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1、第四节 培养基,一、培养基配制应遵循的原则二、培养基的类型,人工配制的、适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物用的营养基质。,用途：促使微生物生长；积累代谢产物；分离微生物菌种；鉴定微生物种类；微生物细胞计数；菌种保藏；制备微生物制品。,根据不同微生物的营养需求配制不同的培养基营养物的浓度与比例应恰当物理化学条件适宜（PH)培养基无菌，选用价格低廉，资源丰富的原料,一、培养基配制应遵循的原则,（一）培养基组分应适合微生物的营养特点,即根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。不同营养类型的微生物，其对营养物的需求差异很大。如自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物质组成。异养做生物
2、的培养基至少需要含有一种有机物质，但有机物的种类需适应所培养菌的特点。按微生物的主要类类群来说，它们所需要的培养基成分也不同：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基 LB(Luria-Bertani)放线菌：高氏一号培养基 真菌：查氏合成培养基 PDA(Potato-Dextrose-Agar)酵母菌；麦芽汁 当对试验菌营养需求特点不清楚的时候，可以采用生长谱法进行测定。,（二）营养物的浓度与比例应恰当,浓度过高微生物的生长起抑制作用，浓度过小不能 满足微生物生长的需要。碳氮比（C/N）直接影响微生物生长与繁殖及代谢物的形成 与积累，故常作为考察培养基组成时的一个重要指标；,碳源中的碳原子的mol数氮源中所
3、含的氮原子的mol数,C/N比值=,速效性氮（或碳）源与迟效性氮（或碳）源的比例各种金属离子间的比例,（三）物理化学条件适宜,（1）pH:各类微生物的最适生长pH值各不相同：细 菌：7.08.0放线菌：7.58.5 酵母菌：3.86.0霉 菌：4.05.8 在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累，培养基的初始pH值会发生改变，为了维持培养基pH值的相对恒定，通常采用下列两种方式：内源调节：在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐；调节培 养基的碳氮比。外源调节：按实际需要不断向发酵液流加酸或碱液,（2）渗透压和aw,渗透压等渗溶液适宜微生物生长高渗溶液细胞发生质壁分
4、离低渗溶液细胞吸水膨胀，直至破裂,大多数微生物适合在等渗的环境下生长，而有的菌如Staphylococcus aureus则能在3mol/L NaCl的高渗溶液中生长。能在高盐环境（2.86.2/L NaCl）生长的微生物常被称为嗜盐微生物（Halophiles）。,（四）根据培养基的应用目的选择原料及其来源,用于培养菌体种子的培养基营养应丰富，氮源含量宜高（碳氮比低）；用于大量生产代谢产物的培养基其氮源一般应比种子培养基稍低，（但若发酵产物是含氮化合物时，有时还应提高培养基的氮源含量）；若代谢产物是次级代谢产物时要考虑是否加入特殊元素或特定的代谢产物；当所设计的是大规模发酵用的培养基时，应重
5、视培养基中各成份的来源和价格，应选择来源广泛、价格低廉 的原料，提倡以粗代精，以废代好。,按培养基成分分按培养基的用途分按物理性状分,培养基类型,合成培养基天然培养基,基本培养基富集培养基鉴别培养基,固体培养基液体培养基半固体培养基,二、培养基的类型及应用,1.按培养基的成分分类,天然培养基complex medium 利用化学成分还不清楚 或不恒定的天然有机物质制成的培养基。麦汁培养基牛肉膏蛋白胨培养基,合成培养基synthetic medium 利用化学成分完全了解的高纯化学试剂制成的培养基。察氏培养基（g/L)、高氏一号培养基,半合成培养基semi-synthetic medium 由部
6、分天然有机物和部分化学试剂制成的培养基。马铃薯琼脂培养基,一些营养物质的来源与成分,2.据培养基的物理状态分类,液体培养基 liquid medium 呈液体状态的培养基。培养基中未加任何凝固剂。常用于大规模工业生产以及实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究。固体培养基 solid medium 外观呈固体状态的培养基。加一定量的凝固剂。常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏。半固体培养基 semisolid medium 呈当容器倒放时不致流下、但在剧烈振荡后则能破散状态的凝固性固体培养基。琼脂的加量为0.5%左右。半固体培养基常用来观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体的效价
7、。,琼脂和明胶的区别,3.按照培养基的特殊用途分类,加富培养基 为分离某种微生物而专门设计，加入了助长该类微生物的营养物质的培养基。选择培养基 加入了某种化学物质以抑制不需要的菌的生长,从而促进目的菌生长的培养基。（正选择、反选择）鉴别培养基 添加了某种试剂或化学药品而对特定的微生物起鉴别作用的培养基。,EMB(Eosin Methylene Blue)培养基中培养大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+,故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色。从菌落表面反光还可看到绿色金属闪光。而产酸弱的菌株的菌落呈棕色。不发酵乳酸的菌落无色透明。,鉴别肠道细菌的伊红美蓝乳糖培养基,伊红美蓝(EMB,Eosin Methylene Blue)培养基,一些鉴别培养基,种子培养基 seed medium 培养发酵用的健壮的种子的培养基。发酵培养基 fermentation medium 供菌种生长、繁殖和合成某种预定的发酵产物的培养基。繁殖和保藏培养基 细 菌：营养琼脂、LB培养基 放线菌：马铃薯培养基，高氏一号培养基 酵 母：麦汁培养基，YEPD（用于酵母原生质体融合）培养基 霉 菌：麦汁培养基、察氏培养基 基础培养基 含有一般微生物生长繁殖与需要的基本营养物质的培养基。,
