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1、第八章 人工授精,第一节 概 述,一、人工授精意义 人工授精（artificial insemination，AI）是以人为的方法利用器械采集公畜的精液，经检查和处理后，再用器械将精液注入到发情母畜的生殖道内，达到妊娠的目的，以此来代替公母畜自然交配的一种科学配种方法。,人工授精技术优点：,.人工授精可以提高优良种公畜的配种效能，扩大配种母畜的头数 人工授精不仅有效地改变了家畜的交配过程，更重要的是选择最优良公畜实行人工授精配种，它超过自然交配的配种母畜头数很多倍，牛可达数百倍，特别在现代化技术条件下，一头优良公畜每年配种母牛甚至可达万头以上。,.加速家畜繁殖改良，促进育种进程 由于人工授精选
2、用优良公畜，配种母畜头数的媞多，进而扩大了良种遗传基因的影响。此外，有利于保证配种计划的实施和提供完整配种记录。因而促进家畜繁改及育种工作的进程。,.降低饲养管理费用 由于每头种公畜可配的母畜增多，相应减少了饲养公畜头数，降低了饲养管理费用，提高了经济效益。.可防止各种疾病 特别是生殖传染病的传播 由于公母畜不接触，且人工授精有严格的技术操作规程要求，使参加配种的公母畜之间不发生疾病的传播。,.人工授精有利于提高母畜的受胎率 人工授精能克服公母畜自然交配中因体格相差太大不易交配或生殖道某些异常不易受胎的困难，又可便于发现繁殖障碍，采取相应的治疗措施减少不孕。人工授精所用的发情母畜，事先要经过发
3、情鉴定，掌握适宜时机，所用的精液均经检查合格，因此，提高了母畜的受胎率。,.人工授精可扩大家畜配种地区范围 保存的家畜精液尤其是冷冻精液，便于携带运输，可使母畜配种不受地区的限制和有效地解决无种公畜或种公畜不足地区的母畜配种问题。目前，人工授精已成为现代畜牧业的重要技术之一，对促进畜牧业生产向现代化发展起着重要作用，已在我国和世界大多数国家广泛应用。,二、人工授精的发展简况,1780年，意大利生理学家斯拜伦扎尼（Spallazan）首次成功用犬进行了人工授精试验。此后，许多科学家开展实验研究，直到19世纪末和20世纪初，才对马试验成功，随后又用于牛、羊。20世纪30年代，才初步形成一套较完整的
4、操作方法，并开始进入实用阶段。,20世纪中期，人工授精应用于畜牧生产有了迅速发展，成为家畜繁殖的主要手段。世界许多国家，特别是欧洲多数国家，北美、大洋洲等畜牧业发达国家十分重视人工授精的发展，各种家畜的人工授精已相当普及，其中尤以乳牛的普及率最高、发展最快。近年来，由于出现高度集约化的现代畜牧业，更促进人工授精的进一步发展和应用。,20世纪50年代初，英国科学家史密斯（Smith）和波芝（Polge）成功研究出牛精液的冷冻保存方法。随之，60年代开始，人工授精技术发展到一个新的阶段。现在北美、西欧一些国家及澳大利亚、中国、日本等国牛的人工授精已全部或大部采用冷冻精液配种。其他家畜如猪、马、羊以
5、及有些野生动物等的冷冻精液保存研究也获成功，有的用于规模生产，取得较理想的效果。,第二节 采精,一、采精前的准备（一）采精场地 要求室外采精场地应宽敞、平坦、安静、清洁、避风；室内采精场地宽敞明亮、地面平坦，注意防滑。场内设有采精架。,（二）台畜的准备,台畜是供公畜爬跨射精同时进行采集精液用的采精台架。台畜分活台畜和假台畜。,采精时，用发情良好的母畜做活台畜最好，有利于刺激种公畜的性反射。活台畜应选择健康体壮、大小适中、性情温驯，易于被人接近的或一有作台畜经历的母畜。采精前，先将活台畜牵制采精架加以保定，然后将尾部系向一侧，在对尾根部、肛门、会阴部及外阴部进行彻底清洗消毒，最活用灭菌干纱布擦干
6、。,用假台畜采精，方便、安全，各种家畜均可利用。假台畜可用木材或金属材料制作支架。要求规格大小适宜、坚实牢固，表面应柔软干净，尽量模拟母畜的外形和颜色。,（三）公畜的调教与采精前准备,1.公畜的调教 利用假台畜采精，要事先调教好公畜引诱爬上假台畜，调教有几种方法：（）在假台畜的后躯涂抹发情母畜的阴道粘液和尿液，这样公畜会因外激素的刺激而引起性欲并爬跨假台畜，经几次采精后即可调教成功。,（）在假台畜旁牵一头发情旺盛母畜，诱使公畜进行爬跨，但不让交配而将其拉下，反复多次，待公畜的性冲动达高峰时，迅速牵走母畜，令其爬跨上假台畜采精，一般可获成功。（）可将待调教的公畜，栓系在假台畜附近，让其观看另一头
7、已调教好的公畜爬跨假台畜采精，然再令其爬跨。（）训练公猪时，也可利用已被其他公猪经常爬跨采精的假台猪或者将采精用的公猪尿液涂抹假台畜上，引诱调教的公猪发生性反射，使爬跨训练成功。,在调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿强迫、恐吓，甚至抽打等不良的刺激，否则会造成调教困难。在调教过程中，获得第一次爬跨采精成功后，还要经几次重复，以便使公畜建立巩固的行反射条件，是十分必要的。此外，还应注意人畜安全和公畜生殖器官的清洁卫生，加强种畜的科学饲养管理。,2.种公畜的准备公畜采精前性准备的充分与否，直接影响这精液的数量和质量。因此，在采精前，均须以不同诱情方法使公畜有充分的性欲和性兴奋。一般采取让公
8、畜在活台畜附近停留片刻，进行几次假爬跨或观看其它公畜爬跨射精等方法，可增加性刺激强度，表现出较强烈的性行为。,二、采精方法,一般正规采精技术的基本要求，应是：（）采精的器械要简单，便于装拆、洗涤、消毒和操作；（）要收集公畜一次射出的全部精液或采集富含精子的部分；（）有利人畜安全，不可发生有损公畜生殖器官和性机能的操作。,公畜的采精方法有多种，曾经使用过的有：阴道收集法、按摩法、电刺激法、假阴道法、手握法、筒握法等多种，应根据动物种类不同和环境条件，选择适宜的采精方法。假阴道法是较理想的采精方法，适用于各种家畜。手握法是当前我国对公猪采精普遍应用的方法。按摩法，主要用于禽类的采精。电刺激法，主要
9、应用于驯养和野生动物的采精。,（一）假阴道法采精,假阴道是一筒状结构，主要由外壳、内胎、集精杯和附件构成。,将安装调试好的假阴道安置在假台畜后躯内，种公畜爬跨假台畜而于假阴道内射精，来收集精液。这是一种比较安全而简单的方法，但应注意安置在假台畜体内的假阴道集精杯端，要稍向下倾斜些，以防精液发生逆流造成收集不全。当然，利用假台畜采精时，也可手握假阴道在假台畜体外进行采精，其操作方法和利用活台畜的采精方法一致。,利用活台畜采用假阴道采精时，采精技术人员应站在牛、马或蹲在猪、羊台畜的右后侧，当种公畜爬上台畜时将假阴道立即紧靠并固定于台畜尻部右侧，其倾斜度呈35左右，亦即与公畜勃起的阴茎伸出方向成一直
10、线，迅速将阴茎导入假阴道内，任其阴茎在假阴道内腔抽动射精。当射精时应将假阴道集精杯一端向下倾斜，以便精液流入集精杯内，待公畜跳下时，不可硬行 抽出假阴道，应随着阴茎 后移放掉假阴道内空气，在阴茎自行软缩脱出后，随即自然取下假阴道。,公牛和公羊对假阴道的温度比对压力更为敏感。为此，调试假阴道的温度应按其公畜个体的习性要求，温度更要准确。对牛羊向假阴道内导入阴茎时，切勿用手直接抓裸露的阴茎，而必须用掌心握住包皮及其内的阴茎，加以导入。此外，牛、羊交配时间短促，只有数秒钟，其表现是爬跨上台畜向前一冲后，即行射精。因此，采精操作力求迅速敏捷准确，同时要避免阴茎突然弯折和损伤。,公马和公驴对假阴道压力的
11、要求比温度更为重要。因此，采精人员要必须注意掌握好假阴道内的空气量，即适当压力。采精时可用手握马、驴的阴茎（但不能触及龟头）导入假阴道。马、驴交配时其阴茎在假阴道前后来回抽动数次才能射精，因此采精人员左手握住假阴道的把手，右手握其后端，并紧靠台畜的尻部加以固定假阴道。当阴茎停止抽动后，尾部呈现有节奏的收缩和上下摆，即表示射精。假阴道后端稍放低，在射精结束时缓慢打开气阀门，使压力减弱，以利于阴茎抽出，然后取下假阴道。,对公猪采精，公猪在自然交配时，其阴茎伸入母猪的子宫颈腔内，受到紧束的压力才发生射精。可见，假阴道的压力是公猪采精的最主要条件。为此，采精操作时，通过双连球有节奏性地施加内胎压力，来
12、模拟子宫颈紧缩压力，以增强公猪的快感，刺激其阴茎尽快射精，公猪交配射精时间较长，约67min，要在射精开始时即须调节假阴道的角度，其后端下端向下倾斜，以防精液倒流。,（二）手握法和筒握法,这两种采精方法，一般只适用于猪的采精。目前手握法采集猪的精液，目前广泛应用的一种方法，此法，是模拟在自然交配中母猪子宫颈对公猪阴茎的螺旋龟头紧缩力而引起射精的生理刺激，以手握其阴茎龟头，呈节奏性松紧给予压力进行采精。,手握法采精操作，采精员要一手带上灭菌胶手套，另一手持集精瓿（其口覆盖23层灭菌纱布），蹲在假台猪一侧，待种公猪爬跨台猪后，先用0.1%高锰酸钾溶液清洗消毒公猪的包皮及其周围，然后用灭菌生理盐水冲
13、洗并擦干净。当阴茎从包皮内开始延伸时，让其自行深入带手套的空拳手中。当龟头尖端露出拳外半厘米左右时立即紧握龟头，待其,抽送转动一些时间，手握拳松紧呈节奏性为阴茎施加压力，不使阴茎滑脱为准。待阴茎充分勃起时，顺势牵引向前，就能引起公猪射精。当射精时握阴茎的手不加压力。但也不能使阴茎滑脱，另一只手持集精瓶收集精子浓厚部分精液。其它稀薄精液及颗粒状乳白分泌物排出时可随时弃掉。当射精暂停时，再恢复节奏性握力，直至射精全部结束为止。,猪的手握法采精。具有设备简单、操作方便，能采集精子浓厚部分的精液等优点，但也有精液容易污染和静止易受冷打击等不足之处。因此，猪手握法采精时应注意的是：手握阴茎螺旋龟头应固定
14、好；避免对精液的污染；防止冷休克。,筒握法采精 此法是将假阴道改短，其后端连接一个橡胶漏斗部，同时助手持假阴道并紧贴靠台畜后部，其入口朝向阴茎，以便猪阴茎自然插入假阴道内。当阴茎经假阴道腔进入其漏斗部时，就以左手运用手握法操作技术采精，右手持集精瓶收集精液。,（三）电刺激法采精,利用电刺激采精器，通过电流刺激公畜引起射精而进行采精的一种方法。此法，适用于各种家畜及动物。尤其对那些种用价值高而失去爬跨能力的优良个体公畜或不宜用其它方法采精的驯养和野生动物等，就更有实用性。电刺激法采精所得精液。一般射精量较多，而精子密度较低。有时也发生精液混有尿液，这种混尿精液不可用于输精，应废弃。,（四）按摩法
15、采精,此法适用与牛、犬和禽类。对牛的按摩采精操作，是先排除直肠内的宿粪，再将手深入直肠膀胱背侧稍后，轻柔按摩精囊腺，刺激精囊腺分泌部分精清，可排出包皮之外，再将手指伸入两输精管末端的壶腹部之间，而壶腹部一侧为中指和无名指另一侧为拇指。按摩时手指由前向后滑动并有适当压力，这样反复进行按摩，即可引起公牛精液流出，由助手接入集精瓶内。为减少细菌污染精液，助手最好配合在后腹部由上向下按摩阴茎尤其是阴茎的S状弯曲部，使阴茎伸出包皮之外，收集精液。按摩法采精比用假阴道法所采取的精子密度低，细菌污染程度高。,（五）其他采精法,（）阴道内采精：动物自然交配前，在发情的雌性动物的阴道内放置薄胶囊或者交配后用灭菌
16、泡沫海绵来收集精液。（）附睾内取精：是利用灭菌注射器，在附睾部或输精管部位，按兽医外科常规法消毒后，用注射针头刺入相应部位吸取精液。,三、采精频率,采精频率：是指每周内对公畜的采精次数。各种公畜的采精频率应依据：正常生理状况下可产生的精子数量与贮存量；每次射精量及其精子总数、精子活率、精子形态正常率；公畜的饲养管理状况和表现的性活动等因素来决定。对于在科学饲养管理条件下的壮龄公畜，可以适当增加采精次数。但是，随意加大采精频率，会导致精液质量下降又能造成公畜生殖机能降低和体质衰弱等不良影响，结果适得其反。,公牛的采精频率，每周采精2天，每天采精2次。对于科学饲养管理的体壮公牛，每周采精6次不会影
17、响繁殖力。青年公牛采精次数应酌情减。公马和公猪每次射精时可排出大量精子，且附睾尾部贮存精子很快排空。为此，采精频率适宜隔日采精1次。如果生产需要每日采精，在一周内连续采精几天后需停采12d休息。公绵、山羊配种季节短，其附睾的贮存量大而射精量少。因此，羊的采精频率较其他家畜的采精次数可增多，每日可采精多次，并连续数周，不会影响精液质量。,第三节 精液品质检查,精液品质检查的目的：采集的精液必须进行精液品质检查，其目的在于鉴定精液品质的优劣，选优去劣加以利用，以便确定配种负担能力；同时也反映出公畜饲养管理的状况及生殖机能的状态；评价技术操作的水平；检验精液稀释、保存和运输效果。,精液品质检查的项目
18、 检查精液的项目，一般可分为常规检查项目和定期检查项目两大类。常规检查项目有：射精量、颜色、气味、pH值、精子活率、精子活力、精子密度等。定期检查项目有：精子计数、精子形态、精子存活时间及精子指数、精子死活率、精子微生物污染、精子代谢等。,精液品质检查原则：通过检查的评定结果要真实反应出精液本来品质的特性。为此，在检查精液过程中应注意：首先标记清被检精液的来源，检查取样具有代表性；检查过程中不能使精液受到任何不良因素影响而遭受危害；检查操作时力求动作迅速，评定结果准确。,精液品质检查方法：一般有外观检查法、显微镜检查法、微生物检查法、精子代谢测定法和动物受胎效果五种检查法。无论那一种检查法，都
19、必须以受精力高低为依据，在生产实际中通常应用外观检查法、显微镜检查法和微生物检查法。精子代谢测定法，在科学试验中往往被采用，以,深入研究精子的生理特性来放映精液品质。动物受胎效果检查法，一般是在前几种检查法的测定结果基础上，认为是合格的精液，再用于小群母畜中进行输精，观察受胎效果，这是最实际反应精液品质的受精能力高低。但所需要的时间较长一般几个月后才能得出效果。,一、外观,（一）精液量 一般指采精后家畜一次的射精量。测量猪、马精液量时，应用灭菌纱布或细孔尼龙纱网过滤，除去精液内含有的胶状分泌物后，再进行测量。,（二）颜色与气味,动物的正常精液颜色，一般为乳白色或淡灰色，个别呈浅乳黄色。其颜色因
20、精子浓度高低而异，浓度越高乳白色越深；相反，浓度越低颜色越淡。精液颜色，随着动物种类不同也稍有差别，牛羊正常精液呈乳白色或淡黄色；水牛为乳白色或灰白色；猪、马及兔为淡乳白色或浅灰白色。如精液颜色呈淡绿色是混有脓汁；呈淡红色是混入血液；呈黄色是混入尿液等。,动物精液一般无味。有的带有动物本身的固有气味，如牛、羊精液略有膻味；猪精液有的带腥味。但是，无论何种动物精液如有腐败臭味，说明精液中混有化脓性分泌物，应停止采精及时请兽医诊断治疗。,（三）云雾状,动物的排出的精液于集精瓶中，仔细观察其液面时，可看到精液呈翻滚运动现象，似云雾状。一般多见于牛、羊、鹿的精液和采集猪的浓厚部分精液。因其精子密度大而
21、活率又高时才出现云雾活动状由强至弱分五级，其表示为、，其中“”表示无云雾状。,（四）pH值,新采集的pH值，一般近中性左右，牛、羊精液呈弱酸性，而马、猪呈弱碱性。家畜精液的pH值，随其畜种、个体、采精方法及副性腺分泌物等因素影响有所变化。如黄牛用假阴道法采得的精液pH值为 6.4，但用按摩法才的精液为7.85；猪最初射出的精液为弱碱性，而采集精子浓厚部分的精液则呈弱酸性。PH值高低对精液品质有一定的影响，pH值偏低的精液品质好，pH值偏高的精液其精子生活力、受精力及保存效果等明显降低。为此，测定精液的pH值，对鉴定精液品质有一定作用。,（五）异物,一般指在精液内混入不应该有的异物如家畜的被毛、
22、脱落上皮，生殖道的炎性分泌物及灰尘、纤丝等。这些杂物在精液内会阻碍精子的前进，炎性分泌物严重污染精液品质。为此，如发现被毛、纤丝应及时除去，被炎症污染的精液则应废弃。,二、精液品质的常规检查,（一）精子活率 精子活率是指精液中呈直线前进运动精子所占有的百分率。也有人称为“活力”。它是目前评价精液品质优劣的常规检查的主要指标之一。一般在采精后、稀释保存和运输前后以及输精前后都要进行检查。,1.目测评定法,活率检查通常是采用光学显微镜放大200400倍，活动精子对精液样品检查标本进行目测评定。,2.等级评定,评定精子等级，通常以十级评分法，即在视野中呈直线前进运动的精子占全部精子数所估测的百分率，
23、来加以评分，视野中有100%呈直线运动者评为1.0；有90%呈直线运动者评为0.9；有80%呈直线运动者评为0.8，其余依次类推。家畜新鲜精液，精子活率一般在0.70.8左右。按家畜人工授精操作技术规程要求，原精液稀释后或液态保存精液的活率在0.6以上，冷冻保存精液的活率在0.3以上的精液才能用于输精。,3精子百分率,精子百分率：是取精液样品经特殊染色后，在显微镜下测定计数死、活精子的比率。原理：是利用活精子对待定染料不着色而死精子着色的特点来区分死、活精子。由于活精子的细胞膜具有半透性，能阻止色素浸入，而精子死亡后其细胞膜特别是头部核后帽的通透性增强，易着色死亡时间长，其染色越深。不着色或几
24、乎不着色的是活精子。由此可鉴定精子的死活，特别是对那些不表现活动的精子，是活精子或是死精子，就可以明显地加以区别。,死活精子检查方法：,（）伊红法：取精液和0.5%伊红溶液各一滴置于清洁载物片一端，迅速混合均匀，制成抹片。在400600 倍 镜下观察，活精子透明不着色，于不同视野中随机查数着色和不着色的精子共500个，即可算出着色精子的百分率。,（）伊红苯胺黑法：取滴精液置于载物片一端，再滴加滴5%伊红（水溶液）溶液，迅速混匀后，再加两滴1%苯胺黑（或苯胺兰）再迅速混匀，随即制作抹片，自然干燥后，于显微镜下观察。死活精子率一般只作原精液保存精液的检查。要求抹片操作时的温度以3537为宜制片要快
25、，混合要匀，又不能影响精子的活率。观察抹片应在24h内进行，才能使评定结果准确。,（）升温法：此法检查精子死活，是按血细胞计算法进行，但不同的是用生理盐水或等渗溶液稀释后置于血球计算板上，必须在恒温（3738）载物台上观察，先计算不活动的精子数，然后再置于恒温干燥箱内100 2min，然后处死全部精子计算精子总数。由精子总数减去不活动的精子数，即为活精子数，依此可得出活精子的百分率。,（二）精子密度,精子密度也称精子浓度，指精液的单位容积（通常是1ml）内所含有的精子数目。目前测定精子密度的方法常采用估测法，血细胞计计算法和光电比色计测定法等几种。,1.目测法,目测法是观察显微镜视野中精子的稠
26、密程度及其分布情况，来估测精液内所含精子数的多少。精子密度的观测，是与观察精子活率同时进行的，依视野内精子的稠密程度及其分布状况，可分为密、中、稀三个等级。密：整个视野内充满精子几乎看不到空隙，很难见到单个精子活动，即评为密。中：在视野内精子之间有相当一个精子长度的空隙，清晰可见单个精子的活动，即评为中。稀：视野内精子之间的空隙很大，甚至可以查数所有的精子个数，即评为稀。,2.血细胞计数器计数法,检测精子密度方法，基本采用医学检验红、白细胞计数器计数法。计数操作中稀释时，对牛、羊等精子密度高的精液使用红细胞吸管作稀释计算，查数计算板内五个中方格内的精子个数。精子密度五个中 方格内精子总数5万
27、稀释倍数。,3.光电比色计测定法,是目前用于评定精子密度的一种较准确的方法。此法是根据精子数越多，精液浓度越高其透光性越低的特性，利用光电比色计通过反射光和透光度来测定精子密度。在利用光电比色计测定精子密度时，应避免精液内的细胞碎屑、血细胞和副性腺分泌的胶状物等干扰透光性造成误差。,（三）精子形态检查,精子形态是否正常与受精率有着密切关系。若精液中含有大量畸形精子，势必会降低其受精能力，可直接反映种公畜生殖机能。为此，检查精子形态异常也是评定家畜精液品质的重要内容。,1.精子畸形率,在动物精液中常常出现形态不正常的精子，称为畸形精子。精子畸形率，是指精液畸形精子占精子总数的百分率。,畸形精子的
28、检查方法，先取一滴精液样品，滴在洁净载玻片一端，迅速推制抹片，自然干燥后染色，其染色溶液可先用姬汤姆萨液、苏木精伊红液、龙胆紫酒精液，也可用红或蓝墨水等，染色35min后水洗。待自然干燥后，置于显微镜下以400倍观察，查数的精子总数不得少于200个，最后计算其中畸形精子数占查数全部精子总数的百分率。精子畸形率=畸形精子数/查数的精子总数100%家畜正常精液中常有些畸形精子，一般用于输精的精子畸形率不得超20%，否则会严重影响受胎率。,2.精子顶体异常率,精子顶体异常率是指精液中顶体异常的精子数占精子总数的百分率。顶体异常一般表现为顶体膨 胀、缺损、部分脱落、全部脱落 等情况，其发生原因，可能与
29、精 子生成过程和副性腺分泌物性状不 良有关，尤其是离体精子遭受低温 打击和冷冻伤害等因素所造成的。因此精子顶体异常率是评定液态或 冷冻精液品质检查的重要指标之一。,检测精子顶体异常的常用方法是将被检的精子样品制成抹片，待自然干燥后。用固定液加以固定约15min。再经水洗和自然干燥后，进行染色，以姬姆萨缓冲液染色1.52h，再经水洗和自然干燥，然后树脂封装制成标本，最后置于高倍显微镜下或相差显微镜下观察。观察200个以上精子中顶体异常数，计算出精子顶体异常率。凡已稀释过的精液必须将样品在含有2%甲醛的柠檬酸盐中固定，涂片后在37下干燥，才能有利染色着色和观察清晰。此外要求冷冻精液解冻后，应以37
30、中孵育3h为准，进行制片观测。牛超过14%以上，猪超过4.3%以上，就会直接影响受胎率。,（四）精子存活时间及指数,精子存活时间，是指精子在体外一定保存条件下的总生存时间。精子存活指数，是指精子存活时间及其精子活率变化的一项综合指标。存活指数是指平均存活时间，表示精子活率下降速度。检查时，将稀释精液置于一定的温度下，间隔一定时间检查的平均活率，直至无活动精子为止，所需的总小时数是为存活时间；而相邻两次检查的平均活率与间隔时间的积相加总和是为生存指数。,精子存活时间及指数的检查方法：将欲检的原精液，以精液稀释液按1:3比例进行稀释后，镜检第一次精子活率并记录开始时间，然后分装在2个小试管（瓶）内
31、塞紧管口，并标明精液瓶的种畜名。再将精液试管逐渐降温，置于低温05中保存，每隔离68h，按常规方法镜检一次精子活率。对于冷冻精液按常规方法解冻，其颗粒冻精用解冻液解冻，而细管、安瓿冻精不用解冻液解冻，解冻后即进行第一次镜检精子活率。此后将解冻的精液置于低温58或高温37环境中保存每隔0.5h按常规方法镜检一次精子活率。,当镜检第一试管的精子全部停止活动为止时，同时再将另一管精液取出检查精子活率，以做对照。如果后者精子尚未全部死亡，则应继续保存检查，直到精子全无活动为止，应以后者的存活时间为准，计算精子存活时间。精子存活时间（小时）=检查间隔时间的总和减去最末两次检查间隔时间的一半。精子存活指数
32、=每前后相邻两次检查精子活率的平均数与间隔时间乘积的总和（无计量单位）。,三、其它指标检查,（一）PH的测定新鲜精液pH因家畜种类、个体、采精方法不同而异，一般牛、羊为6.56.9,马、猪为7.47.5；同种pH偏低的品质较好，pH偏高的精子其受精力、生活力、保存效果等显著降低；贮存后的精液，其pH值的变化似乎可以说明精液品质，但是，经过稀释处理的精液，贮存时其pH变化不大。,（二）美蓝褪色试验,美蓝是氧化还原剂，氧化即呈兰色，还原呈无色。精子在美蓝溶液中，呼吸时氧化脱氢，美蓝获得氢离子后便使兰色还原为无色。因此，根据美蓝褪色时间可测知精液中存活精子数量的多少，判定精子的活率和密度的高低。牛、
33、羊精液美蓝褪色试验，一般0.01%美蓝溶液与等量精液混合后，放在内直径为0.81.0mm，长68mm的毛玻璃管下衬白纸，在1825下观察；马、猪精液可在0.02%美蓝溶液一份与精液四份混合后，1ml试管内，并以石蜡封口，40下观察褪色时间。,（三）精液果糖分解测定,精液果糖分解能力与精子活力密切相关，因此，测定精液果糖分解系数可作为精子活力评定指标。果糖分解测定是以1亿精子每小时消耗果糖的毫克数表示，测定是在嫌气条件下，用一定量的精液（如0.5ml）在37温箱中孵育3h，每一小时取0.1ml精液样本给果糖定量测定，将所的结果与孵育前最初果糖含量比较，计算出果糖分解系数。由于精子还可以利用果糖以外的其它简单糖类，因此用含葡萄糖等稀释液稀释过的精液不能测定。,（四）精子耗氧量测定,耗氧率是以一亿精子在37一小时内所消耗的氧气以微升数表示。一般是将一定量精液放在37温箱中孵育一小时，用瓦勃氏呼吸器（Warburg apparatus）测定其耗氧量，计算出精子耗氧率。,
