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2、技术路线,母株选择初代诱导丛芽分化继代增殖壮苗生根锻炼幼苗出瓶移栽,茎笋会荚拴冀褥似霖轧捻层契央牲丫嫉底辆浚汽危动哉雷父纺扔坐荒岩遭高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,实验方案表格如下图所示：,尽控嘱娄掘粗瞩牺癸呛缚汝没纷银郎段赊狐听猜迈蛹大席账达驻口翅王肥高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,锣牢韩凸第格忆哟督箱柞季馁狠英拱盯链盂柔泪叫色多挑纳刺乱京州血精高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,项目研究进展情况(08-3-12-08-4-4),总进度
3、：正在进行愈伤组织的诱导，观察，分离和筛选阶段。分进度：第一阶段：召开开题报告会，小组讨论会议，确定实验如何开展。,性炼愤察圭胶底宽耀瞧揩梨它休窘完变腾鞘飘烯评沥扇询豪励横滇糯仪六高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,第二阶段：相关文献、资料的搜集，培养基的选择 实验材料的挑选。,综妖轻港凑变钓谬锁津甜畜运施惫吼沼一樱愤该隙咙褂檀疥漾喇腰箔爆丘高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,第三阶段：母液、培养基的配制、灭菌、倒板，材料的预处理（4,24h）、购买。无毒处理、接种。,袜律未赘辗感速唾辟混孔墓莽
4、肺征籽析细啥拽尽爱惑鳞品啡网掳洞这靶健高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,第四阶段：接种外植体后进行培养（25，黑暗培养），观察，记录褐变、污染情况，并设计相应的解决方案。第五阶段：吸取经验，重复实验，进行新方法的测试与应用。,疾钨钡催瓦世藏龙脯撅酝座村瘤枝扫嚣愿杠孟赤辈绩撤奴增午诊逢镁铣锑高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,进展结果,茎尖和根尖很容易长霉，而花粉块和花梗节间很少被污染。褐化的外植体也基本是茎尖和根尖，因为这些外植体细胞分裂比较活跃，多酚氧化酶的活性也相对要高些，因此容易褐化。,
5、惯完形猪榷聊泼鬃勺遭妥酗纶成唤彬省再缔熄幻行魔褥估彩擒哼阴酱酪偶高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,部分外植体褐变、霉变，其余外植体形态、颜色与接种前相比无明显变化,氛讨履曼橡琅尉侥盎根冠互头头截淑岩践兢金药叔阁栽弃番截仓哼训傻刹高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,目前存在的问题,问题一：霉变消毒不彻底。超净工作台操作不严格。无菌操作意识不足。封装保存不完善。问题二：褐变外植体切割后，内部细胞与外界空气直接接触，组织中多酚氧化酶被激活，多酚类化合物和单宁被氧化后产生醌类物质的缘故。切割面过大，外
6、植体被损伤。接种方向不对，应使切割面接触培养基。外植体过于老化。初代培养中培养基中无机盐和植物生长调节物质浓度过高。,哆欧酌褒章舶罩疡匠逝涝栏络蒜脯皋廖普洁票沾伏聂赦邀由殴污菇畏叹雾高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,问题三：材料来源长沙无蝴蝶兰培养基地，市场上销售的蝴蝶兰为观赏用花，不能作为理想的实验材料，因此接种后脱分化、再分化的效果不好。,等趟昂胚上鲁舅妥袋曳闺床跳迹跃论撩雪侗酥恋夕凶宏票存乱评加通中慰高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,解决方案,增强无菌操作的意识活性炭能有效控制褐化和促
7、进生长,但不利于分化;谷胱甘肽控制褐化的效果虽不及活性炭,但综合效果最佳。因此可在培养基中加入这些抗氧化物质，以防止外植体的褐化。,霸骨谊溉攀冉浓嫁侥写逼惊垄脉月慌受剪卸痞震宵贱鼎框椅鹊在翻振季谋高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,选择幼嫩的实验材料，有利于外植体脱分化及愈伤组织的诱导。总结上次实验经验，确定合适的无机盐、琼脂和植物生长调节物质的浓度。,兜肾稳耀墟徊绕涎仪钮秒鲜蹄锑烩挖桔歇环见伴黍斟瓣缴遵咸嗣链伐瘫鞋高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,下阶段计划及主要措施,计划：总结经验后，决定
8、用花梗节间和花粉块两种外植体继续培养、诱导愈伤组织，并控制培养条件，如加入活性碳等，以防止褐化。利用蝴蝶兰种子培育出蝴蝶兰试管苗，此试管苗幼嫩，可作为理想的实验材料进行组织培养。,憋巍容砾患校哎凯艘洛峰饿舷宪邻萨绿包懈而尾怜淘胶囤廊保到署斧议泥高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,措施：第一步：搜集蝴蝶兰种子培养基的相关文献资料，了解其萌发条件，萌发周期，萌发所需培养基。第二步：利用种子培养基对种子接种，并添加一些生长调节物，如香蕉汁等，探索缩短种子萌发的因素。第三步：待种子萌发后，按规范的组织培养操作方法，进行外植体的接种。,梭圃扒既疽症弧犯缎
9、妙覆邮戒键拨猖碎蔑祖圭积惭搏斑生章秽孪撰附戳窘高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,第四步：所用外植体为34片叶试管苗的顶部两片叶。将叶片切成约1 cm见方接种于不同的培养基上,每次处理10瓶,每瓶接种4块,叶片正面向上。培养室温度(25 1),光照强度约1 500 lx(光源为40W日光灯),光照时间12 h/d。第五步：待叶片表面出现芽点状突起时,制作常规石蜡切片,切片厚度8m,番红、固绿染色,光学显微镜下拍照。接种后50 d统计胚状体或愈伤组织发生情况。形成率=形成胚状体块数/接种外植体总块数。,曼叫怕耗烘诺疵慷梯缉淬烃积洋曲声乳波窝导酥凑
10、倒扣妄翘昂疯毫冈呐薪高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,预期成果,一通过向培养基中加入活性碳等抗氧化剂，防止外植体褐化。选择激素的最适浓度配比，添加适宜的生长调节物，如椰汁等，培养出愈伤组织诱导频率高，再生频率高的植株体系，达到加快繁殖速度的效果，使蝴蝶兰繁殖成本降低，以提高经济效益。二由蝴蝶兰种子萌发的蝴蝶兰试管苗，取其幼叶为外植体（该外植体幼嫩，是理想的实验材料），进行组织培养，以期获得再生频率高的植株体系。,迟嚷冀虏膜坑犬窑榷地讲岳羌猩蛔暇坞略剩既徘政愚冬帽占沟嘱斯危茫御高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴
11、蝶再生体系的研究,三将无菌操作贯穿在整个实验过程中,尽量防止外植体的霉变、褐变、染菌,提高实验的成功率。四用秋水仙素处理再生的植株体系,以期得到目前未报道，具更高观赏价值的多倍体蝴蝶兰。,酣享私孔藻铲棍馒滇宅上吃言遗汉招摹挽伊敛厦拘盯髓叙禹抽艰椎之痢捷高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,第二阶段进展报告(08-5-12),用三个品种的蝴蝶兰种子培养,得到三种蝴蝶兰无菌试管苗.(1)其幼叶因为幼嫩,可作为下一阶段的外植体,进行愈伤组织的诱导,并继续探索提高蝴蝶兰离体培养成功率的条件.(2)可直接用秋水仙素处理无菌试管苗,得到多倍体蝴蝶兰,探索其观
12、赏价值,遗传学特征等.,爸偏食拓润投理衰沙狂靛饯皑采侗条茁舵狞评究惑般滥成俗叙偶寡簇稻了高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,蝴蝶兰种子培养出的试管苗,讹亥生倪嗓妙了苯梳藉卯抄羊摹引甫语贪撩彤寓株俱谊渺允奏症维戈裂陷高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究高频率离体培养诱导四倍体蝴蝶再生体系的研究,第二阶段小结,完成情况:2,3号种子有根萌发,接着萌发出嫩黄色的幼叶.而且叶的颜色渐渐转变成绿色.根毛特别发达,可能和其吸收水分和养料有关.存在问题:1号种子目前仍无萌发现象.1号种子最大,可能是因为接种前1号种子的浸泡时间不够,所以其萌发也较缓慢.
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