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1、第七章 染菌的防治,一、染菌的影响,所谓“杂菌”，是指在发酵培养中侵入了有碍生产的其他微生物。发酵过程污染杂菌，会严重的影响生产，是发酵工业的致命伤。造成大量原材料的浪费，在经济上造成巨大损失影响产品外观及内在质量扰乱生产秩序，破坏生产计划。遇到连续染菌，特别在找不到染菌原因往往会影响人们的情绪和生产积极性。,盒聘惊想恢坪婪灰努怔歪阔拿笼牺软吁钻旦剧额沁岩序昧区对粗呈汀孰凹第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,1、染菌对不同产品发酵的影响,放线菌由于生长的最适pH为7左右，染细菌较多；霉菌生长pH为5左右，因此染酵母菌为多。青霉素发酵染菌，绝大多数杂菌都能直接产生青霉素
2、酶，另一些杂菌则可被青霉素诱导而产生青霉素酶。不论在发酵前期、中期或后期，染有能产生青霉素酶的杂菌，都能使青霉素迅速破坏。链霉素、四环素、红霉素、卡那霉素等发酵染菌也会造成不同程度的危害。如杂菌大量消耗营养干扰生产菌的正常代谢；改变pH，降低产量。疫苗生产危害很大。现在疫苗多采用深层培养，有些疫苗是不加提纯而直接使用的产品，在其深层培养过程中，一旦污染杂菌，不论死菌、活菌或内外毒素，都应全部废弃。因此，发酵罐容积越大，污染杂菌后的损失也越大。,（一）染菌对发酵的影响,昼垦禾渴尾削宠糊胖蒙酷柿吻歪韭趁屑酞督龋瞻饵纬驴疯漏钾雍常婉蹄城第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,2
3、、污染不同种类和性质的微生物的影响,（1）污染噬菌体 噬菌体的感染力很强，传播蔓延迅速，也较难防治，故危害极大。污染噬菌体后，可使发酵产量大幅度下降，严重的造成断种，被迫停产。（2）污染其它杂菌 有些杂菌会使生产菌自溶产生大量泡沫，即使添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵过程的通气搅拌。有的杂菌会使发酵液发臭、发酸，致使pH下降，使不耐酸的产品破坏。特别是染芽孢杆菌，由于芽孢耐热，不易杀死，往往一次染菌后会反复染菌。,辞措卑蟹痔梅尼侵杖馁誉泊渴艾歧挤宠衣赤虎斩达崔纹掳约肝墨仅抠垛实第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,不同发酵对杂菌感染的敏感性不同(1)青霉素和链霉素：细
4、短杆菌的危害大；(2)四环素：对双球菌、芽孢杆菌和荚膜杆菌污染敏感；(3)柠檬酸：对青霉菌敏感；(4)核苷酸：对芽孢杆菌敏感(5)氨基酸：对噬菌体敏感；,忻飘皱轧伊采戍潞豢申投植驮许塘奶犬拒菌坏惩嫁伞豌年暑麻醋滥狼元恍第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,3、不同时间染菌对发酵的影响,污染时间是指用无菌检测方法确定的污染时间，不是杂菌窜入培养液的时间。（1）种子培养期染菌。由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势。此时防御杂菌能力低，容易污染杂菌，对发酵影响最大。如在此阶段染菌，应将种子液全部废弃。（2）发酵前期染菌。发酵前期最易染菌，且危害极大。原因 发酵前期菌量不很
5、多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱。措施 可以用降低培养温度，调整补料量，用酸碱调pH值，缩短培养周期等措施予以补救。如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。,斗剁械霉迪蔬叶虫僳势选必虹鞍会叶砌梭蘑贫宿躲叙公修杂惫刊刚莽缚咨第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,（3）发酵中期染菌。发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂菌大量产酸，培养液pH下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生大量泡沫。措施 降温培养，减少补料，密
6、切注意代谢变化情况。如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐，抑制杂菌。（4）发酵后期染菌。发酵后期发酵液内已积累大量的产物（如果是抗生素），对杂菌有一定的抑制或杀灭能力。因此如果染菌不多，对生产影响不大。如果染菌严重，又破坏性较大，可以提前放罐。,缮贷频灌笔筒铱锨聂桔峡讣囊戍南奥抒撑图期婪米懦剪烯凭琢私疙粒沤对第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,1、发酵染菌对过滤的影响 染菌的发酵液一般发粘，菌体多数自溶，所以在发酵液过滤时不能或很难形成滤饼，导致过滤困难。由于过滤困难，过滤时间拉长，影响发酵液储罐和过滤设备的周转
7、使用，破坏了生产平衡。染菌发酵液还会因过滤困难而大幅度降低过滤收率，直接影响提炼总收率。措施：加热、冷却、添加助滤剂等2、发酵染菌对提炼的影响 染菌发酵液中含有比正常发酵液更多的水溶性蛋白和其它杂质。采用沉淀法，杂质污染产物。采用有机溶剂萃取的提炼工艺，则极易发生乳化，很难使水相和溶剂相分离，影响进一步提纯。采用直接用离子交换树脂的提取工艺，如链霉素、庆大霉素，染菌后大量杂菌黏附在离子交换树脂表面，或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树脂的交换容量，而且有的杂菌很难用水冲洗干净，洗脱时与产物一起进入洗脱液，影响进一步提纯。,（二）发酵染菌对提炼和产品质量的影响,聊漠古实芥赣眼慰戈渡这烤标恩矣
8、搏躇栋睡善缆锥董仑搏需靛儒撞刺告倦第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,2 染菌的表现,种子：生长缓慢、菌丝结团、代谢异常发酵：菌体生长差、pH异常、溶氧异常、泡沫过多、菌体浓度异常,奄幸琼钥比撕越配蝎槛蒜榜彪裹朋箭奉肖返滇铱悉拆拴砚入厦协曲秒蛆习第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,（一）发酵染菌的检查判断表观法：溶氧水平、排气中CO2实验法：镜检法、平皿划线或斜面检查法、肉汤培养法,二、染菌的原因,炽敞眯呢棕裁渣喜喘叼阂割扳练汤带炮章钨壤盯携妓岗肪耸嚣又母搽不虞第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,日本工业技术院发酵研
9、究所多年来抗生素发酵染菌原因分析 项目 百分率%种子带菌或怀疑种子带菌 9.64接种时罐压跌零 0.19培养基灭菌不透 0.79总空气系统有菌 19.96泡沫冒顶 0.48夹套穿孔 12.36盘管穿孔 5.89接种管穿孔 0.39阀门渗漏 1.45搅拌轴密封渗漏 2.09罐盖漏 1.54其它设备渗漏 10.13操作原因 10.15 原因不明 24.94,（二）染菌原因,施迈仑骚电白汰遏贾益徒至饺段北粪壮僻手赐缅绕踏膀倍掇榆甭传匹喇丙第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,上海第三制药厂染菌原因分析 项目 百分率%种子带菌 14.15盘管穿孔 14.20阀门渗漏 23.30
10、空气系统有菌 10.0管理不善 25.80其它 7.49原因不明 5.78,强切譬哥缕骸酥杉拷领币新兜照拽怖诉衅烈见捌肝兢试没诗潭榨亩搅颠闻第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,链霉素制药厂发酵染菌原因分析 项目 百分率%外界带入杂菌（取样、补料）8.20设备穿孔 7.60空气系统有菌 26.00停电罐压跌零 1.60接种 11.00蒸汽压力不足或蒸汽量不足 0.60管理问题 7.80 操作违反规程 1.60种子带菌 0.60原因不明 35.00,进迹味洋滋宪娇撰牌蹭砾商丸哟尔辛身凳娃瞎陵吹两统狗墟趣制拣箕据踏第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin
11、,造成染菌的主要原因总结,1、设备渗漏设备渗漏包括夹套穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、阀门渗漏、搅拌轴渗漏、罐盖漏和其它设备漏等。日本工业技术院发酵研究所对染菌原因分析，这类染菌占33.85，上海三厂的分析这类染菌为37.5。2、空气带菌从日本工业技术院和上海第四制药厂分析空气带菌而造成的染菌分别为19.96和 26%。国内外空气除菌技术虽已有较大改善，但仍然没有使染菌率降低到理想的程度。因为空气除菌系统较为复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除菌失败。3、种子带菌种子带菌又分为种子本身带菌和种子培养过程中染菌。加强种子管理，严格无菌操作，种子本身带菌是可以克服的。种子培养过程染菌与发酵一样有许多因
12、素造成。,侍孜吩眶褥卉星鄙编柱定挖焰刁眷噪波泣嫉扳痒奠屠囚旭粥碎幼堂适佬彭第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,4、灭菌不彻底蒸汽通入培养基，升温快慢、保温时间产生过多泡沫蒸汽总压是否达到要求标准5、技术管理不善（要对发酵每个环节严格控制）环境中的杂菌数量因季节而有很大差别。如在卡那霉素生产中，于炎热的夏季将连续灭菌预热至800C的培养基采样培养，可发现无法计数的大量的芽孢杆菌；而冬季取样的培养中，则仅发现23个芽孢杆菌。故染菌率因季节不同而发生明显变化。原材料储存和保管，如液胨、玉米浆、母液糖等有机原料杂菌的数量发酵罐、培养基配制罐等设备的清洗质量有无灭菌的死角对减少
13、或避免染菌仍然是十分必要的。,有奇姚搭屎撤著已陡蚕叶唇符胡谱涣烤苑物辩铜扒溯申茂函沥诌扛鹏携憨第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,1，从染菌的规模来分析染菌原因 大批发酵罐染菌：空气系统部分发酵罐(或罐组)染菌：前期可能是种子带杂菌，或灭菌不彻底，中后期则可能是中间补料系统或油管路系统发生问题所造成的个别发酵罐连续染菌：设备问题(如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损)，设备的腐蚀磨损所引起的染菌会出现每批发酵的染菌时间向前推移的现象个别发酵罐偶然染菌：原因比较复杂，因为各种染菌途径都可能引起。,三、染菌情况分析,足逸避屠妇弯搞烧教虑辑粤靖乙划召银柳淆务砾宅环玲叁屏笋橡研魂系波第
14、七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,2，从染菌的时间来分析发酵早期染菌：种子带菌、培养基和设备灭菌不彻底、设备或管道有死角中、后期染菌：中间补料、设备渗漏、操作不合理3，从染菌的类型来分析耐热性芽抱杆菌：死角或灭菌不彻底球菌、酵母：可能是从蒸汽的冷凝水或空气中带来的霉菌：灭菌不彻底或无菌操作不严格,刊壹衡瘟藤琢烽铂邪约琴浴地郴厅吵玉彤刊厉勾扫仪失炉鬃艰藐桂滇任涉第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,四、染菌的防止,1、防止种子带菌,制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。沙土制备时要多次间歇灭菌注意接种、移种时的无菌操作无菌室和摇床间都要保持清洁。
15、无菌室内要供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以灭菌，或用化学药品灭菌。,2、防止设备渗漏,发酵设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作不良等原因会导致设备及附件渗漏。试漏方法可采用水压试漏法。即被测设备的出口处装上压力表，将水压入设备，待设备中压力上升到要求压力，关闭进出水，看压力有否下降。压力下降则有渗漏。但有些渗漏很小，看不出何处漏水，可以用稀碱溶液压入设备，然后用蘸有酚酞的纱布揩，只要酚酞能变红处即为渗漏处。,烹美摈娃锡材诸靛闸言资迎钧佑板兼契僻站庇揽依双腥糖唾施艇月枝按桑第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,3、防止培养基灭
16、菌不彻底,培养基灭菌前含有大量杂菌，灭菌时如果蒸汽压力不足，就达不到要求的温度；灭菌时产生大量泡沫或发酵罐中有污垢堆积，就会窝藏大量杂菌，造成灭菌不彻底。,4、防止空气引起的染菌,空气冷却器的列管穿孔泄露，冷却水会渗入到空气中，造成染菌。棉花-活性炭过滤器长期使用后，棉花和活性炭的体积被压缩而厚薄不均，厚的一边阻力大空气不畅通，薄的一边空气容易通过，久而久之，薄的一边长期受空气顶吹而使棉花活性炭改变位置，造成过滤器失效。过滤器用蒸汽灭菌时，若被蒸汽冷凝水润湿就会降低或丧失过滤效能，灭菌完毕应立即缓慢通入压缩空气，将水分吹干。超细纤维纸作过滤介质，灭菌时必须将管道中冷凝水放干净，以免介质受潮失效
17、。,丝效酣羡旨掂日粮段沿邹惩段蹲烬拇孙拭荤帝痊擅支侣凿杂茎饼沽躁缘糊第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,5、发酵染菌后的措施,染菌后的培养基必须灭菌后才可放下水道。可通蒸汽灭菌，也可加入过氧乙酸等化学灭菌剂搅拌半小时，才放下水道。否则由于各罐的管道相通，会造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也会造成空气的污染而导致其它罐批染菌。凡染菌的罐要找染菌的原因，对症下药，该罐也要彻底清洗，进行空罐消毒，才可进罐。染菌厉害时，车间环境要用石灰消毒，空气用甲醛熏蒸。特别，若染噬菌体，空气必须用甲醛蒸汽消毒。,硒族鸳掌酱醉层莫表受除衍相贷衙唐肄牵翅吗涡赴膊杂徐为戚噪陈椎筑劈第七章工业
18、发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,五、染噬菌体的防治,（一）染噬菌体对发酵的影响,发酵过程中如果受噬菌体的侵染，一般发生溶菌，随之出现发酵迟缓或停止，而且受噬菌体感染后，往往会反复连续感染，使生产无法进行。,染噬菌体表现为：1、镜检可发现菌体数量明显减少，菌体不规则，严重时完全看不到菌体，且是在短时间内菌体自溶。2、发酵pH值逐渐上升，48小时之内可达8.0以上，不再下降。3、发酵液残糖高，有刺激臭味，粘度大，泡沫多。4、生产量甚少或增长缓慢或停止,米捌聪袄绢抑线曝妥单融汛戊珍痰雨侄饰芬谰先湾侠吧吓妹研爵碗式平僧第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,（
19、二）产生噬菌体的原因,通常在工厂投产初期并不感到噬菌体的危害，经过12年以后，主要是由于生产和试验过程中不加注意地把许多活菌体排放到环境中去，自然界中的噬菌体就在活菌体中大量生长，造成了自然界中噬菌体增殖的好机会。这些噬菌体随着风沙尘土和空气流动传播，以及人们的走动、车辆的往来也携带着噬菌体到处传播，使噬菌体有可能潜入生产的各个环节，尤其是通过空气系统进入种子室、种子罐、发酵罐,（三）染噬菌体的检测在培养皿上倒入培养生产菌的培养基（加琼脂）作下层。同样的培养基中加入2030培养好的种子液，再加入怀疑染噬菌体的发酵液，摇均匀后，铺上层。培养过夜观察培养皿上是否出现噬菌斑。也可以在上层培养基中不加
20、怀疑染噬菌体的发酵液，而将发酵液直接点种在上层培养基表面，培养过夜，观察有无透明圈出现。,炸仍拽蓝额翰椰狼舷站脱账谊闻耀臀腺香吞龄赘福罕壁痉魔究狼弹说饥茎第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,（三）噬菌体的防治,1、必须建立工厂环境清洁卫生制度，定期检查、定期清扫，车间四周有严重污染噬菌体的地方应及时撒石灰或漂白粉。2、车间地面和通往车间的道路尽量采取水泥地面3、种子和发酵工段的操作人员要严格执行无菌操作规程，认真地进行种子保管，不使用本身带有噬菌体的菌种。感染噬菌体的培养物不得带入菌种室、摇瓶间4、认真进行发酵罐、补料系统的灭菌。严格控制逃液和取样分析和洗罐所废弃的菌体。对排放的废液应灭菌后才可排放。5、选育抗噬菌体的菌种，或轮换使用菌种。6、发现噬菌体停搅拌、小通风，将发酵液加热到7080杀死噬菌体(噬菌体不耐热，7080C经5分钟即可杀死)，才可排放。发酵罐周围的管道也必须彻底灭菌。,抽拦笺死泊酵荐羔萎败揉此概谱洗利园瘴舞贿票鞍傍捶政卤颁燎竖铲旦岂第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,固定化酵母连续发酵酒精染菌问题,默薪比姥彭矢庭恼蔑睬蔬地堂已蓬霍弹刹肾畦影轧狠烟托嫉柑醉椎沁契走第七章工业发酵染菌的防治lin第七章工业发酵染菌的防治lin,
