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1、一 临床检验与临床化学,临床检验,临床检验又称实验诊断学，即通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查，显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。,1、临床血液学检验2、体液检验3、临床化学检验4、临床免疫学检验5、微生物学检验6、分子生物学检验,临床检验在医学中的作用,为准确诊断、及时治疗提供依据：如：肾脏有实质性损伤：尿液中出现蛋白、细胞管型 贫血(症)：血中红细胞和血红蛋白量减少 白血病：血象和骨髓象为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据：在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随
2、之发生相应的变化为预防疾病提供资料如血象和肿瘤细胞学的普查等,临床生化检验,临床生物化学，即采用生物化学分析方法，对临床标本进行定性或定量分析，以辅助临床诊断；临床生化常用的检测方法：化学比色法：待测物经特定的化学反应生成的一定的产物，在特定波长光照下具有吸收峰，待测物的浓度与吸光度成正比，从而对物质进行定量检测方法免疫比浊法：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，浊度亦增加。然后检测透（散）射光强度，即透（散）射比浊离子选择性电极电位法：通过检测电极表面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样
3、本中离子的含量。如，钾、钠、氯的测定电泳法：直流电场中，带电粒子向相反电极移动，血清中的蛋白质为双性离子，在碱性环境中带负电荷，在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷，带电荷多，分子量小则泳动快，反之则慢，从而将不同蛋白分离。如:血清蛋白电泳,二全自动生化分析仪,自动生化分析仪：集添加试剂、注入样本、比色、计算、出报告等功能于一体，用于检测生化项目的计算机控制的自动化仪器。国内使用的主要品牌：日本：日立（HITACHI）7020，7060，7080，7170，7180，7600 奥林帕斯（OLYMPUS），AU400,640,800,1000，2700,5400 岛津（SHIM
4、ADZU），CL7200,8000 东芝（TOSHIBA），TBA40FR,120FR 希森美康（SYSMEX）；180 京都1024魅力系列美国：雅培（ABBOTT），AerosetC8000，2000 德灵（杜邦）（DADE BEHRING），AR,RXL,XPAND 贝克曼库尔特（BECKMAN COULTER），CX4,5,7,9,LX20德国：拜尔（BAYER）ADVIA1650,2400；罗氏（ROCHE）利霸欧宝S-600；康宁560国内：深圳迈瑞，沈阳东软、南京英诺华,上海科华其他：荷兰的威图、意大利的BT2000/3000、西班牙的A30等。,光学光谱区,10nm200nm,
5、200nm 380nm,380nm 780nm,780 nm 2.5 m,2.5 m 50 m,50 m 300 m,自动生化分析仪应用原理：分光光度法 分光光度技术是利用物质的分子对光的选择性吸收作用对物质进行定性或定量分析的技术。分光光度法是光谱分析技术中最常用的一种，应用最多的是紫外可见光分光光度法,光吸收基本定律:Lambert-Beer定律LambertBeer定律时讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律，该定律时分光分析的理论基础。K为比例常数，C为溶液浓度（当液层厚度为cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称为摩尔吸光系数。的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度
6、为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。是物质的特征性常数）Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体,A=lg(I0/It)=kbc,吸光度与浓度的关系 A=bc,一般对一个新的试剂来说，总是先做标准品定标（校准），再进行相应的样本检测。多点定标和一点定标：通过多个浓度有一定梯度的标准液来定标（校准），规范出标准曲线的一定的趋势，以此来得到浓度与吸光度的函数。多点定标大多用于非线性校准，得到的标准曲线一般为二次函数的抛物线类型。只用一个标准品来定标，得到的函数为Y（浓度）=AX(吸光度)+B，是一条简单的直线。,生化分析基本测定方法连续监测法（速率法）：即连续
7、监测反应过程，按产物的生成或底物的消耗的速度(A/min)进行定量分析的方法，读数点必须在等速区对低浓度的样本，它的吸光度随时间变化的慢（速率低），而高浓度样本，它的吸光度随时间的快（速率高）。在反应时间进程曲线上为反应呈恒速区段(斜率保持不变)，常用于酶活性线性反应期测定或以酶为工具测底物（代谢物）的浓度。终点法：反应到达终点后与起始点（空白）的吸光度差与相同条件下用校正液测得的结果比较取得结果的方法。试剂与样本反应之前的吸光度在某一定的水平，开始反后，在主波长下出现一个最大的吸光度，得到一个较明显的吸光度的落差，所以通过标准品吸光度变化值可以限定其它样本的浓度。终点法中的反应时间是指开始反
8、应后，试剂与反应物反应到达一定的稳定点，试剂与反应物不再反应，吸光度不再随时间的变化而发生改变，既到达了反应平衡。其间所要的时间就是反应时间。在反应时间进程曲线上为与x轴平行线区段。,（1）延迟区：delay time,lag time；（2）等速区：斜率相等的线性段；连续检测法在此区读数（3）过渡区：两点固定时间法，在此在此区读数（4）平衡区：终点法在此区读数,实时反应曲线,典型的全自动自动生化分析仪基本结构,样品(Sample)系统：校准品、质控品和病人样品盘。由样品装载、输送和分配等装置组成。试剂(Reagent)系统：一般由试剂储放（试剂盘）和分配加液装置组成；条形码(Barcode)
9、识读系统：条码试剂反应系统：反应盘-反应转盘比色杯（Cuvettes）；恒温控制装置；蠕动泵(Pump)；回旋搅拌混合装置清洗(Wash)系统：碱性洗液，酸性洗液，去离子水清洗-防止交叉污染 比色系统：卤素灯（325800nm）或氙灯（285-750nm);)单色器与检测器(可见一紫外分光光度计）；程序控制系统：,生化分析仪主要操作程序仪器运行前，主要进行仪器的基本设置：l试验项目设置对试验名称、编码，试验组合(Profile)、试验轮次(Round)，必要时包括试验顺序等设置。2各试验的参数设置包括试验间比值、结果核对等参数的设定。3剂设置根据有关试验参数，设置各试验的试剂位、试剂瓶规格，必
10、要时设定试剂批号、失效期等。4校准品设置对校准品的位置、浓度和数量等进行设置。5质控设置 根据质控要求。设置质控物个数，质控规则，质控项目及相应质控参数等。6样品管设置 包括样品管类型，残留液高度（死体积），识别方式等设置。7其他设置对数据传输方式、结果报告格式、复查方式及复查标准等设置。,常规操作程序：开机(预热、保养)-设置开始条件(日期时间索引、轮次、样品起始号等)-根据需要，申请校准、质控和病人测定项目(包括架号、杯号或顺序号。测定中可继续申请)_装载校准品、质控物和病人标本-装载试剂-核对仪器起始状态（未应用条码系统，采用顺序识别样品时，尤其要核对测定起始编号是否与样品架号和申请号相
11、符）-定标和质控测定-检查定标和质控结果-病人标本测定-测定过程监控（试剂检查，观察分析结果，编辑校正）-数据传递（打印报告，向检验管理系统传输，包括工作量统计、财务统计、病人情况追踪、质控分析等)。测定后保养。,测定结果检查分析：1各种警示符号的含义与作用在正确设定参数的前提下，利用各种警示符能提高发现问题和解决问题的效率。2运用仪器的相关操作屏(界面)如：用反应过程监测(Reaction Monitor)，观察反应时间进程曲线；用校准追踪(Calibration Trace)回顾分析校准曲线；利用统计(Statistics)了解不同日期段病人测定均值及数据分析；运用分析数据编辑(Data
12、Edit)察看和校正测定数据。3校准的检查要充分利用仪器设置的功能，监测校准曲线图形、各校准点吸光度值(不能忽略试剂空白值及空白速率值)、计算K值等的波动情况，以及与以往的比较。必要时，应进一步检查反应时间进程曲线。必须结合质控数据来把握实验条件。4病人结果的检查除了目测观察或用血清指数了解标本性状，注意和了解临床资料及诊断外，分析反应时间进程曲线及数据。,三生化试剂（试剂盒）,生化试剂定义及应用,体液中的多数物质正常含量在一定范围，检测这些物质的含量对诊断疾病起很重要的参考价值。生化试剂（试剂盒）指与样本（一般为体液：血液，尿液，腹水等）中的某物质发生反应的化学物质。通过反应，引起颜色（光吸
13、收）的变化，达到测量样本该物质含量的目的。生化试剂的应用范围：医院、疾控中心、血站（只检测ALT）、体检中心、部分保险公司的检验科。,生化试剂的发展,从性状来讲，经历了冻干、干粉、液体试剂。从单一试剂向双试剂发展，再向单试剂发展。双试剂：存储时间长、稳定、抗干扰能力强，一般大医院都选择使用双试剂，其缺点是每个试剂需要两个试剂位。单试剂：存储时间、稳定性、抗干扰能力均不如双试剂强，但占用的试剂位少，使用方便，特别适合小医院及小型仪器使用；如：日立7020仅有36个试剂位，如果全部使用双试剂，则只能开展18个检测项目，而医院出于临床需要及增加收益方面的考虑，希望开展的项目越多越好，因此会倾向于选择
14、使用单试剂，而乡镇一级卫生院绝大部分都是半自动生仪，只能使用单试剂。如果把双试剂混成单试剂使用，一则比较麻烦，二则不稳定，也很浪费。,单试剂与双试剂的界限：在某些双试剂，由于各试剂成份及所参与反应的目的的不同，有的双试剂可以事先混成单试剂，但有的双试剂只能用双试剂通道来做。如：R1用来去干扰的目的：R1试剂用来清除血清中的干扰物，防止R2与血清中的干扰物反应。如化学氧化法的TBIL，DBIL，CR（酶），LDL-C等。单试剂不稳定：R1,R2中的成份相互影响发生反应,使试剂中色源提前反应,引起起始吸光度及吸光度变化率的改变等。（CHE,GGT）仪器自身特点：有的仪器（如半自动，手工）它没有双试
15、剂的加样模式，那它只能用单试剂来做，一般双试剂加样模式的仪器也可以单试剂加样来做，但是单试剂加样的仪器就不一定能做那些只能双试剂模式的检测。,标准品与质控品标准品（标准血清）即一个或几个已知浓度的样本，它在检测中作为一个或几个参照物，使以后的所有的检测都与之比校，以此来得到其它样本的浓度。标准品明确赋值，通过校正后，得到较为规范的标准曲线，以此得到检测样本浓度与该样本吸光度之间的函数关系。标准品稳定性的重要性：标准品作为其它样本检测的标准，必须保持它的准确性和稳定性，一旦标准出现问题，后果很严重。在保存一定时间后，如果标准品的实际浓度降低了，那么定标（校准）后检测样本时该测值就会偏高，反之，如
16、果标准品实际浓度变高了，那么测定值就会偏低。故标准品在运输，储存过程中应慎重，以免其变质。质控品：质控血清是已有靶值的血清，并且对它的测定有一定允许的偏差，质控血清在质控工作中起重要作用。同样质控品必须要与试剂的体系一致，如果两种方法学或者两个体系的试剂之间的质控就不一定能够做到相互符合。所以试剂与质控必须一致使用。,生化试剂的分类 一,按用途来分，主要有以下方面（本公司产品以检测的物质命名）：,生化试剂的分类 二,按原理来分，又可以分为比色和免疫比浊法试剂。（实际仪器应用过程中，大部分均为比色法）。比色法：试剂与样本发生反应后，生成物的颜色在特殊波长下有吸收峰，检测该生成物的量来测量样本含量
17、，其反应曲线一般为直线，大都采用单点定标。如：总蛋白，白蛋白的测定比浊法：试剂与样本发生沉淀、凝集反应，产生浊度变化，其反应曲线一般为拟合曲线，大都采用多点定标。如，主要应用免疫比浊法试剂有：ApoA1,ApoB,Lp(a),ASO，RF，CRP，B2-MG，CYS-C；HBA1C，PA，mALB，AFP,C3，C4，IgA，IgG，IgM等。,注意：方法学不同的试剂有：TBA（酶比色法/酶循环法）、CR（苦味酸法/酶法）、GLU（氧化酶法/己糖激酶法），T/D-BIL(重氮法/化学氧化法)后者测定结果更准确，对机器的污染更少，但价格也更高。有部分试剂有其他的称呼或写法，如：ALT（GPT/谷
18、丙转氨酶）、AST（GOT/谷草转氨酶）、ALP（AKP）、GGT（-GT）,四生化试剂临床应用,肝胆疾病的生化检测,蛋白质代谢功能检查：胆红素代谢检查：胆汁酸代谢检查：摄取、排泄功能检查：血清肝酶谱的检查：,肝功老八项:ALT，AST，ALP，GGT，TP，ALB,TBIL,DBIL,肝功新八项:AFU，AFP，PA，NAG，ADA，TBA，5-NT，GPDA,肾脏疾病的生化检测,肾小球功能检查肾小球滤过率肾清除率肾小管功能试验肾浓缩稀释试验尿渗量（渗透压）测定尿液酶的测定,血清脂类及脂蛋白生化检测,血浆脂类：总胆固醇（即游离胆固醇（FC）和胆固醇酯(CE)）；磷脂（PL）；甘油三酯（TG）
19、、糖脂和游离脂肪酸（FFA）等FFA与Alb结合，血浆脂类以脂蛋白复合体的形式（包含在脂蛋白中）存在；血浆脂蛋白分类：CM、VLDL、IDL、LDL、HDL和Lp(a),血糖检测项目,血糖调节失去平衡，出现高、低血糖症状 高血糖（11.1mmol/L）称糖尿病，其他内分泌疾病引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多，也会出现高血糖。GSP 1.70-2.50mmol/L 能反应出病人12周的血糖平均水平（尤其II型糖尿病）。用于诊断酮症酸中毒。HbA1c 3.8-5.8%反映1-3个月平均血糖水平，用于糖尿病病人的普查，及糖尿病人血糖的控制。,心肌酶检测项目,LDH 109-245U/L 心肌损伤会引
20、起LDH显著增高；判断白血病的疗效和预后。HBDH 111-199U/L 增高：急性心肌梗死。CK 27-184U/L 增高：心肌梗死，肌肉损伤性疾病。CK-MB 0-12U/L 增高：急性心肌梗死。,电解质、离子类 检测项目,五临床生化检验常用质量评估指标,NO.1 空白吸光度,水空白，试剂空白，样本空白，空白速率1 试剂空白：影响Kit的线性范围和灵敏度，故在试剂盒评价时最常用的空白指标；试剂空白的意义就在于消除试剂本底的干扰。试剂空白的吸光度叫空白吸光度；按反应方向，试剂空白（R1+R2）有不同评判准：向上反应：试剂空白吸光度越低越好；如.GLU，规定，试剂空白0.2向下反应：试剂空白吸
21、光度越高越好；如.BUN，一般要求Ao1.02 空白速率：用速率法的试剂因为某些成份自己会发生较缓慢的变化,用水作样本时也会发生吸光度的变化,其变化率即空白速率.,一）PH值直接影响呈色 如ALB的颜色控制，就得在PH=4.15的酸性环境下，如果控制不准，将无法正常显色。二）PH影响酶活性 由于酶反应都会有一个最适PH，因此PH的控制对保持酶活力也至关重要。,NO.2 PH控制,是指测定结果与真值（或靶值）接近的程度。常用两种方法：标准物判定：用质控高、低值分别用该Kit测定，如值在其靶值的10%之内，则判定准确度合格。回收实验：向任意标本加入一定量，测理论值和实测值之比，范围95%-105%
22、为合格。,NO.3 准确度,NO.4 精确度,即重复性，指对同一样本重复测定时，每次测定结果与平均值的接近程度，即重复测定值之间的符合程度；用测值的平均值，求出SD；SD/X=CV%。，CV值愈小，精密度愈好。,1 线性范围：能准确测出的极限高值；实施方法：准备一份高值样品（其值略超出预计的线性上限）；然后倍比稀释成5点或7点，标出论值，测出实测值，做回归方程，求r2,要求r20.995%。线性范围与试剂样本比：对一些需要通过校准的试剂而言，如果改变试剂与样本的比例，线性范围也会发生相应变化。比如，同一TG试剂的样本与试剂比由原来的1：100改成1：200后，那么它的线性高值就可相应的达到原来
23、的2倍。同理，如果把比例变为1：50则线性范围也相应地变成为原来的一半。所来试剂样本比与线性范围成相应的比例。2、线性低值：即方法的分析灵敏度。1）用检测下限的形式表示，即能够与零浓度区分的最低的可以准确测定的浓度。eg.GGT的分析灵敏度为3U/L。2）用标准物的吸光度或着吸光度变化率表示。eg BUN分析灵敏度为 A/min=0.043（7.14mmol/L）,NO.5 线性,指在测某物浓度时，受到非目标的影响，导致结果偏高（正干扰）或者偏低（负干扰）。干扰物影响的大小有一个允许范围，可从有关文献中查到。超过范围的干扰存在，Kit不能上市。干扰物的分类1、内源性干扰：标本固有的：如测TG中
24、的FG；酶法测Cr的血清中肌酸。病理生成的：胆红素，脂类，某些治疗药物如VitC等。2、外源性干扰：如抗凝剂、防腐剂、器皿和工具的污染、试剂中杂质和杂酶。日常最常见的干扰：胆红素、脂血和Hb。,NO.6 干扰试验,37 加速稳定性：七天视为2-8 一年；2-8开口稳定性：如华鑫，瑞源，九强CO2，可开口稳定一月以上开盖稳定性特例：CO2：试剂在开盖情况下，空气中CO2会进入试剂中与试剂发生反应，与试剂中NADH反应，便使空白吸光度达不到特定的要求，引起检测能力的降低。使得测定值偏低。ALP，CR（苦）,Mg,HBDH,BUN：开盖后试剂的PH会因为空气中CO2的进入，发生改变，也会引起测定值的
25、偏差。,NO.7稳定性试验,NO.8方法学比较,1 可选用公认的推荐方法及权威参照对象进行有效比较；2 样品应新鲜，数量至少要40份。且有足够的，适合比例的浓度范围（正常值和异常值）。,1 包装规格考虑配合客户所需的机型及标本量使用，避免试剂的富余浪费（试剂比例），且应最大程度方便客户使用；（条形码试剂）2 测试量T：与试剂ml价格密切相关；通常在生化分析仪上对病人检测所用的试剂的用量很小,一般总共为240-350ul左右,所以根据一盒试剂来说(大约有150-300mL),就可以换算成多少的测试量。同样可以来说明它有每mL可以做多少的人份，一盒可以做多少的Test,或者多少人份。3 质控品及标
26、准品的溯源，保质期，报价？,NO.9 试剂盒包装规格及价格,六（辽沈地区）生化试剂市场前景参考,生化诊断试剂国产品牌状况,注:全国品牌合计约98家,销售额约18亿行业领导品牌:北京九强,上海景源,北京利德曼行业第一紧跟梯队:宁波美康,宁波瑞源,新昌康特,新昌夸克行业第二紧跟梯队:上海执诚,上海蓝怡,四川迈克,北京科美东雅市场主要竞争品牌：北京九强,上海景源,北京利德曼,宁波美康,宁波瑞源，新昌康特,新昌夸克,广东虹业,上海执诚,上海蓝怡,温州东瓯,温州伊利康;进口品牌:英国朗道,德国豪迈,法国医杰,日本一化,日本和光,日本协和,日本生研,德国autec,日本natrubo,西班牙biosyst
27、em,爱尔兰欧迪,德国PRODIA,芬兰Orion进口原装:贝克曼,雅培,奥林巴斯,杜邦(西门子),罗氏,辽沈地区市场前景1 市场准入门槛的降低使得品牌竞争剧烈，医疗体制改革和国家对基础医疗加大投入及医院对成本控制的关注（公开招投标越来越多),政府对体外诊断试剂经营监管的规范，使得价格呈连年走低态势，但整个市场也随着国家对医疗事业投入的加大而增长。2 辽沈发达地区设备较为先进，单个测定试剂用量越来越少，但病人标本在增加，故试剂用量呈缓慢增长态势，主要增长点在新项目上，部分地区随着县乡级医院大量购置新设备，常规试剂用量增长迅速。市场推介：推介资料：产品目录，特色产品彩页客户拜访信息取得（附 客户
28、拜访记录表）分析客户潜在需求（如，试剂成本，专用包装，常规项目试剂质量，新开展项目意向等）核算供应价格：/ml,/T,包装规格，切莫忽略标准品价格（是否另购）；合适的市场切入点：常规品种目前品牌众多，且质量基本差不多，医院用起来一般不会有质量问题（TB/DB;PA;GSP;CO2使用情况？）换起来难度极大，参考以低廉的价格（至少比原来进价低10%）、优良的售后服务，专用包装等争得市场空间；新项目产品的介入：ADA，AFU,AFP，GPDA NAG，mALB,CSF，B2-MG CYS-C，1,5-AG，D3-H,HCY,D_D 等开展情况；,附：医院客户拜访记录及资料,宁波瑞源生物科技有限公司销售公司：宁波市江北广合元医疗器械有限公司地 址:宁波市江北区兴甬路88号 邮 编：315021联系电话:057484672267 销售热线（商务部）:057487233226 传 真:057487628071技术服务部：057487629073 刘会永 辽宁 业务经理 技术服务工程师手 机,真诚期待与您的合作！,Quality is our profession,
