中药化学成分的结构研究.ppt

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1、中药有效成分化学结构的研究方法,一、中药有效成分的理化鉴定物理常数的测定 物理常数的测定包括熔点、沸点、比旋度、折光率和比重等的测定。固体纯物质的熔点，其熔距应在0.51.0的范围内，如熔距过大，则可能存在杂质，应进一步精制或另用不同的溶剂进行重结晶，直至熔点恒定为止。液体物质可测定其沸点。液体纯物质应有恒定的沸点，除高沸点物质外，其沸程不应超过5的范围。此外，液体纯物质还应有恒定的折光率及比重。比旋度也是物质的一种物理常数。中药的有效成分多为光学活性物质，故无论是已知还是未知物，在鉴定化学结构时皆应测其比旋度。分子式的确定 常用质谱法，高分辨质谱（HR-MS）3.化合物的结构骨架与官能团的确

2、定 一般首先决定化合物的不饱和度，准确计算出结构中可能含有的双键数或环数。用化学法推定分子结构骨架,二、四大光谱在结构测定中的应用,紫外 可见光谱（UV-VIS）,紫外 可见光谱（UV-VIS）共轭体系特征分子中电子跃迁（从基态至激发态）。其中，n-*、-*跃迁可因吸收紫外光及可见光所引起，吸收光谱将出现在光的紫外区和可见区（200700nm）。,200nm 400 700nm,紫外区（UV）可见区（VIS）,应用：推断化合物的骨架类型 共轭系统取代基团的推断 如：加入诊断试剂推断黄酮的取代模式（类型、数目、排列方式）用于含量测定（以最大吸收波长作为检测波长进行含量测定）,红外光谱（IR）,分

3、子中价键的伸缩及弯曲振动所引起的吸收而测得的吸收图谱，称为红外光谱。,4000 3600 3000 1600 1000 625cm-1,特征频率区 指纹区,特征官能团的鉴别 化合物真伪的鉴别,羟基（酚羟基、醇羟基）36003200 cm-1 游离羟基 3600 cm-1 氢键缔合羟基 34003200 cm-1 羰基 16001800 cm-1酮 1710 cm-1酯 17101735 cm-1芳环 1600、1580、1500cm-1 有23个峰 双键 16201680 cm-1,两个化合物完全相同的条件 1、特征区完全吻合 2、指纹区也需完全一致,红外光谱（IR）,红外光谱对结构的鉴定，主

4、要用于功能团的确认和芳环取代类型的判断。,1H-NMR（核磁共振氢谱）,信息参数：化学位移（）、峰面积、峰裂分（s、d、t、q、m）及偶合常数（）,（1）化学位移（C）020ppm 与1H核所处的化学环境（1H核周围的电子云密度）有关 电子云密度大，处于高场，值小 电子云密度小，处于低场，值大,0.9-C-CH3,1.8-C=C-CH3,2.1-COCH3,3.0-NCH3,3.7-OCH3,11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0,-COOH,-CHO,Ar-H,-C=C-H,常见结构的化学位移大致范围,(ppm),推断化合物的结构（含1H核基团的结构）,（二）峰面积:磁等同质子的

5、数目 用积分曲线面积（高度）表示,磁不等同两个或两组1H核在一定距离内相互自旋偶合干扰，发生的分裂所表现出的不同裂分,符合 n+1 规律(n=干扰核数目),用偶合常数（J）表示,峰裂分的数目,峰裂分的距离,不同系统偶合常数(J Hz)大小,s 单峰 d 双峰 t 三重峰 q 四重峰 m 多重峰,1H-NMR核磁共振辅助技术,（1）重氢(D2O)交换 推断活泼质子（羟基）的存在与否。（2）核增益效应（NOE）：指在核磁共振中选择性照射一种质子使其饱和，则与该质子在立体空间位置上接近的另一或数个质子信号强度增高的现象。（范例见P31）,13C-NMR（核磁共振碳谱）,信息参数：化学位移（C）碳谱的

6、化学位移的定义及表达方式与氢谱一致，所用内标也一样，但是化学位移的幅度较宽，约200个化学位移单位，故信号之间很少重叠，识别起来比较容易。,不同 13C 核C大小与13C 核所处的化学环境（周围电子云密度）有关,用于13C 核类型的推断,(C ppm),150220(c=o),200 150 100 50 0,c=c Ar,5080(c-o),饱和碳原子（060）,主要结构13C 核C的大致范围,化学位移：大致范围（C）0200ppm,质谱（MS）:1确定分子量（高分辨质谱 可将分子量精确到小数点后三位）,计算分子式。2与标准图谱比较用于化合物的鉴别（相同条件下，其裂解是符合一定规律的）。3依

7、据裂解特征及碎片离子，推定或复核未知化合物分子的部分结构。,电子轰击质谱（EI-MS）,但对于热敏成分及难于气化的成分（醇、糖苷、部分羧酸等）大分子物质（多糖、肽类）难以气化,测不到分子离子峰亦无法测得分子量,对热不稳定性的化合物乙酰化或三甲基硅烷化（TMS化）制成热稳定性好的挥发性衍生物进行测定,(2)化学电离质谱 CI-MS(3)场致电离 FI-MS(3)场解析质谱 FD-MS(4)快原子轰击质谱 FAB-MS(5)电喷雾电离质谱 ESI-MS,电离新方法（样品不必加热气化而直接电离）,第1节 苷类的结构研究,苷类结构研究的一般程序：1.物理常数的测定。Mp.等。2.分子式的测定质谱分析法

8、（广泛采用）电子轰击质谱（EI-MS）：不易获得分子离子峰（极性大）化学电离质谱（CI-MS）场解吸质谱（FD-MS）：常用快原子轰击质谱（FAB-MS）：常用高分辨快原子轰击质谱（HR-FAB-MS）：能直接测出分子式,3.组成苷的苷元、糖的鉴定,（1）苷元的结构鉴定（见各章节）（2）糖的种类鉴定纸色谱（PC）：分配原理，BAW系统，与对照品共色谱鉴定薄层色谱（TLC）：硅胶（硼酸溶液或无机盐溶液制-增加上样量）气相色谱（GLC）：水解、制备TMS衍生物（具挥发性），用对照品tR鉴定NMR光谱：苷中各糖的不同质子的、J 与标准糖数据进行比较鉴定 苷中各糖的不同碳原子的 与标准糖数据进行比较鉴

9、定,（3）糖的数目的测定,光密度扫描法测定各糖斑点含量，计算各糖分子比，推算组成苷的糖的数目质谱法测定苷及苷元的分子离子峰（分子量），计算其差值，求出糖的数目 1H-NMR谱:端基质子的信号（大-处于低场）数目或者 全乙酰化或全甲基化物乙酰氧基、甲氧基信号（、J）的数目 13C-NMR谱:端基碳原子信号（90112ppm）的数 目或者苷分子总碳信号数目减去苷元的碳信号数目,推算糖的数目,4.苷元与糖、糖与糖之间连接位置的测定,（1）苷元与糖之间连接位置的测定 13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与苷元的碳谱相比较即可鉴别醇羟基苷化，苷元-碳向低场位移（+410ppm），-碳向高场位移（-

10、0.9-4.6ppm）酚羟基苷化，苷元-碳向高场位移，-碳向低场位移,化学方法:将苷的全甲基化物进行甲醇解，鉴定（与对照品共色谱）未全甲醚化的单糖，游离羟基所在位置即糖与糖之间的连接位置。,（2）糖与糖之间连接位置的测定,13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与相应单糖的碳谱数据相比较即可鉴别。糖与糖相连，内端糖连接糖的碳原子移向低场（47 ppm）相邻碳原子移向高场（-1-4 ppm）,5.苷中糖与糖之间连接顺序的确定,苷,缓和酸水解酶解 乙酰解 全甲基化甲醇解,部分苷键断裂的裂解产物,分 析推 断,波谱分析法,质谱（MS）法：主要利用质谱中归属于有关糖基的碎片离子峰或各种分子离子脱糖基

11、的碎片离子峰，可对糖的连接顺序作出判断。EI-MS：(需作成全甲基化、乙酰化或三甲基硅醚化物)常见各单糖及双糖的全乙酰化物、TMS衍生物 碎片离子峰见书。FD-MS 或FAB-MS：常出现各种脱去不同程度糖基的 碎片离子峰。,6.苷键构型的确定,（1）利用酶水解法(酶的专属性)（2）利用开勒（Klyne）经验公式进行计算MD=M D苷-M D苷元,与各糖的一对甲苷（-、-）的分子比旋度相比较，与-甲苷接近，则该苷键构型为-构型 与-甲苷接近，则该苷键构型为-构型,1H-NMR利用端基质子偶合常数的大小判断苷键构型,依据,相邻碳原子上质子偶合常数的大小与二者之间的立体夹角有关,H-2为键的糖（葡

12、萄糖、木糖、半乳糖）,H-2为e键的糖（鼠李糖、甘露糖）,-苷键-苷键-苷键-苷键J12=23.5Hz J12=69Hz J12=2 Hz J122 Hz(Jae、60O)（Jaa、180）（Jee、60）（Jae、60O）,J12不相等 J12相等,意义,可以用于构型的判断 不能用于构型的判断,（3）利用核磁共振（NMR）确定苷键构型,-D-葡萄糖苷-L-鼠李糖苷 J12=Jae=23 Hz J12=Jae=2 Hz,-D-葡萄糖苷-L-鼠李糖苷 J12=Jaa=69 Hz J12=Jae=2 Hz,如表3-4，利用端基碳原子的化学位移判断苷键构型，除D-甘露糖、L-鼠李糖外，绝大多数单糖甲

13、苷，其-型与-型的化学位移相差4ppm。如表3-5 利用端基碳原子与端基质子的偶合常数判断苷键构型-甲苷 JC1-H1170Hz-甲苷 JC1-H1160Hz 10ppm,13C-NMR谱：,例题：确定苷键构型的方法为（）A利用Klyne经验公式计算 B1H-NMR中，端基氢偶合常数J=68Hz为-构型，J=34Hz为-构型。C1H-NMR中，端基氢偶合常数J=68Hz为-构型，J=34Hz为-构型。D13C-NMR中，端基碳与氢偶合常数J=160Hz为-构型，J=170Hz为-构型。E13C-NMR中，端基碳与氢偶合常数J=160Hz为-构型，J=170Hz为-构型。,一、化学方法（辅助手段

14、）二、波谱技术：包括UV、IR、NMR、MS等四大光谱技术。目前已成为醌类化合物结构研究主要技术手段。尤其在样品量比较少的情况下，波谱技术为首选方法。特别是核磁共振技术、质谱技术。,第2节 醌类化合物的结构研究,一化学方法,1锌粉干馏：母核推断2氧化反应：取代基推断3衍生物制备：甲基化物、乙酰化物,羟基蒽醌（-OH、-OH、醇OH、羧基）羟基数目、位置*甲基化试剂的选择性反应*（乙酰化试剂）推断 元素分析或波谱分析（NMR）甲基化产物 确定甲氧基数目（乙酰化产物）（确 定乙酰基数目）,1、紫外可见（UV）光谱：共轭特征2、红外光谱（IR）:官能团特征3、核磁共振（13C谱）:分子骨架（1H谱）

15、:基团特征4、质谱（MS）：分子量（M+.）,二 波谱分析,苯 醌240nm 强峰 285nm 中强峰400nm 弱峰,（苯甲酰基）245nm 251nm335nm,萘醌,(醌样结构)257nm,（1）醌类化合物的紫外光谱特征,苯甲酰基：252nm 325nm,醌式结构：272nm 405nm,蒽醌母核的紫外光谱：,羟基蒽醌：,第一峰与羟基数目的关系：,第五峰与结构的关系：,羰基 苯环 羟基（16751653 cm-1）(16001480 cm-1)(36003130 cm-1),羟基蒽醌,羰基与羟基(-OH)缔合的影响,羟基蒽醌红外光谱（IR）特征：,（2）红外光谱（IR）,缔和羟基,缔和羰

16、基,游离羟基 游离羰基,吸收峰向低波数位移,游离羰基（高波数）游离羟基（-OH）（36003150cm-1）缔合羰基（低波数）缔合羟基（-OH）（3150cm-1以下）,羰基峰的数目、位置与-羟基的数目及位置有关,-羟基数目及位置对羰基频率的影响：,3.核磁共振氢谱(1H-NMR谱),(1)醌环上质子,醌环质子（2、3、5、6）672（）,芳环质子 8.06(-H,5、8)7.73(-H,6、7),醌环质子6.95(),(2)芳环上质子,萘醌,苯醌,蒽醌芳环上质子：,-H（1、4、5、8）8.07-H（2、3、6、7）7.67,蒽醌,(3)取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响,甲基质子 2.

17、12.9（或宽）（供电基，邻芳氢-0.15）,（大黄素）,-OH质子1112 邻、对芳氢-0.45,-酚羟基质子（）11邻、对芳氢-0.45,取代基质子及对芳环质子的影响:,羟甲基：-CH2-质子 4.6(sd)-OH 质子4.06.0（供电基，邻芳氢-0.45）,（芦荟大黄素）,甲氧基质子4.04.5（）（供电基，邻、对芳氢-0.45）,取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响:,（大黄素甲醚）,取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响:,羧基-COOH质子11以下(吸电基，邻芳氢+0.8）,（大黄酸）,取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响,醌环引入羟基,烷基,萘醌（上下对称）,苯环引入羟基,

18、4.核磁共振碳谱（13C-NMR谱）（1）母核碳谱特征（2）取代位移规律,引入羟基 邻、对位电子云密度，间位电子云密度减少，,蒽 醌（上下、左右对称）,1、游离蒽醌分子离子峰（M+）为基峰。2、碎片离子为相继失去两分子的CO及相 应的双电荷离子峰。3、蒽醌苷得不到分子离子峰，基峰为苷元离子峰。,蒽醌类化合物的质谱特征,5质谱（MS）,mz 208,mz180,mz152,游离蒽醌裂解规律,天然药物黄花中得到一蒽醌化合物：为黄色结晶，mp.23244，分子式为C16H12O6（M+300）。溶于5%氢氧化钠水溶液呈深红色，不溶于水，可溶于5%碳酸钠水溶液。与-萘酚-浓硫酸不发生反4应。主要光谱峰

19、特征为：IR：3320cm-1 1655cm-1 1634cm-1 1HNMR：ppm：3.76（3H，单峰）、4.55（2H，单峰）、7.22（1H，双峰，J=8Hz）、7.75（1H，双峰，J=8 Hz）、7.61（1H，多重峰）、7.8（1H，单峰）试写出化学反应或光谱数据的归属，并确定结构。15%氢氧化钠水溶液呈深红色：示有（）2-萘酚-浓硫酸阴性：示有（）3可溶于5%碳酸钠水溶液：示有（）4醋酸镁反应呈橙黄色：示有（）5IR：1655cm-1 1634cm-1：示有（）61HNMR，3.76（3H，单峰）：示有（）7在4.55（2H，单峰）示有（）81HNMR7.22（1H，双峰，J

20、=8Hz）、7.75（1H，双峰，J=8Hz）、7.61（1H，多重峰），另一个7.8（1H，单峰）：示有 个 芳氢。9该化合物结构式是：。,A,B,C,1紫外（UV）光谱,苯环274nm(lg 4.03)引入羟基（共轭）碱液中（羟基解离）-吡喃酮环311nm(lg 3.72)325nm(lg 4.15)372nm(lg 4.23),第3节 香豆素的结构研究,2红外（IR）光谱,呋喃环（C-H）31753025cm-1（弱小、尖锐的双峰）,芳环16601600cm-1之间有三个较强吸收,内酯环 17501700cm-1(最强)12701220cm-1(强)11001000cm-1(强),核磁共

21、振谱（NMR）,（1）1H-NMR谱特征:,吡喃酮环质子-H(1H,d.J=9.5)6.106.50（高场）4 H(1H,d.J=9.5)7.508.20(低场),芳环质子,H-8(1H,d.J=2.0)（高场、羟基邻位）H-6(1H,dd.J=8.0;2.0)（高场、羟基邻位）H-5(1H,d.J=8.0)（低场）,受羰基吸电影响电子云密度下降（）,呋喃环质子6.707.20(1H,d.J=2.02.5)7.507.70(1H,d.J=2.02.5),芳环质子 H-5(1H,s.)H-8(1H,s.),呋喃香豆素：,（1）3，4-位无取代香豆素类成分：H-3、H-4构成AB系统，以一组dd峰

22、，偶合常数较大(J9.5Hz)，由于受羰基吸电共轭效应的影响，H-4位于较低场，7.508.20。,香豆素类1H-NMR谱鉴别特征：,7-OH香豆素 H-5(1H,d.J=8.0)（低场）H-6(1H,dd.J=8.0;2.0)（高场）H-8(1H,d.J=2.0)（高场）5、7-二取代香豆素 H-6、H-8分别呈现 d 峰,J=2.02.5(小、间偶)6、7-二取代（线型呋喃和线型吡喃）H-5、H-8 分别呈现 s 峰 7、8-二取代（角型呋喃和角型吡喃）H-5、H-6 分别呈现d峰,J=8.0(大、邻偶),（2）取代对芳环质子的影响,H-8、H-4在高分辨谱上远程偶合 4J=0.60 1.

23、0 Hz。,（3）远程偶合,呋喃香豆素呋喃环上二个质子构成AB系 统，以一组dd峰出现，偶合常数较小(J2.02.5Hz)。,（4）呋喃环上质子：,（5）芳环上甲氧基质子,呈现三个质子的单峰(3H,s)3.84.0ppm。,C-2(C=O,s.160ppm)C-7(C-OH,s.160ppm)，受羰基吸电共轭的影响C-9(季碳，C-O-,s.149.0154.0ppm)C-10(季碳，s.110.0113.0ppm)C-4(C=C,d.143.0145.0ppm)，受羰基吸电共轭的影响 C-3(C=C,d.110.0113.0ppm)C-2 C-7 C-9 C-4 C-5 C-6 C-3 C-

24、10 C-8 160以上 110.0 113.0 110以下,13C-NMR谱特征：,（2）出现一系列失去CO的碎片离子峰，最主 要碎片离子峰是M-CO+峰。,（3）具有甲氧基取代的香豆素经常出现失去 甲基（-CH3）的碎片离子峰。,4质谱（MS）特征,（1）大多具有很强的分子离子峰M+，简单 香豆素和呋喃香豆素的分子离子峰经常 是基峰。,花椒毒内酯质谱裂解途径,一.紫外可见光谱在黄酮类化合物结构测定中的应用 一般鉴定程序：1、先测定在甲醇中的光谱。2、再测定在加入各种诊断试剂后的紫外光谱。3、如为苷类，则可水解或甲基化后再水解，并测定苷元或其衍生物的紫外光谱。4、将以上各种光谱数据（或光谱图

25、）进行对比分析，即可获得有关结构信息。,第4节 黄酮类化合物的结构研究,黄酮（醇）：带 II、带I均强母核光谱特征 二氢黄酮类、异黄酮类：带 II强、带I弱 母核的推断（甲醇）查耳酮、橙酮：带 II弱、带I强,取代基：OH等，为助色团 依红移规律推断取代基团,甲醇钠：强碱，所有酚羟基解离 醋酸钠：碱性弱，酸性强的酚羟基解离 加入诊断试剂 醋酸钠/硼酸：邻二酚羟基络和 相应吸收峰红移,三氯化铝：3-OH，4-羰基 5-OH，4-羰基 络和 邻二酚羟基,黄酮类化合物在甲醇中紫外光谱特征,苯甲酰系统 桂皮酰系统（带II 220280nm）（带I 300400nm）黄酮类化合物结构中的交叉共轭体系,二

26、氢黄酮（醇）异黄酮（二氢）（由B环产生的桂皮酰系统不存在，带I弱，带II强）,黄酮类化合物在甲醇中紫外光谱特征,黄酮类化合物母核UV吸收特征,母核类型 带II（nm）带I（nm）备注黄酮 250280（强）304350（强）典型的交叉共轭系统黄酮醇（3-OH游离）250280（强）358385（强）3-OH供电共轭，带1红移黄酮醇（3-OH取代）250280（强）328357（强）3-OH供电减弱，使黄酮,异黄酮 245278（强）(sh)桂皮酰系统破坏 二氢黄酮（醇）270295（强）(sh)查耳酮 220270（弱）340390（强）橙酮 230270（弱）370430（强）花青素（苷）2

27、70280 465560（可见区）,（2）取代基团对共轭吸收的影响,黄酮类核中引入-OH（酚羟基）等供电基团，使共轭程度增强，相应的吸收峰红移。一般，A环引入 OH，带II红移，B环引入 OH带I红移。羟基甲基化或苷化后，原酚羟基的供电能力下降，引起相应的吸收峰紫移。3-OH甲基化或苷化，带I紫移，5-OH（与羰基形成分子内氢键）甲基化，带I、带II均紫移515nm，4-OH甲基化，带I紫移310nm。羟基乙酰化后，乙酰基的吸电作用，使原来酚羟基对共轭系统的供电能力消失，对光谱的影响亦将完全消失。,黄酮、黄酮醇加入诊断试剂后吸收峰（带I、带II）的位移规律诊断试剂 位移规律 归 属,NaOMe

28、 带I红移4060nm，强度不降 示有4-OH 带I红移5060 nm，强度下降 示有3-OH、但无4-OH,NaOAc 带II红移520nm 示有7-OH,2.加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义,NaOAc/H3BO3 带I红移1230nm 示B环有邻二酚羟基 带II红移510nm 示A环有邻二酚羟基（不包括5，6-邻二酚羟基）,诊断试剂 位移规律 归 属,AlCl3 及AlCl3/HCl AlCl3/HCl谱图=AlCl3谱图 示无邻二酚羟基 AlCl3/HCl谱图 AlCl3谱图 示可能有邻二酚羟基 AlCl3/HCl谱较AlCl3谱 带I紫移3040 nm 示B环有邻二酚羟

29、基 若紫移20nm 示B环有邻三酚羟基 带I紫移5065 nm 示A、B环均可能有邻二酚羟基 AlCl3/HCl谱图=MeOH谱图 示无3-及5-OH AlCl3/HCl谱图 MeOH谱图 示可能有3-及/或5-OH 带I红移3555 nm 示只有5-OH 无3-OH 仅红移1720 nm 示除5-OH外，尚有6-含氧取代 红移5060nm 示可能同时有3-OH及5-OH,异黄酮、二氢黄酮（醇）的吸收峰（带II）位移规律,NaOAc 异黄酮 带II红移620nm 示有7-OH 二氢黄酮（醇）带II红移3437nm 示有5，7-二OH 带II红移5158nm 示有7-二OH,AlCl3/HCl

30、AlCl3/HCl谱图与甲醇中的谱图比较 异黄酮 带II红移1014nm 示有5-OH 二氢黄酮（醇）带II红移2026nm 示有5-OH,诊断试剂 位移规律 归 属,查耳酮、橙酮的吸收峰（带I）位移规律,NaOMe 查耳酮 带I红移60100nm，强度增加 示有4-OH 带I红移60100nm，强度不增加 示有2-或4-OH 橙酮 带I红移7095nm，示有或6-OH,AlCl3 及AlCl3/HCl 查耳酮、橙酮（AlCl3较 AlCl3/HCl谱图）带I 红移4070nm 示有B-环邻二酚羟基 查耳酮（AlCl3/HCl谱图较MeOH谱图）带I 红移4060nm 示有2-OH,诊断试剂

31、位移规律 归 属,二1H-NMR谱在黄酮结构研究中的应用,测定溶剂：CCl4-样品需制备成三甲基硅醚化衍生物，不能显示羟基质子特征，目前已基本不被采用。DMSO-d6-样品（苷、苷元）不需制备成衍生物，可以显示各酚羟基质子特征。,A 环质子 B环质子 C环质子 糖上质子 取代基团质子,芳环质子 芳环质子 与类型有关 端基质子-OH、-CH3、其它质子-OCH3、,-OCOCH3,黄酮类化合物各质子的信号特征（、峰形状、J、峰面积）,6 8ppm，B-H位于较低场5-H最大8.0 ppm（羰基去屏蔽）A-H 5.77.9 5-OH 12.40 B-H 6.57.9 7-OH 10.93,1H-N

32、MR谱在黄酮结构研究中的应用,J邻 6 9Hz 3-OH 9.70J间 2 3 Hz 4-OH(10.01)J对 0 1 Hz（不计）3-OH(9.42)峰形状及J与取代有关-OCH33.5 4.10(3H s),6-CH32.042.27(3H s),8-CH32.142.45(3H s)A-环 B-环-OCOCH3(羟基乙酰化)5，7-二OH 4-氧取代 糖上1.652.10(3H s)7-OH取代 3，4-氧取代 苷元2.302.50(3H s),3，4，5-氧取代 glu,H-1 位于低场 较大4.85.70ppm 依、峰形（d、dd）、J 苷元-3-O-glu 5.80左右（1H.d

33、.）J与构型有关Jaa=69Hz，Jae=23A、B-环取代方式推断 苷元-5、7、4-O-glu 5.0左右 rha C-CH3 0.8 1.20(d/m),黄酮 H-3 6.30（1H，s）黄酮醇 C-环无质子异黄酮 H-2 7.6 7.80（1H，s）受1-氧原子和4-羰基吸电影 响,较大二氢黄酮 H-2 中心5.2(1H,dd.Jaa=11.0Hz,Jae=5.0Hz)两个H-3 中心2.8(1H,dd.J偕=17.0Hz,Jaa=11.0Hz)(1H,dd.J偕=17.0Hz,Jae=5.0Hz)二氢黄酮醇 H-2 4.85.0（1H，d.Jaa=11.0Hz）H-3 4.1 4.3

34、（1H，d.Jaa=11.0Hz）查耳酮 H-a 6.7 7.40(1H,d.J反=17.0Hz)H-7.0 7.70(1H,d.J反=17.0Hz)橙酮=CH 6.5 6.70（1H，s）,取代基团,1H-NMR谱在黄酮结构研究中的应用,三13C-NMR谱在黄酮类化合物结构研究中的应用,推断黄酮类化合物的骨架类型,（一）黄酮类化合物骨架类型的判断 利用13C-NMR谱中黄酮类化合物的中央三个碳核信号的位置以及它们在偏共振去偶谱中的裂分情况,13C-NMR谱中黄酮类化合物结构中的中央三碳核的信号特征,C=O C-2（或C-）C-3（或C-a）归属,174.5184.0(s)160.5163.2

35、(s)104.7111.8(d)黄酮类 147.9(s)136.0(s)黄酮醇类 149.8155.4(d)122.3125.9(s)异黄酮类 182.5182.7(s)146.1147.7(s)111.6111.9(d)橙酮类(=CH-)188.0197.0(s)136.9145.4(d)116.6128.1(d)查耳酮类 75.080.3(d)42.844.6(t)二氢黄酮类 82.7(d)71.2(d)二氢黄酮醇类,（二）黄酮类化合物取代图式的确定 利用黄酮类化合物中芳香碳原子（A-环碳原子、B-环碳原子）的信号特征,确定取代基的取代图式,黄酮母核13C-NMR信号归属,推断取代基（X）

36、的连接位置 依取代基的位移效应规律(B-环),X Zi Zo Zm Zp,-OH+26.0-12.8+1.6-7.1,-OCH3+31.4-14.4+1.0-7.8,确定5，7-二OH取代黄酮图式 依5，7-二OH黄酮中的C6和C8信号特征 90100ppm范围内 C6 C8,确定糖与苷元的连接位置 依苷化位移规律,苷元（酚羟基）：a-C移向高场，降低 邻、对位-C移向低场，增大 糖（酚苷）：端基碳原子+4.0 6.0ppm,四MS在黄酮类化合物结构研究中的应用,黄酮类化合物MS特征 测定分子量（M+）,取代基团推断（碎片离子峰）,苷元（极性小）苷（极性大、难气化、与热不稳定）,EI-MS（以

37、前）：苷看不到，须制备成衍生物 方能测得很弱的分子离子峰 FD-MS、FAB-MS、ESI-MS（目前）：可测得分子离子峰或准分子离子峰 M+1、M+23等。,可以测的分子离子峰，且常为基峰,EI-MS裂解规律1分子离子峰为基峰 用于测定分子量。2主要碎片离子峰为裂解途径I 和裂解途径II。,黄酮类化合物结构MS,裂解途径I（RDA裂解）：,裂解途径II：,通常，上述两种基本裂解途径是相互竞争、相互制约的。并且，途径I裂解产生的碎片离子丰度大致与途径II裂解产生的碎片离子的丰度互成反比。,黄酮类化合物结构MS,.,两种途径裂解得到的碎片离子A1、B1、B2等，保留着A-环、B-环的基本骨架，且碎片A1与相应的B1碎片的质荷比之和等于分子离子的质荷比。,母核推断A、B-环取代情况确定,3.其他碎片离子峰还有M-H+、M-CO+、M-CH3+（含甲氧基）、A1+H、A1-CO、B2-CO等碎片离子。,+,黄酮类基本裂解途径(以途径-I为主）,途径I+H转移,途径II,途径I,黄酮醇类基本裂解途径（以途径-II为主）,途径IH转移,途径-II,