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1、乳腺癌基因治疗,（gene theraph）,肿瘤学 王晓霞 张鑫君 钱露 朱琼 李倩 许莹莹 张德芳 郑侠 丁琳 主讲人：王晓霞,常用治疗基因,HSV-tk/GCV CD/5-FCB7 IL-2 IL-12 IFN TNF VEGF,载体系统,逆转录病毒腺病毒脂质体裸DNA,一、自杀基因治疗,HSV-tk/GCV（单纯疱疹病毒胸苷激酶/甘昔洛韦）和CD/5-FC（胞嘧啶脱氨酶/5-氟尿嘧啶）是目前研究最多、进展最快的自杀基因系统。特点：产生旁观者效应，即转染了自杀基因的肿瘤细胞死亡之后，还可引起周围邻近的未转染自杀基因肿瘤细胞死亡。,1、Sacco等报道应用转基因乳腺癌的鼠模型，对乳腺癌细胞
2、传递GCV后发现肿瘤细胞死亡。2、Link等的体外实验表明，利用HSV-tk转染乳腺癌细胞株HTB126,用GCV治疗，肿瘤细胞得到有效抑制,3、Kwong等先用HSV-tk/GCV系统治疗同种鼠的乳腺癌细胞株MOD,发现仅10%的肿瘤细胞被HSV-tk转染，出现90%的非转染肿瘤细胞被完全抑制。他们用同种鼠的乳腺癌细胞进行肝内移植产生肝转移模型，然后用GCV治疗，肿瘤受到明显抑制。,二、抑癌基因治疗,1、在乳腺癌治疗中应用最多的是p53基因,将外源野生型p53基因转染突变或失活的肿瘤细胞，使之能逆转其恶性表型。Seth等报道将野生型p53基因转染突变或失活的肿瘤细胞，可以逆转其恶性表型。,2
3、、在乳腺癌家族中发现抑癌基因BRCA-1常存在突变而表达过低。实验表明，转入野生型BRCA-1后，肿瘤细胞生长往往受限制。目前已知，在乳腺癌动物模型中采用装有BRCA-1的逆病毒载体，直接注射入瘤内，可抑制晚期乳腺癌胸壁转移瘤的生长。,三、导入免疫原性相关分子,激活T淋巴细胞至少需要双重激活信号，第一信号：T细胞抗原受体与肿瘤抗原结合；第二信号：肿瘤细胞上的协同刺激分子（CM）如B7与T细胞上的协同刺激分子受体结合，CTL通过溶细胞作用直接杀伤肿瘤细胞，是抗肿瘤免疫中的主要效应细胞。共同刺激因子B7等转导入肿瘤细胞，能使其增强肿瘤细胞免疫原性，诱导并激发体内淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。,四、
4、导入免疫反应相关细胞因子基因,如IL-2、IL-12、IFN、TNF 等，以增强或诱发机体抗肿瘤免疫反应。实验中主要通过基因转导修饰肿瘤细胞或免疫效应细胞，增强免疫效应细胞 活性，发挥机体抗肿瘤免疫的功能，达到治疗的目的。将IFN基因修饰人体乳腺癌细胞后，在裸鼠上种植，其成瘤率大为下降，并使机体具有抑制再植成瘤的免疫功能。,五、抗血管生成基因治疗,抗血管生成基因治疗主要针对VEGF。1、Kwong等将表达VEGF1t-1受体胞外区域分泌形式的基因构建到腺病毒载体，经静脉注射到小鼠脾CT26-CL25肿瘤模型中，发现注射基因的小鼠仅有很小的残余肿瘤，而对照组肿瘤大且伴有肝转移。,2、Saleh等
5、将反义VEGF cDNA的真核表达载体转染鼠C6神经胶质细胞，发现即使在缺氧条件下，细胞VEG表达水平仍低，将细胞种植在裸鼠体内，有反义VEGF的细胞生长较对照组明显被抑制。,六、多基因联合治疗,乳腺癌的发生常常是多个基因改变的结果。纠正单个基因的治疗方法难以取得很好的疗效，因此联合应用不同的基因治疗方法，从不同的角度进行治疗，相互间取长补短，从而产生相加或协同效应，这是目前基因治疗的发展方向。如自杀基因和细胞因子基因联合，肿瘤抑制基因和细胞因子基因联合，不同细胞因子基因联合，抗血管生成基因与肿瘤抑制基因联合等等,1、自杀基因和细胞因子基因联合，自杀基因可直接杀伤肿瘤细胞而细胞因子基因介导的抗
6、肿瘤效应是间接杀伤肿瘤细胞，如果与自杀基因联合治疗，则可通过自杀基因的表达直接杀伤一部分肿瘤细胞，另外通过细胞因子基因的表达激发机体的抗肿瘤细胞免疫功能从而产生协同效应。,2、肿瘤抑制基因和细胞因子基因联合，肿瘤抑制基因通过抑制增殖或转移，促进分化，诱导凋亡等途径与细胞因子联合间接杀伤肿瘤细胞，产生相加效应。Putzer等报道用V型腺病毒连接IL-2和p53基因治疗鼠的乳腺癌动物模型，可使肿瘤明显缩小，优于单一基因治疗。,3、不同细胞因子基因联合，通过细胞因子生物活性，诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL),巨噬细胞和NK细胞的活性及抗体产生，增强抗肿瘤免疫效应。4、抗血管生成基因与肿瘤抑制基因联合
7、，P53调节肿瘤血管生成,丢失P53使得血管生成抑制因子的生成减少。P53可使VEGF表达减少，从而产生协同效应。,七、HER-2基因在乳腺癌研究的进展,HER-2家族及结构 人类表皮生长因子受体是一族具有酪氨酸激酶活性的高同源性蛋白质。该家族成员包括HER-1、HER-2、HER-3、HER-4。HER-2参与抑制细胞凋亡，维持或促进肿瘤细胞生长；上调血管内皮生长因子（VEGF）/血管通透性因子，促进肿瘤新生血管生成，增加肿瘤细胞的侵袭力，破坏机体组织抗侵袭屏障等。在正常组织中为阴性或微量表达，在乳腺、卵巢、肺、胃、肝等肿瘤中均可有过量表达。,HER-2与靶向治疗 由于HER-2表达产物是一
8、种具有膜外位点的跨膜癌基因蛋白，其过表达一般仅存在于肿瘤细胞。因此可作为抗乳腺癌基因治疗的靶抗原。近年来针对HER-2的多种不同种类的单克隆抗体相继出现。Herceptin是其中最成功的例子。Herceptin抗乳腺癌的主要机制可能包括：拮抗整个HER-2 网络组生长信号传递；加速蛋白受体的内化和降解；通过ADCC作用增强免疫细胞攻击和杀伤肿瘤,细胞的能力；下调血管内皮生长因子和其他血管血管生长因子。综上所述，HER-2过表达提示乳腺癌恶性程度高，有转移倾向，通过检测HER-2水平可对患者预后进行评价和为治疗方案的选择提供依据。关于HER-2的靶向治疗已逐步成为临床治疗乳腺癌的重要手段，他不仅
9、延长了乳腺癌患者的生存时间和改善了生活质量，同时还提示了对特异性分子进行靶向治疗的可行性。目前利用HER-2对乳腺癌进行诊治已取得了一定进展，但,我们仍应意识到HER-2过表达在乳腺癌发病整体中仅占1/31/4。单靠HER-2过表达去诊治乳腺癌是有局限性的。另外对HER-2的结构、机制、检测方法、治疗策略仍有许多问题需进一步探讨。但是我们相信随着对乳腺癌研究的不断深入，乳腺癌的诊断水平必将得到提高。HER-2作为乳腺癌的一个研究方向，也将会得到更加深远的发展。,谢谢！,HSV-tk/GCV,HSV-tk基因编码胸苷激酶，该酶可将核苷类似物（NA）无毒性药物甘昔洛韦（GCV）代谢为二磷酸化合物，
10、后者在细胞内酶的作用下成为有毒性的三磷酸GCV,三磷酸GCV明显抑制细胞DNA聚合酶，从而抑制蛋白质的合成，杀伤肿瘤细胞。,CD,CD基因编码胞嘧啶脱氨酶，可将胞嘧啶代谢为尿嘧啶，使细胞内无毒性抗真菌药物5-FC代谢为5-FU。,VEGF,VEGF是促进血管形成的活性最强的因子之一。血管形成在肿瘤生长浸润转移中起关键作用。VEGF特异性与受体结合后，可刺激血管内皮细胞增殖，促进血管形成，并增加血管通透性，使肿瘤细胞一方面可以获得充分的营养而迅速增值，另一方面也容易通过血管内皮细胞进入血流从而发生远处转移。,p53,野生型p53是一种抑癌基因，具有诱导细胞凋亡的功能，从而控制细胞的分化与增值，发挥抑癌作用,BRCA-1,BRCA-1是抑癌基因，具有正常生理功能的BRCA-1蛋白参与DNA损伤的修复，BRCA-1在正常乳腺细胞核内起重要的调控作用，参与细胞周期的调控，抑制细胞分裂，促进终末分化，诱导细胞凋亡，为一个重要的细胞周期负调控子。BRCA-1突变则导致BRCA-1编码的蛋白质从细胞核内进入细胞质中，从而丧失与DNA结合的功能，导致上述细胞凋亡功能丧失，从而最终导致细胞恶变。,
