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1、免疫血清的制备,原理：抗原 抗体,刺激机体,综 合 性实验,刺激机体,产生,选择合适的抗原,分离纯化抗原,选择免疫动物,确定免疫方案和程序,免疫动物,采血分离血清,抗血清的纯化与鉴定,抗血清制备的基本流程,设计实验方案的设计,1.设计本实验的理由（实验目的）。2.实验方案设计。3.可行性（理论、人员、实验条件等）。4.创新性。5.本实验要解决的主要问题。6.预期目标。每个组交一份实验方案（3-4个同学一组）,论文式实验报告,一、题目的选择1、准确、具体、简洁、醒目，使人一目了然，引起重视 2、作者与单位(班级)，并注明所在班级和指导教师姓名。3、摘要和关键词 摘要是对论文主要内容和观点的概括,
2、论文式实验报告,二、关键词又称主题词或索引词，一篇论著(论文)一般选用25个关键词,论文式实验报告,三、引言(前言)引言是论文正文的开场白 1、引起读者对本论文的兴趣。2、为读者提供理解本论文所需的背景资料。,论文式实验报告,四、材料与方法材料1、实验对象2、实验材料3、实验分组4、实验过程和方法6、数据处理等内容。,论文式实验报告,五、结果：结果是实验研究成果的结晶,论文式实验报告,六、讨论 1.11.21.3,对实验结果解释和评价,论文式实验报告,七、参考文献,期刊：著者文章名刊物名称，卷或年(期)：文章的起讫页码书籍：编著者书名版本出版地：出版者，年份,一、颗粒性抗原的制备（2%5%RB
3、C的制备）,（1）静脉采血2-3ml，注入抗凝管中，轻轻混匀。（2）洗涤RBC 将上述抗凝血移至10ml试管中，加入NS 6-7ml，混匀，2500r/min离心5min,去上清。重复上述操作三次，最后一次去上清后，将红细胞配制成2%5%的RBC悬液。,2、取上述RBC悬液1ml免疫家兔。免疫部位：静脉、皮内、皮下等。每只兔子免疫810点，每点0.1ml左右。每隔24天免疫一次。,1班免疫时间表,每隔2天免疫一次,2班免疫时间表,每隔3天免疫一次,3班免疫时间表,每隔4天免疫一次,3、心脏采血10ml，凝固后，分离血清（2000转/min,5分钟)。4、取两支小试管并以A、B标记之，将上述血清
4、一半加入A管，另一半加入B管。将A管置于56水浴箱30分钟（灭活补体）。,5、抗血清效价的鉴定。凝集试验和溶血反应,凝 集 反 应,实验原理,指颗粒性抗原(RBC)与相应抗体特异结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。,试管凝集试验过程,1.取洁净小试管8支，排列于试管架上，依次编号。2.向各管中加入生理盐水200ul。,3.向第一支试管中加入A管血清200ul，充分混匀，吸出200ul放入第二管，混匀后取出200ul加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后取出200ul弃去。第八管不加血清，为生理盐水对照管。至此，第17管的血清稀释度分别为：1：2，1：4，1：81：128。这种稀
5、释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用的稀释方法。,4.向每管加入200ul 2%RBC悬液，此时每管的液体总量为400ul，血清稀释度又增加1倍。5.摇匀，置37 30min。(取出试管1500r/s 30秒)观察结果。,试管凝集操作程序(倍比稀释法),弃去,单位：uL,结果判断,选择适当的光暗对比背景，先不要振摇，观察管底凝集物的范围和上清液的浊度。然后轻轻摇动试管，注意观察凝集颗粒的大小、均匀度等。每一试管的观察，都应与对照管进行比较。盐水对照管诮无凝集现象，轻轻摇动试管则RBC分散成均匀混浊；而凝集块则沉于管底，轻摇时不易散开，凝集程度通常以“+”表示：,“4+”很强，全部RBC凝
6、集，凝集块全部沉于管底，液体澄清。“3+”强，RBC大部分凝集并沉于管底，液体稍混浊。“2+”中等强度，RBC大约一半凝集，液体较混浊。“+”弱，仅少量RBC凝集，液体明显混浊。“-”不凝集，液体混浊与对照管相同。只要待测血清管出现“2+”以上的凝集现象，即可判断为反应阳性；以出现“2+”凝集的最大稀释度为待测血清的抗体效价。,溶 血 试 验,实验原理,溶血反应是指补体参与的抗体致红细胞的溶解反应.参与反应的成分有红细胞、抗红细胞抗体，也称溶血素、补体。,溶血反应实验过程,1.取洁净小试管8支，排列于试管架上，依次编号。2.向各管中加入生理盐水200ul。,3.向第一支试管中加入血清200ul
7、，充分混匀，吸出200ul放入第二管，混匀后取出200ul加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后取出200ul弃去。第八管不加血清，为生理盐水对照管。至此，第17管的血清稀释度分别为：1：2，1：4，1：81：128。这种稀释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用的稀释方法。,4.向每管加入200ul 2%RBC悬液，此时每管的液体总量为400ul，血清稀释度又增加1倍。5.摇匀，置37 30min。观察结果。,溶血反应操作程序(倍比稀释法),弃去,单位：uL,观察结果时，应先观察对照管结果是否正确。对照管应不溶血，在对照管结果全部正确前提下观察待测血清管的结果，以出现完全溶血作为抗体的效价。,思考题,溶血反应与补体结合试验有何不同？,
