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1、精品论文四跨膜蛋白 CD151/整合素 beta 1 复合体在肝细胞肝癌中表达及预后意义施国明，阮尽，柯爱武，周俭，樊嘉5（复旦大学附属中山医院肝癌研究所） 摘要：目的：探讨四跨膜蛋白 CD151/整合素b1 复合体在肝细胞肝癌中的表达及与临床病理 特征、预后的关系。方法：应用免疫组织化学检测 301 例肝细胞肝癌患者肿瘤组织中 CD151/ 整合素b1 的表达，分析其与病理特征及预后的关系。结果：肝癌组织中 CD151 过表达与多10结节肿瘤（p=0.46）、微血管侵犯（p=0.01）、大肿瘤（直径5cm，p=0.027）及高 TNM 分期（p=0.001）相关；而整合素 1 与微血管侵犯（
2、p=0.028）、大肿瘤（直径5cm，p=0.04）、高 TNM 分期（p=0.046）相关。生存分析显示 CD151+组的 3、5、7 年总体生存率明显低于CD151-组（p0.01），而 3、5、7 年累积复发率显著高于后者。CD151+/整合素 1+组的 3、5、7 年总体生存率明显低于 CD151+/整合素 1-、CD151-/整合素 1+和 CD151-/整合素151-组（p 5cm, p = 0.027) and highTNM staging (p = 0.001), while high level of integrin 1 was associated with micro
3、vascular35invasion (p = 0.028), large tumor (diameter 5cm, p = 0.04) and high TNM staging (p = 0.046).The postoperative 3-, 5-, and 7-year overall suvival rates (OS) of HCC patients in the CD151+ group was significantly lower than that in CD151- group (p 0.01). The 3-, 5-, and 7-year cumulative recu
4、rrence rates in the CD151- group was higher than those of CD151+ group. Moreover, 3-, 5-, and 7-year OS in CD151+ / integrin 1+ group was significantly lower than40those in CD151+ / integrin 1-, CD151-/ integrin 1+ and CD151-/ integrin 1-groups (p0.01).Conclusion: CD151/integrin 1 functional complex
5、 is associated with invasion, metastasis and poor prognosis in HCC.Key words: Tetraspanin; CD151; Integrin 1; HCC; Invasion; Prognosis基金项目：教育部新教师基金（20090071120025）作者简介：施国明,出生 1972 年 10 月，男，副主任医师，主要研究方向：肝癌侵袭和转移通信联系人：樊嘉, 男，教授，主要研究方向：肝癌侵袭和转移. E-mail: jiafan99- 8 -450引言CD151 是最早发现与肿瘤侵袭转移相关的四跨膜蛋白，目前在肝内胆管
6、细胞癌1、肺癌2、肝癌3等多种肿瘤中发现其过表达与肿瘤转移与复发密切相关。CD151 通常与整合素、 生长因子受体和自身或其它四跨膜蛋白形成功能复合物参与肿瘤进展4。我们前期研究已发现CD151与整合素b1形成复合物，本研究旨在探索CD151与整合素50b1在肝细胞肝癌患者癌组织中表达，分析其表达程度与临床病理之间的关系，并对CD151/整合素b1在原发性肝癌的侵袭与转移中作用作初步探讨。1材料与方法1.1一般资料301 例标本取自中山医院肝肿瘤外科 19972000 年间行根治性切除、具有完整随访资55料的肝细胞肝癌患者，术后经病理学证实。肝细胞肝癌组织按 UICC 标准分级及 TNM 分期
7、， 其中男性 253 例，女性患者 48 例。所有患者标本均在手术切除后 15 分钟内采集。1.2试剂鼠抗人 GAPDH 单克隆抗体，鼠抗人 CD151 单克隆抗体和兔抗人整合素b1 单克隆抗体（购自美国 Abcam 公司）；HRP-羊抗鼠二抗，免疫组织化学 SP 试剂盒及 DAB 试剂盒（购60自上海长岛生物技术公司）。1.3免疫组织化学检测 CD151 和整合素b1 蛋白表达采用免疫组织化学SP法，参照SP免疫组织化学试剂盒说明书进行。细胞膜见棕褐色颗粒为CD151和整合素b1表达阳性细胞。每例切片选5个高倍视野, 按阳性细胞数占同类计数 细胞的百分比, 将染色结果分为阴性与阳性，阳性判断
8、标准参照前述研究4。651.4统计学分析采用SPSS12统计分析软件处理，计数资料组间分析采用2检验，p50%为阳性），整合素1阳性染色标准根据中位数判断（80%为阳性）。301例肝癌组织CD151阳性占46.5% （140/301），而整合素1阳性占50.2%（151/ 301），CD151蛋白过表达与肿瘤大小（p=0.027）、高临床TNM分期75（p=0.001）、微血管侵犯（p= 0.01）、多结节（p=0.046）相关，而与患者年龄、Child-Pugh 评分、性别、HBsAg、血浆AFP水平、分化程度与肿瘤包膜无关。而整合素1蛋白过表达与 肿瘤大小（p= 0.04）、高TNM分期
9、(p= 0.046)、微血管侵犯（p=0.028）、多结节（p=0.63） 有关，而与患者年龄、性别、HBsAg、Child-Pugh 评分、血浆AFP水平、分化程度及包膜无 关（表1）。802.2CD151 与整合素 1 表达与肝癌患者预后的关系301例肝癌患者的3、5、7年总生存率（OS）与累积复发率分别为71.09%与43.18 %，57.47%与56.14 %，41.19%与69.10 %。我们分析了CD151与整合素1表达对患者生存预后影 响。CD151过表达患者3、5、7年OS和累积复发率分别为（40%与46.42%，51.42%与52.14%，60.71%与 52.85%，而CD
10、151低表达患者分别为19.87%与18.63%，33.54%与31.67%，44.72%85与37.26%，两组差异具有统计学意义（p0.05）。我们按照CD151与整合素1表 达不同，把301例病例分为CD151- 整合素1- ，CD151-/整合素1+ ，CD151+/整合素1- 与90CD151+/整合素1+ 四个亚群，CD151+/整合素1+组3、5、7年OS和累积复发率分别为（45.16%与56.98%，56.98%与62.36%，67.74%与 62.36%），预后明显差于其它三组间未见明显差异（图2）。95100图1 CD151和整合素b1在肝癌和癌旁组织中定位和表达105A1
11、、B1、C1、D1、E1、F1、 G1、H1是癌旁与肝癌组织的HE染色；A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2、H2是癌旁与肝癌组织中检测CD151的表达；A3、B3、C3、D3、E3、F3、 G3、H3为在癌旁与肝癌组织检测整合素1表达；C2、C3与D2、D3是肝癌组织中检测CD151 与整合素1高表达；E2、E3与F2、F3是CD151低表达，而整合素1高表达；G2、G3与H2、 H3是CD151高表达，而整合素1低表达。A、C、E、G为100；B、D、F、H为400。110表1 CD151和整合素1在301例肝癌组织中的表达与临床病理特征关系参数 性别男女 年龄5220 肿瘤数目 单多
12、 微血管侵犯 有无 肿瘤包膜完整 无 肿瘤分化 I/IIIII/IV肿瘤大小 (cm)55高低1161372424738067811151302531636277991401600164827679115145251616612515555548510739501011117110269593921101140TNM 分期I/II IIICD151 染色P 值0.5970.6710.7560.25410.3660.0460.010.3010.5440.0270.001整合素 1 染色高低128125232583706880123122282867588492150150108165708512
13、913122191661351445059101914247109103789573553723114127P 值0.7340.150.9780.31510.0740.630.0280.2620.5040.040.046图 2 CD151 和整合素 1 表达与患者生存分析A 与 B：CD151 的总体生存曲线与累积复发率曲线；C 与 D：为整合素 1 的总体生存曲线 与累积复发率曲线；E 与 F：CD151-整合素 1-，CD151-/整合素 1+，CD151+/整合素 1- 与115CD151+/整合素 1+ 四组的总体生存曲线与累积复发率曲线。3讨论120CD151作为四跨膜蛋白家族的一员
14、，其表达与多种肿瘤的侵袭、转移及预后相关1-9。我们的实验发现过表达CD151与肝癌的微血管侵犯、肝癌低分化和高TNM分级正相关，以 上结果表明过表达CD151可能与肝癌侵袭与转移相关。这与CD151调节细胞与细胞外基质的 黏附，参与基质金属蛋白酶的分泌与胞外激活及细胞移动等生物学功能相关9, 10，这与在前 列腺癌、胃癌、黑色素瘤与肺癌的研究一致11-13。四跨膜蛋白的一个明显的生物学特征是其可以与细胞表面的生长因子受体、整合素相 偶联，同时不同的四跨膜蛋白可以通过其跨膜区及N-末端相互偶联形成复合物，研究者把这125130135140145种由不同TM4SF成员与细胞表面分子组成的复合体称
15、之为四跨膜蛋白网络14，15。如CD82与EGFR、ErbB2、ErbB3；CD9、CD81与HB-EGF、EWI2/PGRL、TGFa 等偶联；CD9、CD63、 CD81、 CD82、CD151与NAG-2等可在细胞表面形成TM4SF的复合体，在这一网络中TM4SF 起着链接分子的作用，进一步研究发现CD151在其中的作用最为突出。通过CD151分子上一 些位点的突变研究显示，CD151与其他TM4SF成员的偶联减少，可导致四跨膜蛋白网络中的生长因子、整合素信号等的功能受损，而其他的TM4SF无此功能。当前对这一现象的理解为细胞表面的生长因子受体、EWI2等的功能发挥依赖整合素与细胞外基质
16、的结合以及其与 后者的Cross-talk作用，而这种结合大部分是直接或间接通过CD151实现的。Sebastian等研究 表明CD151可对生长因子与整合素的交互作用有调节作用，在敲除CD151后，HGF诱导的细 胞增殖与转移几乎完全抑制16-19。我们根据免疫组织化学表达的强度把301例肝癌病例分为CD151-/整合素1-, CD151-/整合素1+, CD151+/整合素1- 与CD151+/整合素1+ 四组，生存分析显示，CD151+/整合素1+ 组的预后最差，其余三组生存没有明显区别。结果与CD151的生物学功能相符，而且CD151 的作用依赖于其功能复合物的存在，这在一定程度上反映
17、了CD151的作用方式。整合素被认为与肝癌预后密切相关，但多数学者认为其不能作为肝癌预后的独立因素， 需要结合其他的指标20，21。到目前为止，已有多种分子被证明可提高整合素1对肝癌患者 预后的判断，本研究应用TMA对301例肝癌患者的组织标本中CD151与整合素1表达进行分 析，提示其结合四跨膜蛋白CD151可明显提高对肝癌患者预后的预测。4结论本文给出了四跨膜蛋白 CD151 与整合素 1 功能复合物表达与原发性肝癌患者的不良预 后相关的结论。参考文献 (References)1. Ke AW, Shi GM, Zhou J, Wu FZ, Ding ZB, Hu MY, Xu Y, So
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