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1、2015年CLSI折点更新,摘要1委员会成员5本文件主要变化简介 13CLSI建立解释标准和质量控制过程简介 16CLSI参考方法与商品化方法和CLSI与FDA解释标准（折点）17自2010年以来CLSI折点的增加及修订 18抗菌药物敏感性试验分委会宗旨声明 20表格使用说明 21,Table1A-1C抗菌药物的分组,Table2A-2J 纸片法及MIC法的解释标准,Table3A-3I筛选实验及确证实验的解释,Table4A-5G质量控制,Table6A-8B制备方案,AppendixA-Glossary3补充说明及术语表,变化的概要,M100-S25 第 13-15页.,New!,重大的变
2、化2015（1）,最大变化引入 Carba NP试验引入流行病学cutoff值（ECVs）的概念折点沙门氏菌增加了“替代药物”培氟沙星纸片法的折点增加了阿奇霉素的折点（伤寒沙门氏菌）,New!,重大的变化2015（2）,试验和报告推荐药物在U组药物的选择中增加了磷霉素表格使用说明变化附加并着重强调“替代药物”头孢唑林澄清CNS-内酰胺酶的筛选建议,New!,重大的变化2015（3）,筛选及确证试验增加概述检测方法删除MHT操作方法质量控制增加当应用商品化系统时，应遵循制造商对于质量 控制的建议。澄清应根据需测试的抗菌药物来选择QC菌株增加判断苯唑西林纸片药物含量衰减与否的评估内容,New!,重
3、大的变化2015（4）,质量控制增加多种药物在相应的质控菌株中的QC范围增加eco ATCC35218 关于检测-内酰胺酶的处理意见附录修改肺炎链球菌中头孢洛林药敏结果的建议增加了肠杆菌科中头孢吡肟折点变化，SDD的解释说明增加流行病学cutoff值,碳青霉烯类抗生素耐药机制,新/旧CLSI判断标准,初筛试验阳性和对三代头孢菌素 中一种或多种药物耐药，则常规做MHT，MHT 阳性菌株，应报告对所有碳青霉烯类药物耐药；若阴性，使用M100-S20 解释标准来解释碳青霉烯药物 MICs,感染控制程序或流行病学调查需要时做MHT，对于MHT 阳性菌株，不需要更改碳青霉烯类敏感性试验结果的解释。,In
4、troduction to Tables 3B and 3C.Tests for Carbapenemases in Enterobacteriaceae,Pseudomonas aeruginosa,and Acinetobacter spp.,P112,Introduction to Tables 3B and 3C.Tests for Carbapenemases in Enterobacteriaceae,Pseudomonas aeruginosa,and Acinetobacter spp.,P112,The Carba NP(Carbapenemase Nordmann-Poir
5、el)test,Carba NP试验,Carba NP确证试验是一种肠杆菌科、铜绿假单胞菌和不 动杆菌属细菌中碳青霉烯酶的表型检测方法。采用比色法主要用于流行病学研究或感染控制，尚不推荐作为临床 常规使用。研究表明，此试验在检测KPC、NDM、VIM、SPM和 SME型碳青霉烯酶方面具有较好的敏感性（90%）和特 异性（90%）。对于OXA-48型碳青霉烯酶敏感性低（11%）。,什么时候做,（使用M100-S20(January 2010)）解释标准在实验室实施修订的碳青霉烯类抗生素的MIC标准之前，如果肠杆菌科亚胺培南，美罗培南的MIC值为2-4ug/ml或厄他培南MIC值为2ug/ml，则
6、可能产碳青霉烯酶，需做此试验。,（使用当前的解释标准）主要用于流行病学研究或感染控制。注意：对于Carba NP 阳性菌株，不需要更改碳青霉烯类敏感性试验结果的解释。目前不推荐作为临床常规使用。,所需的试剂及材料,P120,临床试验室试剂级纯水亚胺培南粉末细菌蛋白提取液（pH 7.4）ZnSO4.7H2O酚红粉末1N NaOH 溶液10%HCl 溶液1.5 mL微量离心管1 L 接种环储存装置,所需的试剂及材料,P120,临床试验室试剂级纯水亚胺培南粉末细菌蛋白提取液（pH 7.4）ZnSO4.7H2O酚红粉末1N NaOH 溶液10%HCl 溶液1.5 mL微量离心管1 L 接种环储存装置,
7、所需的试剂及材料,10mMZnSO4.7H2O0.5%酚红试剂0.1 N NaOH 溶液Carba NP 试验A液Carba NP 试验B液（A液+6ug/ml亚胺培南）,P120,试验操作步骤,注意事项：试验有三个部分：待测菌、质控菌、试剂质控 试剂质控部分不需要加入细菌，不需要孵育 选取血平板上过夜的菌落，不能选取含有抗生素培养基或选择培 养基上的菌落,结果判断,无效,阳性,阳性,阳性,阳性,结果判断,Carba NP试验细节,假阴性可能由以下原因导致：弱的碳青霉烯水解酶（如：OXA-48，SME-1，GES-5）存在于粘液型细胞内不同的碳青霉烯水解酶获得阳性结果所需时间不同：KPC快OX
8、A最慢,什么是ECVs,Cutoff值epidemiological cutoff values，ECVsECVs是根据体外药敏表型（MIC值）来区分有无获得 性和/或突变耐药细菌，该MIC值即为ECVs。“野生型”（wild-type,WT）指菌株MIC值ECV，说 明无获得性和（或）突变耐药；“非野生型”（non-wild-type,NWT）指MIC高于ECV，则菌株有获得性和（或）突变耐药。ECVs不同于临床折点，主要用于标识NWT菌株的出现 和发展。,如何确定ECVs,通过汇总不同来源细菌的MIC值来估计野生型菌株MIC值分布的上限，即获得ECVs。为了得到可靠的ECVs，必须具备以下
9、条件：,只能确定单一菌种的ECVs；MIC值必须是采用参考方法确定的；数据应不少于100株菌，且必须来源于至少 3个独立的实验室；MIC值分布应尽可能在稀释范围内,ECVs和临床折点,临床折点建立根据：抗菌药物的MIC分布相关细菌PK/PD临床疗效,ECVs建立根据：仅仅是MIC的分布,and,临床微生物室如何使用ECVs,万古霉素可用于治疗痤疮丙酸杆菌感染，但目前尚无临床相关折点。经验表明,由非野生型痤疮丙酸杆菌引起的感染，万古 霉素治疗效果差确认后的MIC值和ECV数据应与临床医生和药剂师共同 讨论，且MIC结果不应报告为敏感、中介或耐药。,从2010年2015年折点的增加及修订,P18,
10、Basnyat et al.2005.Clin Infect Dis.41:1467,伤寒全球发生率,WHO Background document:The diagnosis,treatment and prevention of typhoid fever.2003.,氟喹诺酮类和沙门氏菌纠葛,发展中国家的伤寒成为一个难题 如果不治疗将导致高的发病率和死亡率对于治疗沙门氏菌引起的疾病，包括伤寒，氟 喹诺酮类是很好的选择（便宜、口服）环丙沙星体外虽然“S”，但临床疗效不是很好,Crump et al.2008.Antimicrob Agents Chemother.52:1278.,氟喹诺酮
11、类非敏感怎么办？,P49,New!,沙门氏菌属氟喹诺酮类折点,机器法暂时无法满足需要，目前只能用ETEST测氧氟沙星、左氧沙星的MIC，如果无法做ETEST，可以用培氟沙星纸片法的结果代替环丙沙星无法做MIC时可以做纸片法,添加阿奇霉素Why？,阿奇霉素在体内的分布 血浆浓度低 集中在PMNs，单核细胞，淋巴细胞，肺泡巨噬细胞；有较高的胞内浓度（80-200倍）阿奇霉素的MICs低于细胞内浓度伤寒沙门菌是胞内病原菌阿奇霉素已应用于临床很多年，并很少出现治疗失败,Frenck R et al.2004.Clin Infect Dis.38:9517.Girgis et al.1999.Antim
12、icrob Agents Chemother.43:1441-4.,伤寒沙门氏菌,P49,New!,EUCAST:“Azithromycin has been used in the treatment of infections with Salmonella typhi(MIC 16 mg/L for wild type isolates)and Shigella spp.”,被要求时做仅用于伤寒沙门,药敏什么时候做？需做哪些药？,粪便中分离的沙门菌和志贺菌 氨苄西林、一种氟喹诺酮类和复方新诺 明，常规报告肠道外分离的沙门菌 除以上药敏外+一种三代头孢菌素，若需要可 以测试并报告氯霉素分离
13、于肠道内和肠道外伤寒样沙门菌(伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌AC)需进行药敏试验。分离于肠道内非伤寒样沙门菌不需进行常规药敏试验。,CLSI,P32,非复杂性尿路感染IDSA,磷霉素,FDA仅批准用于治疗由eco，efa引起的女性uUTIs 对肠杆菌科，葡萄球菌属，铜绿假单胞菌也有活性在美国以口服的形式出现，单次给药静脉注射FDA未批准静脉注射只用于严重的感染（MDR）,Karageorgopoulos,et al.2012.J Antimicrob Chemother.67:255.Keating,G.2013.Drugs.73:1951.Michalopoulos et al.2011.Int
14、J Infect Dis.15:e732.,怎样检测磷霉素,琼脂法（纸片法、琼脂稀释法、Etest）CLSI、FDA折点仅用于大肠埃希菌、粪肠球 菌（尿路感染）EUCAST MIC的折点用于肠杆菌科(32 g/ml=S;32 g/ml=R),M100-S24,P53,M100-S25,P22,New!,P28,2014,2015,碳青霉烯酶检测方法概述的增加,P112,碳青霉烯酶检测方法概述的增加,P112,碳青霉烯酶检测方法概述的增加,P112,感染控制及流行病学要求鉴定肠杆菌科，铜绿假单胞菌，不动杆菌属碳青霉烯酶的产生时做此试验，目前不推荐其作为临床常规使用。产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌，用目
15、前的解释标准，通常会表现对一种或 多种碳青霉烯类药物中介或耐药。厄他培南非敏感是产生碳青霉烯酶最敏感的指标。同时会对三代头孢菌素中（如，头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、头孢 唑肟和头孢曲松）一种或多种耐药;然而，含有SEM、IMI型的碳青霉烯酶菌株通常表现为对头孢菌素敏感。试验室用M100-S20(January 2010)碳青霉烯酶MIC解释标准，当亚胺培 南或美罗培南的MIC为2-4ug/ml，厄他培南为2ug/ml时，怀疑此菌株产碳 青霉烯酶，须执行MTH、Carba NP或分子试验。,2015年,2014年,P112,嗜血杆菌QC菌株的选择,P76,苯唑西林药物含量的评估,P84,新增药物相应的QC范围,New!,新增药物相应的QC范围,New!,旧的内酰胺酶抑制剂组合检测 大肠埃希氏菌ATCC35218或肺炎克雷伯菌ATCC 700603新的内酰胺酶抑制剂组合检测ceftaroline-avibactam、ceftazidime-avibactam（ATCC 700603）ceftolozane-tazobactam（ATCC 700603、ATCC35218）,P158,质控菌株内酰胺酶抑制剂,作为-内酰胺酶抑制剂的质控菌株储存不恰当容易质粒容易丢失,Thank You,
