中药制剂分析第五章、中药制剂中各类化学成分的分析.ppt

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1、第五章、中药制剂中各类化学成分的分析,内蒙古医学院药物分析教研室,第一节 生物碱类成分分析,一、概述 生物碱是生物界除生物体必须合成的含氮化合物之外的所有含氮的有机化合物，因其结构中氮原子上的未共用电子对而大多呈碱性。,小檗碱(berberine),苦参碱(matrine),N,延胡索乙素(corydalis),二、结构特性和理化性质（一）结构特性大多含有C，H，N，O组成结构复杂，结构类型较多氮原子有多种形式有羧基,酚羟基等酸性官能团及酯键取代,(二)理化性质 1.物理性质多为结晶型固体，少数为液体一般生物碱为白色或无色，但结构中具有较长共轭体系，并有助色团的可显不同颜色旋光性与胜利活性相关

2、，左旋体比右旋体生理活性强,生物碱的酸性水溶液或稀醇溶液,硅钨酸,磷钨酸,磷钼酸,(BH+)4Si(W3O10)4(淡黄色或灰白色),3BHPO412WO32H2O（白色至褐色）,3BH3PO412MoO32H2O（白色至黄褐色,加氨水转变为兰色）,3.沉淀反应,4.呈色反应,5.碱性 生物碱碱性强弱是中药制剂分析时供试品溶液制备、某些分析方法建立及条件选择的依据。,+酸性染料,有色配合物,一定pH值,三、定性鉴别（一）一般理化鉴别 沉淀反应是生物碱最常用的鉴别方法。有些成分也可与试剂生成沉淀而造成假阳性结果。,(二)色谱鉴别 1薄层色谱法,溶剂提取,浓缩,净化,层析,生物碱显色剂,颜色反应或

3、荧光,供试品,生物碱,点样,+,如用硅胶为吸附剂时,一般应用碱性系统展开剂较多,或使生物碱的薄层分离在碱性环境下进行。,注意,2纸色谱法 多为薄层色谱所代替，利用多缓冲纸色谱来快速鉴别乌头中双酯类生物碱和醇胺类生物碱有其独到之处。,3高效液相色谱法 在恒定的高效液相色谱条件下，各种生物碱都具有一定的保留时间，可作为定性鉴别的参数。一般要求取得两个色谱系统的保留时间，或应用二级管阵列检测器作出鉴定,四、含量测定(一)总生物碱含量测定 1.化学分析法 包括重量分析和容量分析 主要使用酸碱滴定法,酸碱滴定法：a.游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于过量标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴b.生物碱盐在水

4、或乙醇介质中，用强酸溶液滴定。一般使其溶于90乙醇溶液中，可用标准酸乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。,重量分析法：（1）将生物碱从中药制剂中提取，用适宜的方法使其生成沉淀，干燥后直接称重 优点:计算简便，不用换算因数，不必考虑生物碱的分子量。,缺点 挥发性生物碱，蒸发提取溶剂或加热、干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的生物碱不可用此法。取样量大，操作时易乳化，费时。,（2）加入某些试剂，使生物碱生成不溶性沉淀，称量沉淀,计算生物碱的含量。优点：取样量少，灵敏度高。缺点 繁琐，影响因素多，干扰多。,2.分光光度法：（1）直接测定法 利用生物碱自身的光吸收直接进行比色测定的方法。一般用于

5、药味较少，干扰不大的中药制剂中生物碱的含量测定。,（2）离子对萃取比色法原理：在一定的pH介质中，有机碱与一些酸性染料或磺酸类、酸类的阴离子，定量的结合为有色离子对，此离子对可定量的溶于某些有机溶剂，然后在一定的波长下测定有机溶剂或经碱化后释放的染料的吸收度。,1.酸性染料比色法：,本法测定的关键在于介质的pH值，酸性染料的性质，有机溶剂的性质。,2.苦味酸盐法：凡是在弱酸或中性溶液中能与苦味酸定量发生沉淀的生物碱,都可按本方法测定含量。a.是滤取生物碱-苦味酸盐沉淀，加碱使生物碱-苦味酸盐解离，然后以有机溶剂提出生物碱，将苦味酸的碱性水溶液进行比色，再换成生物碱的含量。,b.在pH为7的缓冲

6、液中，使生物碱与苦味酸结合成盐，用氯仿提取此盐，然后再以pH为11的碱性缓冲液使氯仿中苦味酸盐解离，并将苦味酸提取到碱性水溶液中再进行比色。c.直接在pH为45的缓冲溶液中，用氯仿提取生物碱苦味酸盐，将氯仿提取液直接进行比色。,3.雷氏盐比色法：生物碱与雷氏盐生成沉淀后，将沉淀分离，溶于丙酮，于520526nm波长处比色测定吸收度，换算生物碱的含量。生物碱的雷氏盐沉淀的丙酮溶液所呈现的吸收特征，是由于分子结构中的硫代氰酸铬铵部分，而不是结合的生物碱部分，其吸收值与样品或溶剂无关。,硫代氰酸铬铵在丙酮中的克分子吸收系数为106.5(单盐)或213.0(双盐)。故可根据其吸收值A按下式直接测得样品

7、重 W=（A/）MV/1000 本方法可不需要标准对照品，但需注意生物碱生成单盐或双盐，并要注意样品的净化。,(二)单体生物碱含量测定 1薄层色谱法 薄层色谱技术在生物碱类成分分离和测定须结合生物碱的通性选择合适的提取溶剂制成供试品溶液，需要采用化学方法提取和纯化，常用液-液萃取或液-固萃取，或结合生物碱的特性进行纯化。常使用碱性展开剂或在碱性气氛中展开。在薄层直接扫描定量,时，须首先作一工作曲线，目的是考察工作曲线是否为通过原点的直线，以便决定采用外标一点法或外标两点法进行定量，其次需要找出线性范围，以便摸索样品点样量。采用薄层直接扫描定量还需要随行对照品进行，同时要考察稳定性，同板、异板效

8、应和精密度等。,2高效液相色谱 生物碱类成分进行高效液相色谱分析时，可采用正相、反相和离子对色谱，其中以反相高效液相色谱应用较多。,为了克服游离硅醇基的影响:(1)流动相方面的改进：a.加入硅醇基抑制剂，最常用的硅醇基抑制剂是三乙胺;b.在流动相中加入离子对试剂;c.在流动相中加入季铵盐试剂，例如在水-甲醇流动相中加入0.01molL的溴化四甲基胺。,(2)固定相方面的改进：封尾技术可以使填料的检核更彻底。键和反应结束后，用三甲基硅氯烷等进行后续处理，尽量减少参与羟基，增加单体覆盖度。,第二节黄酮类制剂的分析,（一）概述 黄酮类化合物为自然界广泛存在的一大类化合物，多具有颜色，在植物体内大部分

9、与糖结合成甙，一部份以游离形式存在。,芦丁(rutin),黄芩苷(baicalin),槲皮素(quercetin),二、结构特征与理化性质（一）结构特征 基本母核为2苯基色原酮，现泛指两苯环通过中央三碳链相互联结而成的一类化合物。,（二）理化性质1.物理性质：多数为结晶性固体2.溶解度3.酸碱性：具有酚羟基，显酸性4.显色反应：与分子中酚羟基及-吡喃酮环有关。5.紫外吸收,一、定性鉴别 定性分析方法主要有 化学显色反应 薄层色谱,(一)化学显色反应 1.还原反应 盐酸-镁粉反应显色反应的机理是黄酮类成分经还原反应后生成花色甙元及其二聚物。,操作：取样品液510mL，加入数滴盐酸，然后加入少许镁

10、粉，如果有黄酮、黄酮醇或其二氢化合物存在，数分钟后则可产生橙色或红色。必要时，需作空白试验。,2与金属盐类试剂的配合反应 黄酮类成分能与金属离子如Al3+，Zr4+等产生络合作用，产生荧光或颜色加深等。配合作用的条件是黄酮类成分必须具备下述条件之一者，即5-羟基(a)、3-羟基(b)或邻二酚羟基(c)，(a)、(b)都是羟基与4位羰基共同与金属离子形成络合物的。,(三)薄层色谱法 黄酮类成分的薄层定性，一般采用吸附薄层，常用的吸附剂有硅胶与聚酰胺，也有用纤维素、硅酸镁、氧化镁。硅胶色谱分离弱极性化合物较好；聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其甙颇为理想；而纤维素薄层则适用于分离多糖甙混合物。展

11、开后的显色反应可采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。,1硅胶薄层色谱 硅胶分离黄酮成分遵循正相色谱层析规律，化合物极性越强，所需溶剂的极性越大。其Rf值顺序如下：RCH3RHROCH3R-O-糖ROH,常用的溶剂系统有：甲苯-甲酸乙酯-甲酸(541)，分离黄酮甙元苯-甲醇(955)，分离黄酮甙元；苯-甲醇-乙酸(3555)，分离黄酮甙；氯仿-甲醇(82)，分离黄酮甙元及甙；,苯-乙酸乙酯(7.52.5)或苯-丙酮(91)，分离黄酮甙元衍生物如甲醚或乙酸酯中性成分；甲苯-甲酸乙酯-甲酸(541)，分离双黄酮成分。溶剂系统中各组分的配比可根据薄层色谱的需要加以调整。,供试液制备 取本品粉

12、末0.5g,加50乙醇30ml置水浴上回流30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干乙醇后,加水少量溶解,加至聚酰胺小柱上,先后用水,乙醇各l00ml洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干,残渣用乙醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液。,淫羊藿的鉴别,例,对照液制备:0.5mg/mL。薄层板：硅胶G自制板；厚度：250m点样：供试品10L，对照品2L 展开剂：醋酸丁酯-甲酸-水(1.311)展开方式：平衡15分钟；上行展开8cm,显色：5%AlCl3乙醇溶液,紫外光灯下检视。色谱识别 与淫羊藿甙对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。注意事项 温度在25以上；控制湿度在18-47范围内色谱效果较好.,1 2 3

13、4 5 6 样品：1.淫羊藿甙 2.淫羊藿 3.箭叶淫羊藿 4.朝鲜淫羊藿 5.柔毛淫羊藿 6.巫山淫羊藿,2聚酰胺薄层色谱 聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基的黄酮甙与甙元较好。由于各种黄酮类成分取代基团的性质、多少和位置的不同，与聚酰胺形成氢键的能力有所差异而得到分离。,展开剂中大多含醇,酸,水,或二者兼有。常用的溶剂系统有：甲醇-水(82),分离黄酮甙元及甙，乙醇-水-乙酰丙酮(241),水-乙醇-丁酮-乙酰丙酮(13331),苯-丁酮-甲醇(622),分离黄酮甙元；甲酸-甲醇-乙酸乙酯(1218),乙酸-水(12),分离黄酮甙。,鼻炎康片中黄芩甙的薄层色谱 取片剂细粉，加50乙醇于60

14、水浴中热浸30分钟，滤过，取滤液点于聚酰胺薄膜上，用36醋酸展开，以黄芩甙为对照品，展开后于紫外灯下观察（365nm)，黄芩甙呈紫色斑点，Rf值约为0.30。,3纤维素薄层色谱 用于分离黄酮甙类较好，原理与纸色谱相同，色谱流动相可用纸色谱所有的流动相。,a.黄酮类成分的纤维素色谱行为是：分子中酚羟基增多时，无论用上述任意一溶剂系统Rf值均减少；当分子中羟基为甲基或甲氧基所取代时，Rf值增加，b.黄酮甙分子中醇羟基增多，用不同浓度的乙酸展开，Rf值增加，而用正丁醇乙酸水系统则相反。,二、含量测定(一)总黄酮类成分的测定 黄酮类化合物具有特定的紫外吸收带在300400nm,带在240 285nm，

15、提纯后可直接。测定总黄酮时常用芦丁作对照品。,在复方制剂中，由于其他组份吸收干扰，多需进行显色测定，以提高本法的选择性和灵敏度。与金属盐类试剂生成配合物，常用的是氯盐反应，试剂为三氯化铝和硝酸铝。,例:降压丸中芦丁的测定-铝盐络合比色法标准曲线制备 精密吸取一定量的芦丁液分别置于25ml量瓶中,分别加入5亚硝酸钠1.0ml,混匀,放置6分钟,加入10硝酸铝1.0ml,混匀,放置6分钟,加入4氢氧化钠溶液10.0ml,用水稀释至刻度,混匀,放置15分钟,在500nm处分别测定吸收度.以吸收度为纵坐标,对照品液体积为横坐标绘制标准曲线.,供试品测定 将丸剂粉碎,精密称取相当于1.0g槐米的细粉,置

16、于索氏提取器中,加入60ml乙醚,回流至无色,放冷,除去乙醚,再加甲醇60ml,提取,放冷.将提取液转移至100ml量瓶中,定容.精密吸取10m1,置于另一100ml量瓶中,加水稀释至刻度,混匀.精密吸取3.0ml于25ml量瓶中，再按标准曲线项下“加5亚硝酸,钠10ml”操作，测定吸收度，再从标准曲线中查出相当于芦丁对照品液的体积，应用下列算式计算芦丁的含量。芦丁%=VF100%/(3W),（二）单体黄酮成分的含量测定(1)薄层色谱法 薄层色谱法是测定中药制剂中单体黄酮类成分的关键是分离。样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素或聚酰胺进行层析，以达到分离的目的。层析后可TLC-比色法测定

17、；也可以用薄层扫描仪直接测定。,实例 枳实导滞丸中橙皮甙的测定-荧光薄层扫描法 取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇90ml，加热回流4 小时，趁热滤过至100ml 量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液与滤液合并，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另橙皮苷对照品,适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，精密吸取供试品溶液5l、对照品溶液2l与5l，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇为展开剂，展开，展距约3cm，取出，晾干，喷以 1三氯化铝的甲醇溶液

18、，放置3 小时，在紫外光灯(365nm)下定位,照薄层色谱法（附录 B薄层扫描法）进行荧光扫描。,激发波长：330nm,线性扫描，测量供试品荧光强度与对照品荧光强度的积分值，计算，即得。,(2)高效液相色谱法 黄酮类成分的Np-HPLC：a.无羟基的黄酮类化合物或乙酰化黄酮类化合物，固定相为硅胶，流动相可套用薄层色谱条件，但极性要相对小一点。b.乙酰化黄酮、有一个羟基的黄酮类成分，采用-CN键合相色谱，流动相为乙烷-氯仿。,c.含有2个以上羟基的黄酮类成分可选用-NH2键合相，流动相可选用二氧六环-二氯甲烷(19)。黄酮类成分的Rp-HPLC：大多用C18键合相，流动相常用甲醇-水-乙酸(或磷

19、酸缓冲液)及乙腈-水。,第三节 皂甙类成分的分析,一、概述 三萜是由30个碳原子组成的萜类化合物 可看作由6个异戊二稀单元联结而成 具有方面的药理活性 溶于水，振摇后产生气泡,人参皂苷Re(ginsenoside Re),人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1),黄芪甲苷(astragaloside IV),甘草酸(glycyrrhizic acid),二、结构特性与理化性质（一）结构特性 主要为四环三萜和五环三萜两大类 三萜皂苷是由三萜皂苷元和糖、糖醛酸组成 为化学结构复杂的化合物，大多数无紫外吸收,（二）理化性质1.物理性质 大多数为白色或无定性粉末2.溶解度 可溶于水，易溶于热水

20、、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，难溶于乙醚、苯等。,3.显色反应 1醋酐-浓硫酸反应 取含皂甙样品置试管中，加醋酐1ml溶解后，沿试管壁加入少量浓硫酸，在两液层中间出现色环，甾体皂甙生成蓝色或蓝黑色，而三萜皂甙则出现红、粉红或紫色。,2三氯醋酸反应 取皂甙溶液滴在滤纸条上，滴三氯醋酸试剂,加热到60，若斑点生成红色渐变为紫色,则样品为甾体皂甙；若需加热到100才出现以上颜色变化,则样品为三萜皂甙。3氯仿-浓硫酸反应 样品溶解于氯仿,沿管壁滴加浓硫酸后,在氯仿层呈现红或蓝色,并有绿色荧光出现。,4冰醋酸-乙酰氯反应 样品溶于冰醋酸中，加入乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。5

21、五氯化锑反应 样品加五氯化锑的氯仿液呈紫蓝色。,三、皂甙类成分的定性分析 1.泡沫反应 取中药材粉末约1g,加水10ml,煮沸10分钟后过滤,将滤液于试管内强烈振摇,如产生持久性泡沫(15分钟以上)即为阳性反应.所产生的泡沫多少与pH有关,取2支试管,一管加入,0.1mol/L盐酸液5ml，另一管加入0.1 mol/L氢氧化钠液5ml，再各加入中药水溶液，使酸管的pH为1，碱管pH为13，强烈振摇，如两管所形成的泡沫高度相同，则中药中含三萜皂甙，如碱管泡沫较酸管泡沫高数倍，则中药中含甾体皂甙。,3.薄层色谱 进行薄层分离时采用吸附剂常用的是硅胶或氧化铝以及特殊需要的硅藻土。亲水性强的皂甙通常要

22、求硅胶的吸附活性较弱些，展开剂的极性要大些，才能得到较好的分离效果。常用的溶剂系统有：氯仿-甲醇-水(1372，下层)、正丁醇-乙酸乙酯-水(415)等。,皂甙元的极性较小，如以硅胶为吸附剂，展开剂的亲脂性要求强烈，所用的溶剂系统常以苯、氯仿、己烷、异丙醚等为主要组分,再加以少量其他极性溶剂。常用的溶剂系统有环己烷-乙酸乙酯(11)、苯-乙酸乙酯(11)、氯仿-乙酸乙酯(11)等,薄层色谱后,皂甙类化合物常用的显色剂：(1)25磷钼酸乙醇溶液：140加热510分钟,皂甙元均呈深蓝色,灵敏度高,不易褪色.(2)三氯化锑的浓盐酸或氯仿溶液：90烤10分钟,应在通风橱中进行,加热后不同的皂甙元显出不

23、同种颜色,有助于鉴别皂甙元。(3)硫酸-甲醇(11)：喷后加热，显红褐色、紫色、黄色或黑色,与加热温度有关。,(4)氯磺酸-乙酸(12)溶液：喷后130加热5分钟，各种皂甙元显不同颜色，如天蓝、紫、粉红、淡棕色等，在紫外光灯下也显不同荧光，比较灵敏，可检出10-110-3g，可用于鉴别和定量。(5)碘蒸气：灵敏度约为12g，碘的优点是易挥发，显色后挥去碘，斑点可作定量分析，常用于确定斑点位置。,例 人参 三七 西洋参 的薄层鉴别 供试液制备:取本品粉末1g，加氯仿40ml，置水浴回流1小时，弃氯仿液，药渣挥干，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30min，取上清，加氨试液三倍量，摇匀，放置分层，

24、取上层正丁醇液蒸干，加甲醇溶解制成1ml供试液。,对照液制备 取人参皂甙Rb1，Rb2，Rc，Re，Rd，Rg1，Rf对照品和伪人参皂甙 F11对照品，加甲醇制成每lml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。薄层板:硅胶60预制板(Merck)点样:1l,展开剂:氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15 40 22 10)10以下放置后的下层溶液。展开方式:上行展开；展距：12-14cm显色:10%硫酸乙醇溶液，105加热数分钟,置紫外光灯(365nm)下检视荧光色谱。,色谱识别 1.人参皂甙Rf为人参含有,西洋参不含,可作为人参与西洋参的区别依据之一2西洋参含的人参皂甙Fll,人参不含,可作为西洋参的

25、鉴别特征；3.生晒参与红参之区别,在于Rgl以上的“微量皂甙”，红参较生晒参明显。4.三七色谱较简单,最明显的是Rbl,Re,Rgl三个主斑.需注意的是Re斑点与三七皂甙R1重叠。,样品：1-2生晒参；3-5红参；6-9朝鲜红参；10-12西洋参(进口)；13-14西洋参(国产)；15三七；16人参皂甙对照品Rb1(S1)，Rb2(S2)，Rc(S3)，Re(S4)，Rd(S5),Rg1(S6)，Rf(S7)，Fll(S8)。,四、皂甙类成分的定量分析 皂甙类成分的定量分析可分为 总皂苷测定 皂苷元测定 单体皂苷测定,总皂甙的含量测定一般需用适当的溶剂提取，如甲醇(8095)、乙醇等，提取后经

26、分离（如水饱和的正丁醇萃取，大孔吸附树脂经处理后溶剂洗脱）得到总皂甙成分，再根据皂甙类化合物的各自特征来选择含量测定方法。最常用的方法是比色法。,皂甙元的含量测定时可按总皂甙的提取分离方法得到总皂甙,再加酸加热水解,得到皂甙元,也可以将样品先行水解,再用有机溶剂从水解后的混合液中提取皂甙元.皂甙元含量的测定方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法和比色法。单体皂甙的含量测定方法主要为薄层色谱法和高效液相色谱法。,(一)总皂苷的含量测定 比色法 常利用皂甙能与某些试剂反应后产生颜色，然后于可见光区进行比色测定.,常用的皂甙显色试剂：浓硫酸 通用试剂，反应常显黄色，需在较高温度(8090)反应3060

27、分钟。高氯酸:5的皂甙元。硫酸-醋酐、硫酸-冰醋酸试剂:甾体皂甙。芳香醛-硫酸或芳香醛-高氯酸:常用的皂甙类显色剂。对-二甲氨基苯甲醛:三萜皂甙。,(二)三萜皂甙类单体成分含量测定 1.薄层色谱法 样品经适当的溶剂提取，用薄层色谱法分离定量。定量方法 可用薄层洗脱-比色法或薄层扫描法。,薄层色谱-比色法的一般步骤：1.供试品的制备:样品的提取与预处理。2.对照品溶液的配制3.薄层板的制备4.点样 对照品与供试品交叉点样。,5.展开：包括预平衡与样品展开6.定位：日光下,紫外灯下观察,碘蒸气定位.7.斑点捕集8.洗脱与定量：用合适的溶剂洗脱后加显色剂显色，或加显色剂显色后离心取上清，以相同大小的

28、固定相为空白同法操作，于合适波长处比色定量。,薄层扫描法的一般步骤：1.供试品的制备:包括样品的提取与预处理。2.对照品溶液的配制3.薄层板的制备4.点样 对照品与供试品交叉点样。,5.展开：包括预平衡与样品展开、展开方式，展开剂，展距。6.显色：采用合适的显色剂喷雾显色或衍生化显色，与合适的温度下烤干。7.扫描定量：在稳定显色的时间内，采用薄层扫描仪选择合适的参数扫描定量。,2.高效液相色谱法 主要用于单体皂甙和皂甙元的含量测定。具有较强紫外吸收的皂甙类成分可用HPLC法分离测定并用紫外检测器，无紫外吸收或紫外吸收较弱的皂甙类成分可用HPLC法分离测定并用蒸发光散射检测器。,一、概述 中药中

29、存在的蒽醌衍生物多为羟基蒽醌和它们的甙。常用的含蒽醌类化合物的中药，首推大黄，此外还有芦荟、决明、茜草、虎杖、何首乌、番泻叶、萱草等。,第四节 醌类成分的分析,二、结构特征与理化性质具有升华性溶于乙醚，乙醇，苯，氯仿的有机溶剂，微溶或不溶于水。有些成分对光不稳定多具有酚羟基，具有一定的酸性在碱性溶液中会引起颜色改变并加深。,大黄酸,大黄酚,丹参酮 IIA,三、蒽醌类成分的定性分析 1.化学显色反应（1）羟基蒽醌类化合物遇碱显红紫红色,（2）有-酚羟基或邻二酚羟基结构的蒽醌类化合物可与Mg2+形成橙红、紫红、橙黄、蓝紫等颜色的络合物。,2.升华法 游离的蒽醌及其他醌类衍生物多具有升华性。中药制剂

30、中如含有这类成分量较大，可采用升华法得到升华物，可见光下观察或加碱性试液显色定性。,3.薄层色谱法 薄层色谱法是鉴别含蒽醌类成分的中药制剂的最主要的定性方法。吸附剂多用硅胶。,展开溶剂系统：a.大都是各种溶剂的混合系统,大多含有水或甲醇.b.乙酸乙酯-甲醇-水(10016.5135)是用途最广的展开剂，适于分离蒽醌甙元和蒽醌甙。c.正丙醇-乙酸乙酯-水(443)和异丙醇-乙酸乙酯-水(994)适于分离番泻甙和二蒽酮甙。,显色方法喷碱性试剂或醋酸镁甲醇液、氨气熏紫外灯下观察荧光，可见光下直接观察色斑。,四、定量分析（一）蒽醌类成分含量测定 1)游离蒽醌的测定 方法：称取中药制剂粉末适量，在索氏提

31、取器中用氯仿回流提取至无色.氯仿提取液移入分液漏斗中,以5氢氧化钠-2氢氧化铵混合碱液分次提取至无色,合并碱液，,用少量氯仿洗涤，氯仿弃去，碱液调整至一定体积，若不澄清，可用垂熔漏斗过滤，滤液在沸水浴中加热4分钟，用冷水冷却至室温，30分钟后在490nm处比色，以1，8-二羟基蒽醌为对照品，计算含量。,2）结合蒽醌的测定 蒽醌苷类成分极性较强,可以用极性溶剂提取.通常是取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出，水解成苷元后测定；也可将药渣先行酸水解，然后用非极性溶剂提取苷元后测定；或取待测样品先行酸水解，然后用非极性溶剂提取苷元后测定，结果为总蒽醌含量，从中减去游离蒽醌含量，即为结合蒽醌含量。,3.蒽

32、醌类单体成分的测定 一般现将样品水解后测定，测定方法主要有波层扫描法和高效液相色谱法。,（二）萘醌，菲醌类成分含量测定 萘醌类见于紫草，地下明珠等制剂菲醌类成分多见于以丹参为主药的各类制剂中重量法、分光光度法常用于测定萘醌、菲醌类总成分含量色谱法、高效液相色谱法常用于测定单体成分含量,第五节 挥发性成分的分析,一、概述 挥发性成分指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分，化学组成复杂，主要包括挥发油类成分和其他分子量较小，易挥发的化合物。,二、结构特征与理化性质 可分为萜类化合物、脂肪族类化合物和芳香族类化合物 单萜、倍半萜及他们的含氧衍生物是组成挥发油的主要成分。,三、定性鉴别（一）化学反应法萜

33、类成分中含有双键，能与溴，氢溴酸等起加成反应。不同的氧化剂在不同的条件下可以将不饱和的帖类成分氧化，常用的氧化试剂为高锰酸钾和铬酸在浓硫酸存在下与香草醛反应呈色。,（二）薄层色谱法 根据极性大小进行分离，极性大小顺序：烃醚酯醛、酮醇、酚酸常用吸附剂为硅胶、氧化铝常用的展开剂为石油醚或正己烷,例 避瘟散中薄荷脑、冰片的定性鉴别 主要成分：檀香,零陵香,白芷,香排草,姜黄,玫瑰花,甘松,冰片,朱砂,薄荷脑等.取本品0.5g,加石油醚(3060)10ml,振摇数分钟，滤过,滤液低温浓缩至约2ml,作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品、冰片对照品，加石油醚（3060）制成每1ml 各含0.5mg 的混合溶

34、液，,作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶薄层板上，以环己烷乙酸乙酯(17:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。,（三）气相色谱法 常用对照品对照法进行定性鉴别，即在相同的条件下测定供试品与对照品的保留时间，以确定某组分的存在与否,四、含量测定可分为挥发油和单一成分的测定挥发油测定，采用挥发油测定器，用蒸馏法测定。单一成分测定时，分离是关键，色谱法是挥发油类成分测定的主要方法，尤其是气相色谱发和薄层色谱法,例 冠心苏合丸中冰片的含量测定【含量测

35、定】照气相色谱法(附录 E)测定.色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇（PEG）-20M为固定相，涂布浓度为10%；柱温为140。理论板数按正十五烷峰计算应不低于1200。,校正因子测定:取正十五烷适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含7mg的溶液，作为内标溶液。另取冰片对照品10mg，精密称定，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，吸取1l，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子。,测定法 取本品10丸,精密称定,研匀,或取本品10丸,精密称定,每丸各取四分之一,合并,精密称定,精密加入等量硅藻土,研匀.取适量(约相当于冰片12mg),精密称定,置具塞试管中,精密加入

36、内标溶液1ml与乙酸乙酯4ml,密塞,振摇使冰片溶解,静置,吸取上清液1l,注入气相色谱仪,测定,以龙脑、异龙脑峰面积之和计算,即得。,（一）气相色谱法为挥发油测定的主要方法之一闪蒸气相色谱法和顶空气相色谱法硅藻土和高分子多孔小球作为载体毛细管柱用玻璃或弹性石英柱常用氢火焰离子化检测器测定时采用内标法或外标法,（二）薄层色谱法（三）高效液相色谱法（四）GC-FTIR和GC-MS联用技术,第六节 木脂素类成分的分析,一、概述 是一类在生物体内有二分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。中药五味子、厚朴、刺五加、细辛等均含有木脂素类成分。,二、结构特征及理化性质大多数以游离的形式存在具有亲脂性，难溶于水

37、，易溶于苯，氯仿，乙醚，丙酮及乙醇等有机溶剂没有共同的特征颜色反应UV吸收具有苯环的特征吸收，在250-350nm之间。,三、定性鉴别反应（一）一般理化鉴别利用木脂素分子结构中的功能基具有颜色反应进行鉴别酚羟基可与酚类试剂（三氯化铁试剂，重氮化试剂）反应亚甲二氧基有Labat反应和Ecgrine反应,（二）色谱鉴别具有较强的亲脂性，采用吸附色谱法可达到较好的效果，常用硅胶薄层色谱。展开剂一般为亲脂性的溶剂中国药典大多以香草醛试剂和10%的浓硫酸试剂显色,四、含量测定（一）总木脂素成分含量测定可采用变色酸比色法，二级导数光谱法，柱色谱-比色法。变色法是根据木脂素类成分结构中亚甲二氧基与变色酸/浓硫酸试剂反应产生颜色,（二）单体木脂素的含量测定含量测定的主要方法为色谱法，常用的有薄层色谱法和高效液相色谱法。薄层色谱法，一般为吸附色谱法，以硅胶为吸附剂，低极性的有机溶剂展开。HPLC一般以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，已腈-水或甲醇-水为流动相，紫外检测器。,第七节 其他成分的分析,1.有机酸类分析2.环烯醚萜类成分分析3.香豆素类成分分析4.单萜和二萜类成分分析5.多糖类成分分析,