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1、原核生物DNA的复制特点,-分子生物学主讲人：罗龙欣,以大肠杆菌为例,一.基因组简介1.双链环状DNA分子2.复制起始区位于其遗传图的84min附近,大肠杆菌染色体的复制是朝两个方向进行的，环形DNA复制时，DNA会形成类似字母的形状，两个复制叉在距起始点180处会合。,一、原核生物DNA的复制特点,1、DNA双螺旋的解旋2、DNA复制的引发3、DNA复制的延伸4、DNA复制的终止5、DNA聚合酶,DNA 复制时，双链首先解开，形成复制叉，复制叉的形成过程有多种酶和蛋白质参与。将主要的酶和蛋白质介绍如下。,1、DNA双螺旋的解旋,1)DNA 解链酶（DNAhelicase）,用于把 DNA 双
2、链解开形成单链。利用水解 ATP 释放的能量，催化双链 DNA 解链。,SSB 蛋白可牢固地结合在单链 DNA 上，在原核生物中表现出协同效应，如第一个 SSB 蛋白结合到DNA 上去的能力为 1，第二个 SSB 蛋白结合能力则高达 103。SSB 蛋白的作用是保证被解链酶解开的单链在复制完成前能保持单链结构，它以四聚体形式存在于复制叉处，待单链复制后才掉下，重新循环。所以，SSB 蛋白只保持单链的存在，并不起解链的作用。,2）单链结合蛋白（SSB 蛋白）,DNA拓扑异构酶在DNA解链时在将要打结或已打结处作切口。下游的DNA穿越切口并作一定程度的旋转，把结打开或解松，然后旋转复位连结。这样解
3、链就不因打结的阻绊而继续下去。即使出现打结现象，双链的局部打开，也会导致DNA超螺旋的其他部分过度拧转，形成正超螺旋。拓扑酶通过切断、旋转和再连接的作用，实现DNA超螺旋的转型，即把正超螺旋变成负超螺旋。,3)DNA 拓扑异构酶（DNA topoisomerase）,2、DNA复制的引发,开始DNA合成时，都需要RNA引物引发复制，前导链只要有一段RNA引物，DNA聚合酶就可以一直合成下去，而后随链的引发过程比较复杂。,后随链的引发过程,引发前体:它由多种蛋白质dnaA、dnaB、dnaC、n、n、n和i组成。引发前体再与引发酶(RNA聚合酶)结合组装成引发体。引发体可以沿模板链5 3方向移动
4、,具有识别合成起始位点的功能，移动到一定位置上即可引发RNA引物的合成。移动和引发均需要ATP提供能量，n蛋白具有ATP酶的活力。引发体的移动与复制叉移动的方向相同，与冈崎片段的合成方向相反。,3、DNA复制的延伸,前导链和后随链的合成同时进行。DNA 的复制过程中，所有DNA 聚合酶的方向都是 5 3，而不是 3 5。前导链是连续复制的，为了解释 3 5 是如何合成后随链的，冈崎提出了 DNA 的半不连续复制。即后随链是通过冈崎片段的连接来合成的，是不连续的，称之为 DNA 的半不连续复制。,4、DNA复制的终止,5、DNA聚合酶,DNA聚合酶,DNA聚合酶,DNA聚合酶,总结,归纳起来，在
5、复制叉处DNA的合成可以分为以下几步：（1）首先由解链蛋白和解旋蛋白使DNA双链解开。,（2）前导链的合成是按5 3方向连续合成（复制叉移动方向）；滞后链的合成是：在单链模板的岗奇片段起点上，由RNA聚合酶合成一小段RNA或结合一小段预先形成的RNA。,3）以此RNA为引物，从5 3方向合成DNA片段（岗奇片段），直到另一RNA引物的5-末端。该反应由DNA聚合酶或相应的DNA聚合酶所催化。,4）在DNA聚合酶的5 3 核酸外切酶作用下，水解除去RNA引物，所出现的缺口由聚合酶催化DNA片段的继续延长反应来填补。,5）由DNA连接酶将DNA片段连接起来，成为大分子DNA链。,望各位批评指正谢谢,
