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1、农杆菌(Agrobacterium tumefaciens),是一种革兰氏阴性土壤杆菌,它含有Ti质粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤.Ti质粒(包括Ri质粒)上有一段转移DNA,在农杆菌侵染宿主植物时,这段DNA可以转移进植物细胞,并稳定地保留在植物细胞染色体中,变为植物细胞新增加的一群基因,最终能通过有性世代遗传给子代。,农杆菌介导转化法,根瘤,存在于能引起植物形成冠瘿瘤的农杆菌中，诱导双子叶冠瘿瘤形成，又称肿瘤诱导质粒（tumor inducing plasmid）。,Ti质粒,4,改造后的Ti质粒载体模式,第一步:植物受伤,植物受伤后能分泌酚类化合物（如乙酰丁香酮、羟基乙
2、酰丁香酮），诱导Ti质粒上的毒性基因表达。,农杆菌的感染和生存,第二步 感染植物,农杆菌吸附于植物的表面伤口部位（常在茎的基部）。,第三步 毒性基因（vir）表达,T-DNA上的产物催化产生过量的生长素和细胞分裂素，形成植物冠瘿瘤。,virA、virG、virD、virB,第四步 T-DNA转移,第五步 诱导冠瘿瘤,T-DNA被vir基因产物切下来，并运送到植物细胞核里，整合到植物基因组中。,第六步 土壤农杆菌代谢冠瘿碱。,1、共培养法 包括原生质体共培养、悬浮细胞共培养和愈伤组织共培养。2、叶圆盘法3、活体接种法,农杆菌转化的方法,1.共培养法,The co-integration method,农杆菌共培养侵染,愈伤组织,分化生芽,生根,2.叶盘转化法,3.活体接种法,
