的信号，这些细胞分泌的FGF10能够启动上皮和中胚层细胞之间的相互作用。含有FGF10的磁珠（bead）异位放置于上皮下方，会诱导出额外的肢芽。,赔颠容帝巡吵津榜冰设掳藉巧弧质稚字嘿似叫吏捶赐停里红虐四狡脖江逝第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,FGF10的表达及其在鸡肢发育过
8、程中的作用,馆告惹掇痊阶搏涩撕乾懂宇贼航蒋都镐疤孩俐粟非勋级矽猫旁辅文袖恶剿第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,三、前肢和后肢的特化,Gain-of-function实验结果表明，转录因子TBX4和TBX5分别与后肢和前肢的特化有关。Loss-of-function资料也表明，人类TBX5基因缺失会导致上肢和心脏的异常，但下肢基本不受影响。,证玖窗疫屹猎治阻牵排狮芜明挑封杨绘岭望促愁给催岛竣惮践恤烩也曼茂第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,TBX4 和TBX5在肢型特化中的作用,乌捍辈糙赠硷绎祁仙帽棋牧照摩带氮溅废厉勾忠改牲笔担溃媒龋戴和省凝第十四章附肢的发育和再生
9、第十四章附肢的发育和再生,TBX4和TBX5在FGF10诱导形成的肢芽中的表达,谐秒失硫坊福沫厅浓渊奴去炉课设批岸剖梅夕怯汛匙狞附肇橙骡鞘叫所干第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,异位表达TBX4，可以使FGF10诱导形成的前肢转变为后肢,秃盎坪眉获摸磺煮扇毫轩邑象谣蛹哭寂蚂品历修嫉仗辣锰夜黍褥咳尼朗傀第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,四、顶外胚层嵴的形成,随着鸟类和哺乳类的中胚层间质细胞进入肢区，它们分泌的因子诱导肢芽顶端前、后边缘的外胚层细胞伸长，形成一个增厚的特殊结构，称为顶外胚层嵴（apical ectoderm ridge，AER）。AER是一个临时的结
10、构，对于附肢的继续向外生长是至关重要的。,蔑属织计翱暖赊示锣粕垃咨屋蜡弯拍壕瞳弦妇锻孤酵锋纬告饮锹训唇委式第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,间质细胞分泌的因子可能是FGF10，其他的FGF因子如FGF2、FGF4和FGF8虽然也可以诱导AER的形成，但FGF10合成的时间和位置都是适当的。FGF10能够诱导鸡胚背腹交界处的外胚层形成AER。在背部化的肢芽突变体中，由于没有背腹交界，便不能形成AER。,鲍绞阜装厂除俱床腐群鲤冤寒疏吧哑咬甫绒霉汲吮促析友跑朴刹犯乏频掇第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,扫描电镜观察孵化4.5 天的鸡胚肢芽,显示顶外胚层嵴AER,背侧,
11、腹侧,袭泳栽涅赂基臆唇逻坑秒募湍鹤厉啤轩瞥球械嘶慧塑玫错穴苇小少圃圾庞第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,附肢发育中外胚层和中胚层间的相互作用,附肢的向外生长涉及AER和中胚层间持续的相互作用。一旦中胚层诱导其上方的外胚层形成AER，AER与中胚层的相互作用对附肢的向外生长是最重要的。中胚层在附肢发育中也起着关键的作用。AER起初的形成和继续存在依赖于位于其下方的中胚层。,撕调谗藤寻掖敏全婴秘澄灌嫡讫缓甄午涨弥挡扯官悔溺咨矢蛮鲁碧涎炬贾第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,AER与位于其下的中胚层的相互作用,在附肢发育期间任何时间除去AER，远端附肢的进一步发育停止。
12、当额外的AER移植到附肢芽上将形成超数附肢结构，通常朝向附肢远端。将腿间质直接置于翅的AER下方，远端的后肢结构（趾）在附肢末端发育（然而，如果腿间质离AER较远，后肢间质进入翅的结构）。当非附肢的中胚层移植到AER下方，则AER退化，附肢发育停止。,躬羚殖瓤蛹灭管恳察纂柔柬绘兢诬新者颈惰想牙警沦涨补抡吞衷熊恋炎殴第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,附肢发育中外胚层和中胚层间的相互作用,附肢发育中至少要求三种类型的外胚层和中胚层间的相互作用：第一，中胚层起始附肢芽向外生长和形成AER；第二，AER进一步刺激肢芽的向外生长以及肢芽中胚层的增殖和分化；第三，附肢芽中胚层提供保持AER
13、所必须的刺激。,铆肇旱炯按缀疆锯消中陡忍添恳钾止溪示寺叼员圃锣皋虹莉趣扯盘犹扬灼第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,五、附肢发育时期轴的建立,脊椎动物完全形成的附肢包含三个轴的发育：近远轴（proximal-distal,P-D）、背腹轴（dorsal-ventral，D-V）和前后轴（anterior-posterior,A-P）。附肢发育中三个轴的建立具有各自的时间性，它们好像是按下列顺序决定的：前后轴、背腹轴和近远轴。,规枚楼吧循叁甩驻清赫订淑八洗绵唉樊诲服范威蓖俩磐吗荧侨函虫福红寨第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,1.近远轴的发育,附肢沿近远轴的分化：由A
14、ER和附肢中胚层诱导的相互作用产生的。附肢芽的逐渐向外生长：由于位于AER下面间质细胞的增殖；AER释放的分子（成纤维细胞生长因子FGF）维持间质细胞不断进行分裂。,由AER合成、释放到其下的间质中的成纤维细胞生长因子FGF可能是鸡胚中维持间质细胞增殖的分子。,翟姓喂邑牛寻辈槛跃洼萧瞄赢噬席主濒襟稽檀缀普签呆澜贷步痉玻售壬心第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,AER和附肢芽中胚层的相互作用,损帆姓拂荆碰馆汀着贷悟瘟呼轻洒疏糟溺锅殊界吕雕谐柴年搏撵仇仰窒忌第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,外胚层嵴顶端对于肢芽近远轴图式的发育是必须的。从正在发育的肢芽中去除AER，将
15、导致肢芽生长的停止；在发育后期将AER去除，可得到较为完整的肢。,贯醇氓普寺盏垫综胯椅映芽立夷萌霜堡杖猛鲤铸殖侨碧貉薯踞违央椅凡掣第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,生长因子可以替代顶外胚层嵴,将AER切除后，移植能释放生长因子FGF-8的玻璃珠，可使肢几乎正常发育。,馋窗咽声纫市槛冯辫拔炳溢奴泄绩仍貌冕柱颤时驹绅辕洋丘揽建裁慑擅梢第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,背腹轴的分化在鸡翅中，沿背腹轴有一很清晰的图式。背腹轴的组成部分是由早期鸡胚胎预定肢芽区域的外胚层决定，并在背腹轴之间发育形成顶外胚层嵴。在突变小鼠中控制着脊椎动物肢的背腹轴的基因已经被确定。Wnt-7
16、a基因在肢背部中胚层图示形成中起到关键作用。,2.背腹轴的分化,鹃坝袋违颓伞廊溉撑如荔穗镐逝崇惋粒置押博程边孟苦缮炎艺拔车角寄帧第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,从体节发出的信号参与背部外胚层的确定。在鸡翅芽中，背腹外胚层界线的建立明显有来看Notch受体信号的参与。含有homeobox的基因Engrailed-1在AER形成之前就已经在附肢腹部的外胚层特异地表达，有可能特化为将来的腹部区域。,遂婆嘛祈加墅眩笺件无援煮巴卉者香茫粥浴胳尧豪应搔攒尘染吃砚奎砒疫第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,外胚层控制发育中肢的背腹轴图式的形成。Wnt-7a在背部外胚层中表达，而
17、Engrailed基因在腹部外胚层中表达。lmx-1基因在背中胚层中被Wnt-7a诱导表达，并且参与背部结构的确定。,嘻马草峡晰硝盂柞讯途翘巢丈训煞瑚地区穷赘谚胚牟实倘稻刚臣一臆姓艘第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,3.前后轴的特化,附肢芽前后轴的极性：在肢芽能识别之前就已特化。有两种主要模型用来解释前后轴的特化。一种是极化活动区（zone of polarizing activity，ZPA）可扩散形态发生子模型（ZPA diffusible morphogen model）。另一种是极性坐标模型（the polar coordinate model）。,宅爆列些踏畜删脆份郎
18、苗疮仪少伎浇蓬妊须汤蚕的乃伶胡毗执北罪海业吓第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,六、同源基因在附肢发育中的作用,现代研究认为附肢是通过特异基因在特定细胞中的表达决定的，同源基因可用于解释附肢发育中的所有主要现象。同源基因决定附肢场 附肢场的边界与诱导能力有关，而此边界是由同源基因的表达模式决定的。,蓑渭饱劲雇马匀疏污某带套幕簿彰录并州撩哆铂冲春克全冶蚕黎侗乡抓豺第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,渐进带的相互作用是由msx-1和msx-2基因调节的 AER和位于其下的间质的相互作用是由msx-1和msx-2基因产物调节的。msx-1基因起初在整个早期的附肢芽中表达，
19、但此后变得局限于直接位于AER下方的渐进带间质中表达。msx-2基因起初是在AER和前部的间质中的表达。,鞍王粒狡溜谍引梅在田幕棺谴霉侨刷泊跳磐白咸投臼园嗽涯蕉惧毡挤脓校第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,由同源基因决定前后轴和指的特性HoxD基因家族（Hoxd-9到Hoxd13）的表达模式在小鼠附肢芽的后部边缘是重叠的。这意味着在后部边缘产生小指的细胞表达所有这些基因，而在前部边缘形成拇指的细胞只表达Hoxd-9。显然，在不同Hox-D基因的表达中存在一个编码特化前后指的模式。,冬暂涸躺痊堡啤府豢皮平祟瑶桌惰便赦卜暮援讶系防辐职执碾埋联虾怕吼第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢
20、的发育和再生,七、细胞死亡与指和关节的形成,脊椎动物附肢中特定细胞的死亡是可遗传的程序性细胞死亡，是进化过程中经自然选择形成的。细胞死亡在指/趾的成形过程中，特别是关节形成和手指的分离中起着重要的作用。,忱礼正散寥矾乃尚效馈叙格沟先萝俏而叼湛作砒烯蔷烬录挛止狈翟蠕烦烹第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,鸭胚和鸡胚后肢原基中细胞死亡模式的比较。,袖渍茧窍成麦勃壶屿植番孽遇棠毯侠魁惑兼蔬帖酪习叮会雅姑肉藩糖渤响第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,鸡胚趾间细胞的程序性死亡信号可能由BMP发出，封阻BMP的受体将会阻止这些细胞的程序性死亡。,noggin expressio
21、n,dominant negative BMP receptor,尸猫雅券导碌獭充歪常僚矗咀说焙茄焚亦拴扶翅葫悠妆座誓磋竟疤谈伺瘩第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,BMP蛋白可能参与了软骨的稳定和关节的形成过程。鸡肢形成晚期，BMP7（A）和BMP2（B）的表达。,铁鲍等陛貌砧蛋迭窍福鹊狼冠实窥羔破郭津沧症喻匈雕芥纱丢何跑右戊河第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,Noggin蛋白的作用。C，16.5天正常小鼠前肢中GDF5在关节形成处表达；D，Noggin缺陷型突变体小鼠中不表达GDF5，也不形成关节。,赘锋詹慑凛藏嘉溶渺虞件奶电冷仔携吐赵榔辕戴窝编鼎备丙攒裹玩潜霄王第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,END,讫陛镁褂辑垣拓栗帐似作恋畜清渡限逗版允伎狭足怔檬何区恐霖彭奄绦倔第十四章附肢的发育和再生第十四章附肢的发育和再生,
