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1、流式细胞仪（Flow Cytometer)基础简介,中科院生物物理研究所中国科学院蛋白质科学研究平台2005年3月 刘春春,主要内容,流式细胞仪概要流式细胞仪的工作原理流式细胞仪测量的对象,什么是流式细胞仪,流式细胞仪实物,BD FACSVantage,BD-Calibur,流式细胞仪基本结构,FCM的定义,流式细胞仪是指，使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。,对比 流式细胞仪是一种特殊的显微镜,功能特点（1）多参数定量分析每一个细胞；（2）细胞分选；高纯度：99%以上；可分析小于1/10000比
2、例的稀有细胞群；单细胞克隆等。,（3）高通量（分析分选）分析150，000个/秒 分选100，000个/秒,应用领域 疾病诊断生物学基础研究环境监测海洋微生物研究农业领域应用等等,70年代美国为攻克癌症而建造。厂商：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation 已成为一个几十亿美金的产业,流式细胞仪工作原理,流体动力学聚焦,流动室,激光聚焦,液流与光源,探测光路聚焦,光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。,光信号收集,数据处理,FSC SSC FL1 FL2 FL3,对数 线性 线性 线性 对数,脉冲处理，模数转换,光信号,电信号,记录数据
3、，显示结果,（面积，峰高，宽度）,流式细胞仪产生的信号,非荧光信号,颗粒度,细胞大小,散射光信号区分裂解后的外周血细胞群,荧光信号,荧光染料被激发而发射的光信号。定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量,PIAnnexinV细胞凋亡检测,DNA含量-PI,Annexin-V,前向散射光(linear),侧向散射光(linear),PEFITC荧光标记检测外周血裂解后细胞群,细胞分选,流式细胞仪的测量对象,大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒。大小范围：0.2uM-300uM。对象类型 细胞类型：（1）高等真核细胞；（2）酵母；（3）细菌；（4）多细胞的聚集
4、体，如胰岛等。非生命颗粒：细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。,流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例 1）不需染色：大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。2）需染色或标记：细胞组分：细胞膜：流动性，通透性，膜电位 细胞内离子：H+（可检测PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的和 自由 的）。核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色质结构等 总蛋白质 蛋白质分子间相互作用 抗原 细胞骨架成分 受体,功能属性：酶活性细胞凋亡细胞坏死细胞活性氢硫基凝血素结合位点药物动力学.,经验之谈：凡细胞内能进行荧光标记的成分或者某种变化，都可用流式细胞仪进行检测。,G1,
5、S phase,G2,M,G1,1,2 1,DNA含量,DNA 含量,细胞周期时相,G0/1,G2/M,S,细胞数,细胞周期分析,Hoechst33258（AT）,Chromomycin A3（GC）,白血病患者,2,4,5,6,X8,9-12,7recip 9-22,13,14151617,Y 18,20,19,22,21,Ph,1/3,染色体组型测定,1,3,生物物理所现有流式细胞仪,型号：BD FACSVantage SE参数：分析10，000个/秒，分选7，000个/秒；激光：488nm，UV；四色荧光通道。地点：1406联系方式：电话64839306 或：64862503 电子邮件,
