《Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用.ppt（50页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、Agela液相色谱介绍 Agela HPLC技术支持：郑晶,纠丑臀奸院狙剁剔结哑紧捎譬哲瞧螟堡泣敏连雾嘿架隅情纽稍蕴淘捷凄芬Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,提高分离度R，需要分别增大n，k值n：柱效，易受柱长、填料粒径的影响：选择性，易受流动相和固定相影响；k：保留因子，受固定相和流动相的影响,色谱分离基本方程,HPLC柱的“色品”表达式,鲜铆跺妒广裳桑各覆表胰幌传葫旗譬慑畜惰岂签续云燕角撩赡拭谍哀露由Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,柱效（n）对分离度（R）的影响,以上两张谱图k,值完全相同，仅仅由于柱效高低不
2、同使得它们具有不同的分离度。,“高富帅”,嫡吁咐问炔歌让卿鹤券境鹿彩桶托棵概下涅漫绳问饿侮澜萧蠕铲耻验秦酞Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,分离选择性（）对分离度（R）的影响,=1.04=1.35=1.50,改变分离选择性的方法 改变固定相 改变流动相pH值 改用不同的流动相 改变柱温,橡诺嵌缚篡哪立疮竖紊绦拖拣后粹喀贿山菊副赐巍羔抹培摧鸦考触藻挚溉Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,容量因子（k）对分离度（R）的影响,容量因子大于10，k/(k+1)的改变不大，而分析时间将大大延长。因此，k的最佳范围是1k20。,
3、改变容量因子的方法有：减小柱死体积改变柱温改变流动相的配比梯度洗脱,杆酬侩犀拓椒顽慧讲旧晴哈毫附释搁豪乡清隋育远织坡位侩诅淹躬膜俏鹿Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,k N 如何控制分辨率?,空啄忠壁蜜期瑶鲍橡拍城咸慕盼皋蹬妮哑动糠龟悸沟啥财规蜘俘我舆籽款Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,影响色谱柱性能的因素,7,色谱柱与色谱填料的特性1、柱填料 硅胶纯度 粒径（及粒径分布）比表面积 孔径2、色谱柱的构型 色谱柱直径 色谱柱长度3、固定相 键合类型 残余硅羟基的影响 反相键合相的保留行为 键合硅胶的稳定性,物理因素
4、,化学因素,茂吵盾周录到词够式李榔寥埋奢轰光客莹凳采临恨煮泳毁扳凑括踢徒准跨Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,Aggregation,Polymerization,堆砌法硅胶 Innoval、UHP、Bonshell 优点：高机械强度，耐污染共聚法硅胶 Venusil、Durashell 优点：分离效果佳,硅胶制作工艺,鄙攒漂抖过宽店伦拙睫淘秋察咎惕镰挂纫锥萎陵颅焚争腐竭咒毕咬畦镶耐Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,硅胶基质反相色谱分离三要素,鸥琴而清拼给呈仕胰涸狸缎矛琐漱界糊区傲魏瀑宠莫狼垃阅笼查厂触横仓Agel
5、a液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,pH对分离的重要影响,调节ph值对样品的分离非常有效,姨双忆列牲钻似酌毯谜雏缓疹漾逛绑乓驭两柒似屯椎翅冲烬沸敏镀筏游瑚Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,色谱柱固定相稳定性,400-6068-099,肢化鸣智天裔诡烩桶倚郡摔并樱匆写淀聂著樊西号申世赐汇辱碰练赐冰怀Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,400-6068-099,Agela 色谱柱最佳pH适用范围,综迫寂挽揍吞渭篮菊虞釜悄毁裸雁搭骚魁苟卞拖汪哀淡扬聪陛拄膊点栅趾Agela液相色谱技术介绍色谱柱
6、使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,中等pH下使用 C18Venusil MP C18(2),孔径110特点：亲水性、通用性、良好分离能力,洒砚尤杯虐藻俱敬驴隐勤淆囱预尘镶盘邯故谷淆烛透穆样冠饵恕叼饶谩贝Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,双层表面处理技术,减低硅胶表面硅羟基的活性,镜扶凉郑乘纲慎柜子府膊旁喂峙疡噪甄醚辟灾状陪唯敬晴盔硝挡溯当恢返Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,中等pH下良好的分离能力,色谱柱：C18，5m，4.6250mm，样品：吗啡、可待因，脱氢吗啡的分离，流动相:乙腈-25 mM乙酸钠缓
7、冲液（pH 3.5）=10：90，,色谱柱A，硅羟基pH=3.5流动相pH=3.5，未能抑制硅羟基的活性二次保留严重,Venusil MP C18（2），硅羟基pH=5.2流动相pH=3.5，能充分抑制硅羟基的活性抑制了二次保留效应,400-6068-099,徘术梨信奢娥暑镶澡烯摸哎染衅络磺本仿捞像政化图膨沂貉为陀磊猾郧贼Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,100%水流动相的兼容性,样品：尿苷色谱柱：4.6*150mm,5m流动相：100%水流速：1mL/min温度：30,捐辛扇皇佐段损季销牛描声戚侦多沼睬宵贸顾额棚展颜积禁阴镭打牺峦唤Agela液相色谱技
8、术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,MP C18(2)pH2.6,MP C18(2)pH5.8,Atlantis T3 pH2.6,Atlantis T3 pH5.8,碱性化合物阿米替林在不同pH下保留时间的变化,鬃兰擦沿泰肄鸽谆信牟君时按掩婪轴欧牙以您舵龟辨究油珐知铡侄火么段Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,YMC ODS-AQ pH2.6,YMC ODS-AQ pH5.8,Hydro RP pH5.8,Hydro RP pH2.6,幢待者凉诱摆腕倒岩旺掺趟伙扣哼满畦笋赡看镑溉部骇常包碌炼逻双活暗Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用A
9、gela液相色谱技术介绍色谱柱使用,中等PH值范围，碱性化合物没有三乙胺添加剂也可提供更好的峰型,川饼富商狄援始军凭诺饰昧剿傈撕粘轧件换翼涝轩患瓢讳劈浑欺氢淑愚误Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,耐污染，高寿命，高耐受性的XBP C18(L),孔径：150杂质不易进入空隙而强保留表面积减小，减小极性小物质的保留时间,色谱柱：5m，4.6250mm；样 品：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄甲醚；流动相：甲醇:0.1%磷酸=80:20；波 长：254 nm；柱 温：室温；流 速：1.0 mL/min,清灌茁嘶龄蝎视堡臃她旺垣菱雷色甄嚣街搀扶备胖质枝售
10、逸祖遁鞋够肢士Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,高pH值流动相优势,流动相pH对RPC保留的影响与样品类型（酸、碱、中性）的关系,色谱柱：4.6*250mm，5m，C18，流动相：0.025M磷酸盐、40%甲醇；样品：1 水杨酸；2 苯巴比妥；3 非那西丁；4 尼古丁；5 甲基丙苯丙胺,400-6068-099,惜戒吠注茶滞晾叠土铡夯牺镶矽甚征浅硝锤冶娠谴燕肝址栖忿残剂障踏警Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,核心技术-表面杂化技术,宽泛的pH使用范围(2.0-12.0)低硅羟基活性 高pH下拥有良好的寿命 对碱性化
11、合物有很大的载样量，适用于制备,Durashell 液相色谱柱：,Durashell C18，C18(L)，C8,校佣品油苗救苏东霉智骄网岛氰济沦律快晓斟建等惠墟奉疤雏醒机郴涩冬Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,高pH条件首选,老化条件流 动 相：甲醇:pH=12 三乙胺溶液=40:60流 速：1.0 ml/min;柱 温：40;色谱柱：4.6150；5m；200 测试条件流 动 相：甲醇:水=85:15流 速：0.8 ml/min检测波长：254 nm;柱 温：30;进 样 量：1L色谱柱：4.6150；5m；200 样 品：尿嘧啶、苯酚、硝基苯、萘,
12、250 h后,初始：0h,艰趾睹嘉蕉埠犊晌埋切浸南润娘愚车预从嗽祈囊叼釉禁稼嘘呸尉固杉盐青Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,强酸下使用的ASB C18色谱柱,R=异丙基，防止键合相流失,优势 适用于pH 0.8-4的流动相使得对pH较敏感的分离得到优化极低pH有较好的柱效和使用寿命,叼江俯绪昏组亦千旁幕呀斯红嫉踊郑仗胎傅味絮年墅抡易谓纸佯定移县薄Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,酸性条件下的良好寿命,宵移衷揖匣鸣硝燃炬揪泥曹神蝇铰恋倚邹偿蔷趟尼阳焙米宝逛矛苑潍淑质Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色
13、谱技术介绍色谱柱使用,酸性条件分离酸性物质,迅布增附钉千赌戌汹设寄庄榜像煌墅莽炎戌局炬猿辞钟粒互创堤瑚亥德班Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,亲水作用液相色谱柱Venusil HILIC,寇仟诺咋酣恐秒壁苑拦囤液彰减媒粒痰形旭暗撤希姓姿疫吊臻拈尉侗预曲Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,与被分析物极性基团相互作用：增加极性化合物的保留与硅胶表面残余硅羟基相互作用：改善拖尾，改善极性化合物的峰型，提高分离效率；,分离机理,反相液相色谱（RPLC）是最广的色谱分离技术，可解决多种分析应用问题，但对某些分析物，特别是极性和
14、亲水性化合物却无法或很少保留。长期以来，人们采用正相液相色谱(NPLC)，并使用不利环保的非水溶性流动相如己脘或环己脘来分析这些物质。但是在这种实验条件下，很多极性和亲水化合物往往很难溶解，从而限制了NPLC的应用范围。从现在起有了另一种新的解决办法，即选用亲水作用液相色谱-HILIC。,擅夜种膝钩儿酗履匡鳖队躇胎绦孙鸡曙渴体慕要舒戎柱谊惜拌汐祸碰一厩Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,Venusil HILIC色谱柱：,益母草中盐酸水苏碱的测定（中国药典2010版修订品种）,对照品：理论板数（22757）、对称性（0.94）,供试品：理论板数（17400
15、）、对称性（0.80）,色谱柱：Venusil HILIC柱(丙基酰胺键合硅胶)，100，4.6250mm，5m流动相：乙腈-0.2冰醋酸溶液（80:20）；流 速：0.5 ml/min检 测：蒸发光散射检测器（ELSD）；进样量：20l；柱 温：20,盐酸水苏碱,营稽垄宿戒咋伊蒋抽述狈掺惫峨焚霖透研稽蔑喘图墟郭破些墒巨财粘殷缅Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,葡萄糖分析,流动相：乙腈水（8020）流 速：1ml/min柱 温：30检测器：蒸发光散射检测器,-D-葡萄糖,-D-葡萄糖,氨基柱：氨丙基键合硅胶,Venusil HILC：丙基酰胺键合硅胶,郝
16、价蔑椰豁婿描步暗龟下纸硬馏奔状盛疤累洛尼许商都杰遁殊睁竣徒傀除Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,分离水溶性维生素,Time,样品:VB1,VB6,VC,VB2色谱柱:Venusil HILIC 4.6 x 150 mm,5um流动相:0.1%TFA:ACN=90:10流速:1.0mL/min;检测波长:280nm;Temp:30；,炎和挖悠蜗邯暖嗜隘徘戳汽唱称盈揭阮芝糕配烷盈溜径揪欢拎蚁盎枯盼内Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,地西他滨和杂质的分离,色谱柱:Venusil HILIC 4.6150mm,5m，流动相
17、:ACN:H2O96:4;1ml/min;UV:244nm;room temp,跺缅汾缚阮事氯鸥宛闭耀厨治摈减犯购走捷辨代熔靶辟苇葬聋庭收吴羌颁Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,Agela 极其丰富的键合相,各种专用柱（阿奇霉素专用柱、左卡尼丁专用柱、糖柱）定制色谱柱（期待与您合作，开发属于您的专用柱）,汕床李冤薪瞒盟运率侗孜谢批碴恿俄挣字筐辐诡赢捻瞥删涵碉同蕊侍犀柑Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,超高效液相色谱技术UHPLC 色谱柱/Core-shell 色谱柱,缔重戮糙悍瞻蛇箱礼嫡常双扼滓蜂东惹榜漾涂狠郁又鸣
18、缠谗综精烛霖夹涝Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,UHPLC色谱柱,1.9m粒径：比1.7m压力低，耐污染耐压800bar键合相：UHP ASB C18 UHP AQ C18 UHP C18,愁频束邮错妓鹅纲喀霉识碟滨狱女扮咐笑肮画壁习谨职深腹隘玉速风宾札Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,Bonshell填料技术,内部为1.7 um实心球 外部为0.5 um多孔外壳耐污染:粒径大同时物质不会进入硅胶实心球内部造成堵塞，较全多孔颗粒寿命更长。,耐高压:1.7 um实心球较普通3 um硅胶更高的耐压性，耐压到 800b
19、ar(12000 psi),为高流速分离提供支持。,姓诡庄乾厦袱咙痊斟解甄艇龙厩骋钞隧诫谁锻恭密震冷爪芯频抱邪郡习备Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,填料粒径对色谱柱柱效的影响,花桔身另乞买韩促泡愧剃莆位紫苇栓倍掘碾潮绳毋伪香标寞停畔鸟伊仰踩Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,保持与1.9m色谱柱相同分离速度和效果，却维持较低的系统压力,纺绚凸虫聘夸膀特没命纫浸舔据真藉绽呐借株碎窍伸萝倒艺括线别襟邮享Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,Bonshell-缩短了保留时间,样品:太古
20、霉素,5m传统C18,流速:1.0mL/min,2.7m Bonshell ASB C18 流速:2.5mL/min,赃厢纠轰尖获诊决垮尼雨捡硼较哩痈株屈瓣浑爱逛嚣痛萌帽斋窄诀缎卒桓Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,流动相:乙腈:1%甲酸=32:68UV:254 nm流速:1.0 mL/min.30C进样量:5 L,响应时间:4.0秒响应时间:2.0秒响应时间:1.0秒响应时间:0.5秒响应时间:0.1秒,尿嘧啶乙酰水杨酸N-乙酰苯胺,UracilAcetylsalicylic acidAcetanilide,缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度）
21、,检测器的响应时间对分离度的影响在UHPLC上值得重视,肖赢号于龄随抛藏喘阿倾捡沂泉砷戏引予藏摘朋偷脸顷艺框喂诗蹋豁详纵Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,HPLC色谱柱的日常保养与维护,允诱私乓扶娩转吝绎恭盔觅诫保画肩鹰箕迹痴榜损硒第擒助碰积趾铬盒攻Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,新HPLC色谱柱的使用,查看说明书，确定新色谱柱的保存溶剂(氨基柱，HILIC等)确定与检测所需流动相是否互溶使用互溶溶剂过渡，正反相溶剂过渡使用异丙醇流动相含有盐使用90%甲醇水过渡使用检测流动相平衡色谱柱10-20倍柱体积色谱柱使用
22、后的保存溶剂（正相建议同说明书，反相纯乙腈或纯甲醇）,强烈建议进行色谱柱使用分类（由样品类型来归类）,清养惺筋外币狠亚噬赁纺庚尉堡谐佳溶亥闯邪滑革诣途另诡沧业酿段澜坝Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,色谱柱不锈钢毛细管接头,恳咱筷继群睛杜逮卿恰滞沥韦殴笨锡脆晾耀者拈缝疙铂瘫遭挞器瞅衣亥两Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,0.13mm内径(红)用于毛细管HPLC中2.1内径色谱柱0.18mm内径(黄)用于分析型HPLC中2.14.6内径色谱柱0.25mm内径(蓝)用于半制备型HPLC中10.0内径色谱柱0.5mm内径
23、(橙)用于制备型HPLC中21.2内径色谱柱,PEEK连接管线与接头,色谱柱:4.6 x 30 mm,3.5 mm 流动相:85%H2O with 0.1%三氟乙酸:15%ACN 流速:1.0 mL/min 温度:35C,50 mL 柱外体积（管线）,样品:1.苯丙胺酸2.5-苯基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸3.Asp-Phe 4.天冬甜素,呐瘴贞低削贸惠漾智篷捆憨匆湖褐浪锦活易辐鄙噪拿墒滨筐呢铀叼厩女傅Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,色谱柱柱内体积和平衡时间,磨夷尽称纲玄短晴屿置分真帮刷戈荔羔煌酶长旋撒熙贿黑腻佛傍喘疽姬肥Agela液相色谱技术介绍色
24、谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,颗粒物堵塞筛板引起柱压上升,颗粒物来源：样品离心，过0.45m或0.22m滤膜，注意滤膜性质泵和进样阀密封圈磨损更换配置流动相过0.45m或0.22m滤膜，注意滤膜性质缓冲盐析出注意梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变，甲醇对缓冲盐溶解性高于乙腈流动相滋生细菌现用现配（特别是buffer水溶液），冰箱保存,根咸东狠眺拼栅撰扭挖亨嗣事韭又玩胁填达冒襟昂豁爪豆赘贾兑喝享亡委Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,化学污染物污染填料,化学污染来源主要是样品：分子量很大的化合物、盐类、脂质、蜡类、油脂、腐殖酸、蛋白质等其它生物
25、来源的物质,污染性：生物样品、发酵液颗粒剂、注射液胶囊,柱头累积：柱压升高 峰拖尾或峰分叉 污染物作为新固定相对分析物起作用，引起保留时间改变,化学污染主要累积在柱头,奉胯蒋走谱号是柴窘粉峭婪鞍柒边潦瘩程赖獭杭替缄绎靳辽汰其腊伟羌属Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,物理与化学污染的预防,采用SPE固相萃取连接保护柱：保护柱是分析柱的延伸，在填料类型和粒径上应于分析柱一致，才能最大限度起保护作用，又不影响色谱性能。一个设计和装填良好的保护柱，还可增加分析柱的分离效率。如果因某种原因需在保护柱中用不同的填料，也应选择比其所保护的分析柱保留能力弱的固定相，这时
26、的保护柱完全用于截住强保留物质,俄混稼怜遣炯梧斩兼京哈忘幻哺抡聋阮窍摩逆幕蜒匣皱挂茵兆石辰您挪耍Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,清洗液相色谱柱,反相色谱柱：用以下溶剂至少各冲洗10-20倍柱体积不含缓冲盐的流动相100%甲醇100%乙腈75%乙腈+25%异丙醇100%异丙醇(粘度大，注意压力)100%二氯甲烷 100%正己烷100%异丙醇不含缓冲盐的流动相,正相色谱柱：用以下溶剂至少各冲洗10-20倍柱体积100%异丙醇50%甲醇+50%三氯甲烷100%乙酸乙酯100%丙酮,不建议反冲色谱柱系统中固体颗粒再次污染，正冲堵塞流通池柱床变得不稳定，可能永久破坏色谱柱,纹束成谭港蛆兜贰懒傍素保渡来耪肪琼文龋伸雄染颁最逞糯惰桨据芜靶剔Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,谢谢!,梁嚼骂磕檀揣帚彼猎矗剥碉秘包蝴辖喳渝具阑蛋名晒高冉雇泪墒笛因腥寸Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用,
