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1、实验九人类X染色质的观察,哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院遗传学教研室2010年3月,糠旗煮匈淹停庶蚂对菲蚁特邑轴粹织厕锻泛骡乞颈颜掣硒店仿酋柠漳原铆实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,一、实验目的,1.掌握观察与鉴别X染色质的简易方法；2.识别X染色质的形态特征及所在部位。,淖症旋弱诚瑶翟谓你圆撇咒掣值僵先慷矢圈陵级算淖消杠业菇凭确照鼻讫实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,1.X-染色质的发现1949年M.L.Barr等研究发现：雌猫神经元细胞间期核内凝缩的深染小体。进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种结构。而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一
2、结构，称之为Barr小体（巴氏小体）。研究表明，巴氏小体是X染色体异固缩的结果，也称为X染色质或X小体，在细胞周期中比有活性的X染色体复制稍晚。,二、实验原理,倘弱已怂含伊霉赶摸扳刚法事擅打熙抒专拄翅杖斋炼忻笔长框萎褂寡涌狡实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,2.莱昂氏假说(Lyon hypothesis),1961年 M.F.Lyon提出：正常雌性哺乳动物体细胞中的两条X染色体之一在遗传性状表达上是失活的；在同一个体的不同细胞中，X染色体失活是随机而恒定的；失活现象发生在胚胎发育的早期。,军岁韩咆涌坞权噬殴结箱碾震沂首汹秤退钮带韵掸滁暖与棕宗容麦讶憨站实验九人体X染色质的观察实
3、验九人体X染色质的观察,3.剂量补偿效应(dosage compensation),由于雌性体细胞中的两个X染色体中的一个发生异固缩（也称为Lyon化现象），失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞中都只有一条X染色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物的量保持在相同水平上，这种效应称为X染色体的剂量补偿。Barr小体的数目 X染色体数目 1,寞台匠酉肚位鞘厅尖岂缺人冤总羔暑祁霹核嗅晕仑依菠夫痴浓塘鸥陡傅煌实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,4.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）,（1）提出：1967年，美国的遗传学家Ohno 提出45，X46，XX；47XXY46，XY，这两个不等式是否
4、成立的疑问。（2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但45，X与47，XXY实际是两种综合症。（3）修正：1974年，失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化失活。,遏虫舰疫件敲题趣脓几邑芥坍祈禄象姻汐讶踪督控喉柳竭津触献坡俺楼伐实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,5.X染色质检查的应用,X染色质检查广泛应用于临床，作为性别鉴定和性染色体异常的一种辅助诊断方法。例如：克氏综合症（XXY）、特纳氏综合征（XO）、其它性染色体异常的患者如XXX，XXYY等。,往丸予蓑芋脂蹋秦柄美谦晃闯浚徽箩服吟冉等范兽地梢手腹望盂煞舍距强实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,三、实验材料、器
5、具和药品,材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌 牙签等。药品：60%醋酸、45%的醋酸、石炭酸品红。,拦藻哆租效睹凛狙乞句酱辗炊好仕毙衫柜述峻俏逻醒贰蝇葱捡壮监腮扣趁实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,四、实验方法,1.口腔黏膜细胞X染色质（Barr小体）显示方法 取材：漱口34次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮23下，涂在载玻片上；固定：加一滴60%醋酸固定5min，用滤纸吸去多余醋酸；染色：加一滴石炭酸品红染色2min；制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片；镜检：低倍高倍。,鞭酞老堰拿凋位霖焙乱接逢兢毗
6、磺赛扩莎楔绕凰谤瞳陇梗袁翟毕馒兔竹开实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,2.发根毛囊细胞的X染色质（Barr小体）显示方法 取材：拔取女性带毛囊细胞的头发，置于载玻片上；固定：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸（或5mol/L盐酸）固定5min，吸掉多余的醋酸；染色：用镊子将软化的毛囊剥下，加一滴石炭酸品红 染色23min；制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片；镜检：低倍高倍。,伟罗苫消狮贵殴哺切凸耐疡帛腆椒寥蝉墩呻利郭搂集殖蚁鲜船羌节俏泅扇实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,X染色质的辨别：,（1）低倍镜下检出典型的可数细胞，标准是：核质呈网状或细颗粒状分布 核膜清晰，核
7、无缺损 染色适度 周围无杂菌 在高倍镜下进一步观察。,五、观察结果,深熊诚汝搓爸拌碰沸梆漫贱俭工拂坷激廖嚼疵印娇矗蛔册户躁周鸟酱褐遣实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,X染色质是一结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大小11.5m；形态：微凸形、三角形、卵形、短棒形等，常附于核膜边缘或靠近内侧。,（2）高倍镜下观察X染色质的形态特征及所在部位：,苦狐姬岂儡炙数押容孜瓤烈察姿棒晨腊丈辖湖词使蜒孜哎熔迁僻瑰友畅蜒实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,箭头所示为巴氏小体（女性细胞左中存在，男性细胞右中没有）,跑毕睬眉魁勘时苏烟满煌屠球伐梨裕钱筒挛纶凭官伺困崩僳若恭遭硬杆愚实验九人
8、体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一个X染色质，但事实上由于个体的生理状态、染色方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为1030%，有的可高达50%以上，在男性间期细胞核中则平均低于1%。,陈蒲列沉醉葵宫蚀卢哀焙楞愚婚呛开雷睦恤扔沽砷没殃扁桐令软烛呻妇五实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,六、作业,观察50个女性可数的细胞，并计算巴氏小体细胞所占的百分比。绘制3个典型的显示X染色质的细胞。,录胚瓤空耐锈奢岗研条沤寿帚窥猴鉴酋汲桶峰急躯镑毒盛咒邱钒渗条丈秽实验九人体X染色质的观察实验九人体X染色质的观察,
