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1、差异凝胶双向电泳(DIGE)技术原理及应用,主讲:胡水旺 2008年10月10日 广东省蛋白质组学重点实验室,2-D DIGE,1.Background2.Components3.The benefits 4.Workflow5.Application6.Summary,Background,Background,蛋白质组学可分为三个领域：经典表达蛋白质组学、差异蛋白质组学、功能蛋白质组学。差异蛋白质组学：通过某种方法和技术对某些过程中的生物样品（细胞、组织或体液等）的蛋白质表达丰度进行比较分析，从而发现不同生理或病理条件下蛋白质表达水平的变化情况。,Background,Background
2、,Background,DIGE(Difference gel electrophoresis)技术最早在 1997 年由 Jon Minden 实验室的 Unlu等提出，后来 Amresham 成为此技术的主要推动者。2002 年 Gharbis 等巧妙的将所有实 验组的样品等量混合为内标用在每块胶上。不久，Amerhsma公司便将内标作为DIGE实验设计核心原则之一，从而使DIGE 发展成为更加趋于成熟的体系。,Components of DIGE,2-DE Unit,CyDyeDIGE荧光标记物,DeCyder差异分析软件,Typhoon Imager or EDI,1.CyDye DI
3、GE 荧光标记物,Two kinds of dyes properties,Whats the internal standard?,Why we use the internal standard?,Benefits of the internal standard?,Increase confidence of the results,Benefits of the internal standard?,2.2-DE Unite,3.Scanners,4.,The benefits of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of
4、DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Workflow of DIGE,Applications of DIGE,Applications of DIGE,Applications of DIGE,Applications of DIGE,所做DIGE图谱举例,Summary,DIGE 技术结合了蛋白质组学研究中经典的双向电泳技术和特有的多重荧光分析技术。不同样品分别由电荷和分子量匹配的CyDye DIGE 荧光标记物预标记，随后再混合并在同一块胶上跑电泳。并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性、可靠性和重复性。能检测到小于 10%的蛋白表达差异而统计学可信度达到 95%。用于检测蛋白表达中真实的生物学差异，并对差异进行定量。DIGE 技术必将在差异蛋白质组学的研究中发挥越来越重要的作用。,Thanks!,
