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1、实验九 大肠杆菌,大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。,心包炎、肝周炎,实验目的：1、学习大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法。2、了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性。3、熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性。,大肠杆菌与沙门氏菌的常规 实验室诊断可按阶段划分,阶段划分（1 4阶段）,第一阶段：增菌、直接分离培养第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。第三阶段：生化鉴定（IMViC、H2S、硝酸盐还原、运动力、五种糖）第四阶段：血清学鉴定。,病 料,增菌（亚硒酸盐汤等）37、18-24h,直 接 划 线 分 离（麦 康 凯、SS 琼 脂
2、和EMB培养基）,37、18-24h,选可疑菌落，移植到以下培养基,营养琼脂斜面,三糖铁琼脂,37、18-24h,纯种检验、革兰氏染色镜检,生化反应,血清学鉴定,沙门氏菌、大肠杆菌的一般诊断程序图,病料的采集包装、运送,内脏、淋巴结,小家畜、家禽或胎儿,液态材料,病毒材料50%甘油磷酸盐缓冲液,【动物尸体剖解的注意事项】,怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。有针对性的采集病料。作好个人的防护和环境消毒工作。盛装病料的容器要求无菌。无菌操作。病料必须注明名称。必须低温保存,及早送检。动物尸体必须妥善处理(深埋、焚烧)。,SS平板分离肠道病原菌的强选择培养基,成分和作用：1、基础培养基：提供氮源和碳源
3、2、胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。3、乳糖，中性红（，红橙黄）：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色,麦康凯培养基具中等强度选择性，抑菌力 略强，少数阴性菌不生长。1、利用胆盐、龙胆紫来抑制革兰阳性细菌的生 长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用2、利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳和 不分解乳糖的细菌区别开 沙门菌及志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落,EMB（Eosin Methyl Blue)平板分离肠道病原菌的弱选择培养基,病原菌：透明，无色 非致病菌：紫黑色,解剖病死鸭,本次实验操作步骤
4、：,心脏、肝脏等脏器的分离接种（SS平板、三糖铁琼脂）,组织触片（血片、肝片等）、吉姆萨染色、镜检,37、18-24h,观察、记录结果,出具实验报告,姬姆萨染色方法：1、触片、干燥。用甲醇固定3-5分钟。2、将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（姬姆萨原液10滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可），染色30-60分钟，或过夜。3、水洗、干燥。4、镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。,动物尸体剖解顺序,观 察 体 表 皮肤消毒 切开颈腹部皮肤 剥 皮 观 察皮下病 变 开 腹 腔 观察内脏病变 开 胸 腔 观 察 病 变 开 胃 肠 观 察病 变,肠道菌实验室诊断包含的微生物实验技术：,无菌操作技术显微镜使用技术培养基制备技术细菌分离纯化技术细菌染色技术微生物的消毒灭菌技术动物实验技术,作业：1、鸭大肠杆菌病的实验室诊断意义、步骤。2、绘出油镜下组织触片的大肠杆菌形态图。,思考题：1、大肠杆菌和沙门氏菌在和培养特征上有何差异？2、试述生化试验在肠杆菌科细菌的鉴定与诊断中的意义。,同学们：要认真体会 规范操作,
