细胞培养室工作守则.docx

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1、细胞培养室工作守则一、入室基本规则1.禁止私自带非本实验平台人员入室操作。2 .进细胞培养室必须穿专用工作衣(白大衣),换拖鞋或鞋套,不必需的物品勿携入室内。3 .严禁吸烟和饮食,保持安静和良好秩序,实验时要严肃认真。4 .当天要操作的使用者,实验开始前、结束后开操作间外紫外灯消毒细胞房15-30min;检查培养箱内水量是否足够;检查灭菌物品的储备情况,以便及时补充。5 .细胞培养室遵循预约原则。预约时间和实际操作时间都要登记!备查!无预约者若要在他人预约时段内使用,需先征得预约者的同意,否则应无条件让出工作台,以免耽误他人实验。6 .试剂耗材都由实验人员自己准备,各自物品请写好名字,不能私自

2、拿取他人试剂耗材或消毒物品,如紧急需要,则需征得本人同意后方可。注:公用材料如枪头、离心管,配制消毒用75%的酒精,制作酒精棉球等遵从谁消耗谁补充,与人方便于己方便!耗材的使用秉持节约的原则,同一类耗材必须使用完才可以拆封新的耗材,同一类耗材快使用完的时候到徐老师处领取。7 .离开实验室前,脱去工作衣和拖鞋或鞋套。若有垃圾堆积,请顺手扔掉,更换垃圾袋。关好水、电、门、窗,方可离开实验室。8 .定期1-2月清理冰箱里的个人物品。9 .新进细胞培养室进行实验的老师或同学,由负责该新进人员的指导教师进行细胞培养培训。二、培养箱使用规则1.从培养箱取放物品前用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间和

3、减少开门次数。注:培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱,容易造成污染。10 培养瓶皿放入培养箱前,用酒精消毒瓶口位置,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。3.2-3人共用一层培养箱,按预定位置摆放培养器皿,方便查找,以免长时间敞开培养箱。4.普通培养中的细胞,若非实验需要,每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次,2人以上共用的细胞,可约好时间一起观察。注:频繁将细胞拿出观察,容易给培养箱造成污染,同时也会影响细胞生长条件的恒定。5,培养箱贴上消毒、换水时间表,值日生请作好记录。三、显微镜使用规则1 .显微镜使用前用酒精棉球从中间至周围擦拭载物台,注

4、意不要碰到镜头。2 .离开细胞房时或较长时间不需使用时,及时关上电源,延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。四、超净台相关操作规则1.检查酒精棉球是否足够;喷壶和酒精灯中酒精是否足够,液面应占容量1/3-2/3;不足请及时补充。注:消毒用75%的酒精,酒精灯用95%的酒精,向喷壶或灯内添加酒精时请留意。3 .超净台中应摆放废液缸,用于暂时存放废弃物,实验结束后将20%的84消毒液倒入缸中浸泡约30分钟,冲洗晾干备用。废弃细胞需首先用20%的84消毒液消毒后再倒入下水道。4 .超净台使用前需用酒精棉球擦拭工作区消毒,打开紫外线灯和风机,同时打开室内紫外线灯照射30分钟以上;使用后需用酒精棉球

5、擦拭工作区消毒,关闭风机,紫外线灯照射30分钟以上后关闭超净台电源。5 .从外面拿进超净台的东西都要喷75%酒精消毒。6 .可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等干净干燥后用放酸缸中浸泡过夜后,再进行洗涤。洗涤程序:清水冲10次以上去除洗涤残留酸液,然后冲去离子水3次,再用双蒸水1次,倒置晾干。7 .每次实验结束后,应及时清理台面、桌面、地面,整理好用过的实验器材。观察培养箱中C02的浓度、温度、水量、供气压力等参数,待正常后做好操作时间记录。将废弃物品带出操作间。五、培养液、试剂等相关操作规则1 .从冰箱取放物品动作要迅速,关门时要检查门是否关好。按类别存放试剂。2 .买回的血清使用前需在超净台

6、分装(15ml离心管),标注血清品牌、分装人和分装日期。分装好的血清长时间保存于-20。如需使用,使用前放于4预解冻,在血清管上签上使用者名字及日期,解冻后的血清暂存在4并尽快使用。若使用别人解冻的血清需征得同意以免耽误他人实验。按需解冻,避免反复冻融。3 .细胞因子或蛋白等试剂到货后存放于-20度或-80度。若为粉状,在使用前按说明书溶解,并分装好,标注好试剂名称、分装日期,分装浓度,分装体积,存放于-80度。每次取一管放于细胞室-20度,用完之后再另外取用。4 .细胞培养实验所用试剂尽量做到专人专用,标注清楚物品名称、个人名字和启封日期,以免交叉污染。若为同一课题组成员,试剂可相互协调共用

7、,以保证试剂最大限度的使用完之后再订购。六、值日生工作职责1.每周值日生时间从周六开始,至下周五结束。5 .值日周开始时需完成的事情:在周末消毒灭菌并烘干枪头、离心管等常规物品,供未来一周的使用。各种规格的枪头需要准备两套,一套放置于烘箱中,一套放置于超净工作台中。配制消毒用的75%的酒精,制作酒精棉球,给细胞房内添加足够的95%乙醇供酒精灯使用。6 .值日周结束前需完成的事情:星期五或前后一天内打扫细胞房。包括超净台面、桌面、地面,给水浴锅加水或换水(超纯水或蒸储水),洗细胞房专用的实验服,紫外消毒细胞房。切记给培养箱换超纯水,保证水质清洁!注:若上周值日生及时给培养箱内水槽加足水,根据经验未来一周内培养箱不会干水,但值日生仍应经常检查,以便及时发现异常情况。7 .值日完成后需在平台群发照片汇报已做值日。5每4周清洁一次培养箱:先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内;将培养箱内的不锈钢板取出,包括4块横板和左右2块立着的架子,用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁;打开培养箱清洁内壁时动作要迅速,避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入,缩短过滤器的寿命;用紫外灯照射培养箱内部15min如不遵守该细胞培养室守则,将取消进行细胞培养的资格!

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