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1、克隆猪的重要事件,Situation worldwide for pig cloning,USA,England,JPN,CHN,DK,ITA,GER,South Korea,AUS,胚胎细胞核移植克隆,1985年:美国威斯康星大学 Robl and First 首次简单的描述了猪的胚胎细胞核移植 J Reprod Fertil,33(Suppl):101-114;1989年:该大学N.First教授课题组的Prather等，报道了世界首例胚胎细胞克隆猪诞生Prather,et al.Biol Reprod,41:414-418;特点：供核细胞为猪早期胚胎卵裂球，受体卵胞质为体内成熟的MII卵
2、母细胞，体内培养后进行胚胎移植！此后到1999年，利用胚胎细细胞核移植获得克隆猪的报道就再也没有了！直到2000年，才有我国东北农大李光鹏教授等再次成功获得胚胎细胞克隆猪，重复出Prather等人的研究Li GP,et al.Cloning,2(1):45-52。,普通体细胞克隆（1）,1999年，美国密苏里哥伦比亚大学Prather教授课题组报道了利用猪胎儿成纤维细胞与体外成熟卵开展体细胞克隆的研究结果，但是效率很低，所获囊胚质量也差，没有获得克隆猪Tao T et al.cloning,1:55-62;Anim Reprod Sci,56:133-141;Prather教授甚至一度想放弃体
3、细胞克隆猪的研究！2000年，英国PPL公司Polejeva et al.Nature,407:86-90，日本NIAI动物遗传育种系Onish et al.Science,289:1188-1190相继利用体内成熟卵开展体细胞克隆获得成功，但是操作复杂，效率低。2000年，美国Infigen公司Betthauser et al.Nature Biotechnol,18:1055-59的报道利用体外成熟卵、胎儿成纤维细胞成功获得克隆猪，才奠定了今天流行的利用体细胞核移植生产克隆猪的方案！,普通体细胞克隆（2）,此后，类似的研究如雨后春笋，虽然成功的国家不多，也还是吸引了几十家课题组不断尝试结合
4、转基因、基因敲除等技术为新品种培育、异种器官移植、人类疾病模型研制等工作打基础。2006年，Prather课题组Li RF等将克隆胚胎进行玻璃化冷冻，获得克隆猪Li et al.,Bio Reprod.75:226-230 2007年，丹麦奥胡斯大学成功获得国际首例手工克隆猪Du et al.,Theriogenology,68:1104-1110；同年，还得到了玻璃化冷冻手工克隆胚胎的后代Du et al.,cloning and stem cells,9(4):469-176。,转基因体细胞克隆（1）,2001年，Prather课题组报道首例转GFP基因体细胞克隆猪诞生Park et al
5、.Animal Biotechnol,12(2)173-181;2002年，Lai等在“Science”和Dai等在“Nature biotechnology”上几乎同时发表了敲除-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪的文章;2003年，PPL公司的Phelps等在“Science”上报道了世界首例完全敲除-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪诞生;2005年，Kolber-Simonds等在“PNAS”上才获得无-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪,转基因体细胞克隆（2）,2006年，Prather课题组的Lai等成功克隆了国际首例能丰富表达omiga-3型不饱和脂肪酸的转基因克隆猪
6、，为家猪新品种培育奠定了基础;2007年，丹麦奥胡斯大学也得到了可能整合老年痴呆症致病基因的克隆猪,The Journal of Clinical Investigation jci.org April 2008,SEPTEMBER 26，2008,2005年，中国农大报道国内首例普通克隆猪,2006年，东北农大获得国内首例转GFP基因克隆猪,2007年，上海得到普通克隆猪,2007年，广西大学相继得到普通克隆猪,2007年，中国农大先后获得世界首例转溶菌酶基因克隆猪、敲除抑肌素基因克隆猪,我国大陆体细胞克隆猪概况,克隆猪技术本身的发展,卵母细胞：体外成熟（在美国已经有商业化的公司专门提供体外
7、成熟的卵母细胞）。胚胎重构：传统的显微操作法Vs.手工克隆法，二者效率相当，但手工克隆法前期投入少，无需贵重仪器。重构胚培养：较为成熟，体外发育囊胚率甚至高于IVF。,高效性：与传统克隆相比，手工克隆在囊胚率、怀孕率上都显示出较高2.稳定性：手工克隆技术通过囊胚生产，选择优质囊胚进行移植，效率稳定。3.操作简便性：手工克隆完全手工完成，在经过短期培训后，一个拥有普通生物背景的工作人员及能完成全部操作。4.易于推广：已形成手工克隆实验室的标准配置以及标准操作流程，更加容易实现整套体系的复制和推广。5.费用低廉：不需要昂贵的仪器设备、不需要高级科研人才；只需要一台普通体式显微镜、一个生物背景的工作
8、人员、一把刀即可。6.易于推广商业化：仪器设备费用低廉、技术易于掌握、人才需求方向广、生产效率高等优点决定了易于推广。,Ovulation approx.24/6 hrs Post-transfer!,克隆猪的商业化现状和前景,农业动物育种：美国Viagen公司医学 美国Infigen公司 丹麦Pixgene公司其他 华大方舟,克隆猪商业化突破口,尤其是克隆高产优质种猪，可能还会提前；most likely,the first clones utilized in the swine industry will be boars with high genetic merit for prod
9、uction traits.Prat et al.2006,Reproduction suppl.303-在美国，克隆猪商业化的主要障碍还是人们的接受程度！有望商业化的不单纯是克隆猪、猪肉，伴随着猪人工授精技术的不断成熟、大面积推广，良种公猪的精液需求必将增加。顶级公猪的克隆成功将有助于这项工作。即使在目前的效率下，克隆顶级公猪也能给饲养者带来较好的经济效益。而且体细胞克隆技术在环保、降低饲料消耗上也能发挥应有的作用！,Our future?,Purpose:Commercial production of cloned/transgenic pigsfor human disease models,转基因克隆,抗病育种疾病模型环境 友好型肉、乳品质改造生长性能改善、耐粗生物反应器：药物蛋白,我国每年约有150万人因终末期器官功能衰竭需要进行器官移植，但每年仅1万人左右能够得到移植治疗，有近1530的患者因找不到合适的器官进行移植而在遗憾中死去。猪 Vs.人 器官大小 生理功能 猪 繁殖 饲养 易操作,
