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1、任务2 培养基的制备技术,学以致用养细菌,人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的混合营养基质。,一、认识,化能自养菌氧化硫杆菌的培养基粉末状硫 10g KH2PO4 4g MgSO4 0.5g CaCl2 0.5g(NH4)2SO4 0.4g FeSO4 0.01g 水 1000mL（自来水即可）,提问：其中各组分作用是什么？,空气中的CO2,能源,碳源是什么？,氮源,盐,也可补加一部分碳酸钠。,培养一种大肠杆菌的培养基配方如下：葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g MgSO4 0.2g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水 1000mL大肠杆菌的营养类型？化能异养型。培养
2、基的基本要求？至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖,按成分不同划分按用途划分按物理形态划分,二、培养基的分类,(一)按成分划分：,天然培养基合成培养基半合成培养基,(一)按照培养基成分来源分：,a.天然培养基：利用化学成分还不清楚或不稳定的天然有机物制成的培养基。,优点：原料来源充足、营养丰富、经济简便 缺点：成分和含量不确定，重复性差 用途：适用于实验室粗放性实验和大规模生产之用。举例：麦芽汁培养基,天然培养基,b.合成培养基：用化学成分和量都确切知道的纯化学试剂制成的培养基。,优点：成分精确、稳定、重复性好 缺点：价格较贵，微生物生长缓慢用途：适用于做分类鉴定，生物测定、选种育种等要 求
3、较高的研究工作。举例：高氏一号培养基，查氏培养基等,(一)按照培养基成分来源分：,c.半合成培养基：用天然有机物和化学药品制成的培养基。,特点：能充分满足微生物的营养要求，适合于大多数微生物的培养。举例：牛肉膏蛋白胨培养基,可溶性淀粉 20.0克KNO3 1.0克K2HPO4 0.5克MgSO47H2O 0.5 克NaCl 0.5克FeSO4 7H2O 溶液2滴（10%）蒸馏水 1000毫升,牛肉膏 3.0 克蛋白胨 10.0 克食盐 5.0 克蒸馏水（自来水）1000毫升,合成培养基,天然培养基,天然的固体培养基如马铃薯块、麸皮、米糠、胡萝 卜条、木屑等；凝固剂(1.52琼脂)，可用于微生物
4、的分离、鉴定、计数、保藏等,凝固剂(0.30.6琼脂)。常用于观察细菌运动特征，噬菌体效价鉴定等。,微生物能充分接触养料，有利于生长繁殖及代谢产物积累，常用于微生物大规模工业发酵生产。,不被微生物液化、分解和利用；在微生物生长的温度范围内保持固体状态；凝固点温度对微生物生长无害；不因灭菌而被破坏；透明度好、黏着力强；配制方便，价格低廉。,理想的凝固剂应具备以下条件：,琼脂：胶体多糖，熔点96，凝固点40-50,基础培养基加富培养基选择培养基鉴别培养基生产用培养基,(三)按照培养用途分：,b.加富培养基：根据待分离微生物的特殊营养要求配制的营养物质。使目标微生物能在其中旺盛生长，逐步占优势，从而
5、达到与杂菌分离的目的。培养时要同时考虑营养成分和培养环境两个因素，才能达到预期的目的,a.基本培养基：能满足一般微生物生长繁殖所需要培养基。,(三)按照培养用途：,根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类；,分离培养在特殊环境中才能生长的微生物，以纤维素或石蜡油为唯一碳源的富集培养基，可以从混杂的微生物群体中分离出能分解纤维素或石蜡油的微生物。,富集培养,C.选择培养基 在培养基中加入抑制剂以杀死或抑制不需要的菌种，而目标微生物因对该抑制剂有抗性而正常生长繁殖的一类培养基。,(三)按照培养基的用途分：,抑制剂：青霉素（抑制 G+细菌）分离G-细菌 抗生素 氯霉素，链霉素（抑制细
6、菌 分离酵母、霉菌 染料 胆盐：抑制G+分离G-孟加拉红：抑制 分离 用于选择性的物理因素有：温度，氧气，pH值，渗透压等,目的：增殖少数 手段：“投其所好”混合样品 富集培养基 成为中劣势菌 选择培养基 优势菌 目的：抑制多数菌 手段：“取其所抗”,d.鉴别培养基：利用微生物的代谢产物与指示剂的显色反应，快速鉴别不同微生物的营养基质。,(三)按照培养基的用途：,鉴别培养基(differential medium),伊红-美蓝培养基（EMB）：伊红和美蓝二种染料，可用于鉴别食品、水源、乳制品等待检样品中是否含有大肠杆菌。如果有大肠杆菌，则其代谢产物能与伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属
7、光泽。,目的：为了获得数量充足和质量较好的健壮菌体，同 时兼顾菌种对发酵培养基的适应能力。特点：营养成分丰富且完全，氮源和维生素含量高、易被利用,目的：获得最大强度的代谢产物。特点：原料粗放、来源充足、价格低廉、碳源比例大，有时还在发酵培养基中添加前体、促进剂或抑制剂。,三、培养基应具备的条件,具有合适的营养物质，满足微生物对六大营养物质的需求；应始终保持在微生物发育的pH值范围内；任何培养基一旦配成，须立即灭菌后才能使用。,（一）目的明确（二）营养协调（三）营养适宜（四）条件适宜（五）经济节约,四、配制培养基的原则,（一）目的明确,（二）营养适宜,自养微生物简单的无机物异养微生物至少提供一种
8、有机物,培养自生固氮微生物？,培养乳酸菌？,（三）营养协调,营养物质的浓度及配比合适 浓度过小 浓度过高,水碳源氮源P、SK、Mg生长因子,（三）营养协调,一般培养基中C/N比为（100:0.52）但谷氨酸生产中较特殊：C/N 4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；C/N3/1 时，菌体生长受抑制，而谷氨酸大量增加。,1.渗透压等渗溶液高渗溶液细胞发生（）低渗溶液 细胞（）,（四）条件适宜,细 菌：7.08.0放线菌：7.58.5酵母菌：3.86.0霉 菌：4.05.8,2.pH,pH 内源调节 缓冲液：K2HPO4/KH2PO4（pH 6.47.2）调节方式 固体碳酸盐：CaCO3 外源调节：流加酸或碱,磷酸缓冲液：pH值从6.7.之间,2.pH,3.O2浓度的调节,由微生物与氧气的关系形成了三类微生物：专性好氧性微生物 专性厌氧性微生物 兼性厌氧的微生物,实践对策：专性好氧性微生物：空气提供氧气、工业上采用通气装置。专性厌氧性微生物：采用理化方法除氧、向培养体系加入还原剂（半胱氨酸、巯基乙酸钠、Na2S和抗坏血酸）,价格低廉货源充足运输方便无毒环保,（五）经济节约,总 结,6大类营养物质：4大类营养类型：常用的培养基分类别包括：培养基应具备的3个条件：配制培养基的5大原则：,
