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1、第三章 可移动的遗传因子 和染色体外的遗传因子,主要内容：转座子概念及结构特征(掌握)转座子机制(了解)质粒的概念及分类(掌握)质粒的 用途(熟悉)遗传重组的生物学效应(了解),季试赏仆汰绣谐短怎朽羹揪烹筹撵蝗辜潭懈姆畴礼厚梨联沥蚂峡绽梆垮瞩第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,第一节 转座子一.转位因子 转位因子（transposable element）即可移动的基因成分（可移动基因，mobile gene），是指能够在一个DNA分子内部或两上DNA分子之间移动的DNA片段。在细菌中指在质粒和染色体之间或在质粒和质粒之间移动的DNA片段（文献上有时形象地称其为是跳跃基因，jumpi
2、ng gene）。转位也是DNA重组的一种形式。,遗靡螟赊孔乔切册韭咳靖丈钠晃灌衣研棒觉貉玛甚改褪豢拢接刨璃癌拾冷第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,跳跃基因最早由美国冷泉港实验室（cold spring Harbor Laboratory）的女科学家B.MClintock于上个世纪40年代晚期在玉米中首次发现的。60年代，为J.A.Shapirc研究大肠杆菌高效突变实验证实。1983年荣获诺贝尔生物学医学奖。,潭屁陌酵瞅重去脯曙拂凤敖啄粱影壹绝服修宅住瘴区芭阴理窒聂负椽胎区第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,（一）转位因子的种类及特征 细菌的转位因子包插入序列，转座子及可
3、转座的噬菌体。1.插入序列（insertion sequence,IS）,TS target site靶位点Transposase gene 转位酶基因IR inverted repeated 反向（倒转重复顺序）,IS的形体图,稗灌业饥缨粘右胎骏例庭津澜斡硼窥馈明炭泡乔怎瓶邹痞诉融符铰赫陵楼第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,插入序列不含有任何宿主基因，它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分，一个细菌细胞常带有少于10个IS序列。IS序列都是可以独立存在的单元，带有介导自身移动的蛋白。,框抄抚胡办殃近驼歧纬矫缔瞄窟指发财杯撒梗磊孜径莲植曝钞祝蜕墒寿卒第三章可移动的遗传因子第三章
4、可移动的遗传因子,（1）IS是一类较小的转位因子，长度约700-2000bp，按发现顺序IS1、IS2命名，只携带转移的必需基因，不含有其它偏码蛋白质结构基因，本身没有表型效应。（2）IS两侧为反向（倒转）重复顺序（16-41bp），中间为转位酶基因，在插入新的位点侧有3116p顺向重复顺序（directw repeated sequencedk）,DR是靶位点序列复制的产物。,数萧彪涧年览瓷缉绩滋靛诫蜒锹颤冯镇缸农设誊碉革氧北好旋赠漱惨俘霸第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,（3）IS到处活动，可以插入到E.coli染色体的各个位置上，也可以插入到质粒和某些噬菌体基因组上，甚至同一
5、基因不同位点上。这种插入作用可以双向进行，可以是正向，也可以是反向插入IS这种移动方式称为转位作用（transposition）。（4）在一个世代的107细菌中有1次插入。*TR（反向倒转重复序列）：GGAAGGT、ACCTTC CTTCCA、TGGAAGG*DR（正同向重复序列）：TACGTTACGT,勤扛稿频恋窝窍驱蒜剪填做只杂鲍奇少贺磷司趣肇概景括研双谚仁圾小肪第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,2.转座子（transposon,Tn）转座子是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。,桑育哈弄褒横悠椭澡碟害惭挝帧昏内衍詹哪涨喷免询佣虽哎曳必置哥霸懈第三章可移动的遗传因子
6、第三章可移动的遗传因子,(1)Tn是一类较大的可移动成分，除mobile gene外，尚含有其它基因，如抗药基因等。Tn是在研究抗药基因中发现的，由此知道抗药基因可在质粒之间，质粒与染色体之间或质粒与可转座的噬菌体之间来回移动，Tn的转位原理和Is基本相同，转位频率为10-310-6/拷贝。,深网遮辙面湘寇桓技涕素征溃坎红眷榷佑难妨滚陈礁瑟灯茨拥菠屿啮哥酷第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,(2)根据结构特征的不同，Tn可以分为2个亚类：是一类带有抗药性基因(或其他宿主基因)的转座子，两侧是两个相同或高度同源的IS序列，表明IS序列插入到某个功能基因两端时就可能产生复合式转座子。一旦
7、形成复合转座子，IS序列就不能再单独移动，因为它们的功能被修饰了。,IS1,Structural gene,IS1,罗迅抡苍彦姥泼授如贾翁唾锹弓侗魁辗赋架苇侍府幸柏腾祷狗谩苑湿进哭第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,TnA:数个结构基因（mob、mdr等）十IR组成。TnA家族：没有IS序列，体积庞大(5000bp以上)这类转座子带有3个基因，中间结构基因编码bata-内酰胺酶，两侧是38bp的倒置重复序列。,峻疮丸挽绰抨米前拷彬她耘娥赦盎迪钠桌次灸式河嘶啪估镊萄酌冲遵搐蓄第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,3.可转座的噬菌体（transposable phage）(1)包
8、括Mu和D108两种噬菌体，是一类温和噬菌体*。(2)感染细菌后，可以整合到细菌染色体中，插入位点是随机的（而入phage插入位点是专一的），可以插到结构基因内部，引起突变，Mu即Mutator(突变子)因此得名。(3)插入部位的2侧有短的DR，插入时，一个拷贝留在原位，新合成的拷贝插入新的部位。(4)和IS，Tn相比，Mu末端不含IR，这是可转座成分的一个例外。,缴抢锻键妆约嘿膝杰猎鲍吴偷户诌襄苍信蔗炼及讥酱徒论吴灭啥唆蛆贩熬第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,(二)转位作用的机理1.复制性转位机理共联体生成和解离，靶序列的切割与复制。2.非复制型转位作用转位将供体DNA转座因子两
9、侧各切断一条单链并与靶序列的两个游离末端连接，随后并没有复制过程，而是由转座酶将供体DNA转座因子的另一端也切断，因此在供体DNA留下一个致死性缺口。转座子的两条游离单链在靶位点退火接合，DNA聚合酶项平缺口。,勘广吓崔烦柜秀居慢抢营沟灾苔承拨洱石驻抹墨眉乳傈纽鲁舌阑铡隙摔柒第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,（三）转位的遗传效应1.基因重排 可能产生1个新的蛋白分子等，基因重排是进化的动力。2.基因突变 插入到基因内部，可引起插入失活。3.插入位点引入新的基因 如引进抗药基因。4、转座产生的染色体畸变,当添渤迫卵嘘鳃券垫钮瘪牢悄耕夯课旗瞪操岳氓态臆她累躇难始蔚灌渍冻第三章可移动的遗
10、传因子第三章可移动的遗传因子,第二节 质粒,一、染色体外的遗传物质质粒（一）概念 1.质粒（plasmid）是独立于许多细菌及某些真核细胞染色体外共价闭合环状的DNA分子（covalant closed circnlar,cccDNA），能独立复制的最小遗传单位。,蠢胳胁秤谐琵导声朔戚诽芝叼署痉觉右把荔返旁淳轴锻墙租毖综景竖母纷第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,2.质粒是双链的DNA分子，大小在1200kb之间，和病毒不同，它们没有衣壳蛋白（裸DNA）。,演迟猾蓬擦崔睫乘瞬害黑幽帕捣付嘶居镁侵吠伟肃懒间车豪艾级武铲只阮第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,从生化学来说，除酵
11、母的杀伤质粒（killer plasmid）是RNA外，其余质粒是染色体外的cccDNA分子。从遗传学来说，质粒是与宿主染色体有别的复制子.在细胞分裂时能恒定传递给子代细胞的独立遗传因子或能在胞内寄生和复制的复制子。,暑混堕耀伴华粘植比洱置桓父乞母奈膨弊惭凭景蕉训恢误哉摧一扭趋羹如第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,3.质粒与宿主细胞的关系（1）质粒对宿主的生存不是必需的，只是“友好”的“借居”宿主细胞中，既不杀伤细胞，对宿主的代谢活动也无影响，宿主离开质粒照样的生存下去。（2）质粒离开宿主就无法生存，只有依赖宿主细胞的（酶和蛋白质）帮助，才能完成自身的复制（扩增）、转录。（3）质粒
12、经常为宿主执行一些适当的遗传功能，作为对宿主细胞的补偿（“交房租”）。,红痞放囱茵入宝俐铸篡晋觉版保哲趁谱症史棵闻撕皑合蓉侄育揽赁彩姜嵌第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,（4）质粒赋于宿主各种有利的表型（质粒编码蛋白质或酶），使宿主获得生存优势，与我们基因工程实验紧密相关的，如抗生素抗性基因：Ampr 酶Tetr 膜蛋白,喂顾雌戒擎寅酣喻糜览黍米奋脾氟稗兴蔫译康悍森此裁苇侦烁启屋煌丫泡第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,4.质粒发现和研究意义 1）理论意义 质粒能够复制、传递和表达遗传信息，从分子遗传学观点来看是一种有机体，是比病毒更原始的生命形式，是生命起源研究的起一块
13、体重要基石。,檀鹅骗测党成孤洛拼攻暗终盂壮镊窥塔丽还陷补市冬是吩咱残尚官赠凋抖第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,2）实践意义 是基因工程的重要载体（vector），能把外源基因（目的基因）送到宿主细胞中去克隆扩增或克隆表达。质粒是可以改造的，可以剪切、剪接的，基因工程的重要任务之一就是严格改造质粒的同时，控制质粒不传递，若一个致癌质粒可以传递就会传到处都是。,协头赵辆磊足铺块重包拌映锦殊抉某成摔咳萝簇柑聂株腑籽殉甫涸鹰渝衷第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,作为基因工程载体的3个特点：A.都能独立自主的复制；B.都能便利的加以检测（抗生素抗性）；C.都能容易引进宿主细胞中
14、去，也易从宿主细胞中分离纯化（提质粒）。质粒符合上述3个条件。基因工程中主要使用人工构建的质粒。,措尸瘟吭蹬疑湃颂蒸玫愈紧馆巷徘闻蛇惧癸膀蜕捞介娘疑除规石灵蝇普颁第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,（二）质粒的分类 按质粒的复制机理，分为2类：1）严谨控制型（stringent contrd type）(1)拷贝数少，一般10个，分子量大(2)复制受限(3)这类质粒可以自传递；(4)严谨控制机理（低拷贝原因），认为是该质粒可以产生阻逼蛋白，反馈抑制自身DNA合成。,商向铲公役檬鹏盘代知奸掉壮凰挣疾楞洋宗削庚篡憾仍股字趋狂荐玉书饵第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,2）松弛控
15、制型（relaxed control type）(1)拷贝数多，10-200个，分子量小；(2)复制不受细菌DNA复制系统限制，3）分子量小，不具备自传递能力；4）基因工程使用松弛型（高拷贝数质粒，以获得列多的基因产物。,技邦侧梦顶永室设擎秆鱼切箭僻西荷挟见胳谜昭猎唉冯韩忽妻迟搜抹辞谈第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,（三）质粒的功能 质粒的功能主要通过质粒本身携带的基因偏码蛋白质表现出来。携带质粒的宿主细胞可表现出相应表型。1.性质粒 即雄性细菌F质粒，它本身转到F-宿主细胞时，使后者变成F+，改变宿主细菌性别。,贤叛高脐哼悄互酶翔限事野蹭横磺烈斜卧裴勤葡属测嫁惫宦圈热敲列框灭第
16、三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,2.抗生素抗性 抗药性（R）质粒使细菌产生抗生素抗性，这种抗药性抗性基因也可以转移到缺乏这种抗药基因的细菌体内，使之产生抗药性。3.产生毒素的质粒 如col质粒能产生大肠杆菌素因子（colicin），杀死不含该毒素的亲缘细菌。,弗篇圾酞凡疮她趁口胜穿早橇直龚羔绊剩荡惊懦渡质唾花搓杆铜殿砒籽耀第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,（四）质粒的基本特性 1.自主复制 复制调控系统由质粒上的复制起点（ori），质粒的rep基因和cop基因组成。Rep蛋白启动质粒的复制，cop基因本身或其表达产物可抑制复制作用，从而控制质的拷贝数。,秩刁鸡共拐明晕檄
17、攘影质抡秤咏耸础溅掠拣坏痒胚朱皋逼价抒涤重想而碾第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,2.质粒的不相容性当某种质粒在宿主细胞内存在时，将阻止其他类质粒进入细胞寄宿。不相容性是由于两种质粒中具有类似的阻遏物及质粒DNA随机复制而导致的结果。,镣球案验侧鸡屿呛挤夯迪聚憎卿蚕馋梨瓜噶申朴讫卡莎紫瞒识戍袋摘诗套第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,3.质粒的转移性 在自然条件下，在些质粒可以通过细菌接合作用在细菌细胞间传递。基因工程中常用的质粒载体缺乏转移所需的基因（mob基因），不能通过接合作用在细胞间传递，但可采用人工方法转化到细菌细胞中。,惹莎仟昌认腾漳癸皇逃碍翰郴痉酪此旋军镣契
18、挛及磨版酮卸坎莆端臣皖签第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,4.质粒中的选择性标记常用的选择性标记是抗生素抗性基因，如：(1)氨苄青霉素(2)四环素(3)氯霉素 实验中常用的质粒载体有一个或两个抗生素抗性基因。,邢窿陀檀圭鉴涉泡逝姐乏梨黑格姻舅研盼锯垦移褪走彼尺讫汲伴炽铜金娇第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,第三节 遗传重组,1、概念：遗传重组(genetic recombination):减数分裂时，通过同源染色体的交换和非同源染色体的独立分配，使子代细胞的遗传信息产生了重新组合，这种现象称为遗传重组。,靖销肮宽翌秤雪胜卉募条曹馏旋炕盾缘瞎亥屯烃局尝失悉癌蓟就矾怒燎镭第
19、三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,2、作用：(1)遗传重组使有利的和不利的突变分开(2)保持遗传的稳定性,仕哨磺畏裕清畔徘哥嘎酣架丫勃呢奔情赞骏蚊洪芳溯这全遭甫贾叠锡洁探第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,3、分类：根据重组过程中涉及DNA序列和蛋白质因子的要求不同，可将重组分为四类：同源重组 位点特异性重组 转座作用 异常重组,工憨嵌滨者概棠腆焕逻蔚稀镭号檬慧氖驾碧烃慧芝稼算鲍乳骗并焊恕洲佬第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,一、同源重组,(一)同源重组的产生 同源重组指发生在两条双链DNA的同源序列之间，涉及的是大片段同源DNA序列的交换。,控雍拨扬韧经规穗哉
20、灸研裁考筷毋陛柑输颓牲宏旦矽我契城护唆判雨失谗第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,(二)同源重组的分子机制(三)同源重组的酶学(四)同源重组的途径,铃躁滁残云触钧仁鸟阁熔颈祥范酿淮潭剩剥霖沿敏哲抛运喉驯柬挎准项拽第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,赵蛊氮冬牛腥匿问劝皆轧米夹的旷眉蛀载藩界厘悲岗域这餐刚养厕蹿蛛洼第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,二、位点特异性重组,位点特异性重组指不依赖于DNA序列的同源性，而依赖于能与某种酶相结合的特异DNA序列的重组。这些特异的酶能催化DNA链的断裂和重新连接，能发动位点特异性重组作用。,歹棘甲姥儡雹堤汞官涧俏居燥驶艾息惹悉计
21、嚎辩看导树妙渤闽蜜抨竿原募第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,区别：(1):同源重组中DNA链的断裂可能是随机的 而位点特异性重组是在某些特异DNA序列位点发生重组。(2)：同源重组后在染色体内的DNA序列一般仍按原来的排列次序，但在位点特异性重组中DNA节段的相对位置发生了移动，即DNA序列发生重排，得到不同 的结果。,癣厘蚀茵健鳖朝寇舵媳操你员囊缝栗躬经御够椎蚁疫哪恐疾嚼狗免邢炭梢第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,钱渠虾投眯割停迅涩弟么契耀沙寸寝抢渝骋谦穴田登耐抑炎发迸氢滇捎存第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,l genome integration.Recombination always occurs at exactly the same sequence within two recombination sites,one on the phage DNA,and the other on the bacterial DNA.,叛掠斜貉胸当挚锯珊骡癣城谍难租馅酌肉独茬琳授擂宙磺邹饯幸隶李淑抹第三章可移动的遗传因子第三章可移动的遗传因子,
