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1、实验二四 果蝇遗传系列杂交实验,1.通过对果蝇的杂交实验，正确理解分离定律的实质，并验证与加深理解三个遗传规律.2.认识伴性遗传的正、反交差别,掌握伴性遗传的特点.3.掌握果蝇的饲养、杂交技术及统计处理方法.4.掌握绘制遗传学图的原理和方法，加深对重组值、遗传学图、双交换值、并发率和干涉等概念理解.,一、实验目的,果蝇单因子遗传双因子遗传伴性遗传连锁与互换,二、实验原理,果蝇的单因子遗传是指常CS上一对等位基因的传递规律.由于显隐关系,在子一代只表现显性性状,但基因型是杂合状态.在形成配子时,基因保持相对独立,又按原样分配到不同的配子中去,理论上的比例是1:1.雌雄配子各1:1,结合的概率又相
2、等,子二代的基因型就有三种,比例是1:2:1,而表型就是3:1;分离规律和自由组合规律,不仅适合于植物,也可用于动物;1910年,摩尔根发现白眼果蝇突变体,观察到交叉遗传现象.因为白眼w在X染色体上,为性连锁遗传,即W基因由外公经由女儿传给了外孙,称为交叉遗传.1916年,Bridge发现X染色体不分开实验,证明白眼基因在X染色体上。,自由组合定律,位于非同源染色体上的两对基因，在减数分裂形成配子时可以自由组合；由于配子的随机结合，两对相对性状在杂种第二代是自由组合的，呈现9:3:3:1的表型分离比。,伴性遗传,位于性染色体上的基因叫伴性基因，其遗传方式与位于常染色体上的基因有一定的差别，它在
3、亲代与子代之间的传递方式与性别有关，该遗传方式称为伴性遗传。伴性遗传有特殊的遗传规律，如正反交结果不同，有交叉遗传现象等。,连锁与互换,位于同一条染色体上的基因称为连锁基因。同源染色体上的连锁基因之间会发生一定频率的交换，在子代中出现一定数量的重组型。重组型子代的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。基因在染色体上是呈直线排列的，基因间距离越远，发生交换的可能性就越大，反之亦然。基因间的图距就是通过重组值的测定而得到的。,本实验通过对同一染色体上的三个非等位基因的交换行为来验证基因是在染色体上呈直线排列的。先将野生型果蝇与三隐性果蝇杂交，作为三因子杂合品种(abc+)，再用三隐性个体进行测交。
4、在测交后代中，因交换可得到各种类型的组合。与两个亲本表型不同的称为重组合类型。用两个基因座位间重组值的大小表示基因间的相对距离。,三 点 测 交 试 验 中 得 到 测 交 后 代 的 交 配 程 序,杂交组合,ee()vg vg();vg vg()ee()+()ww();ww()+()vgvg ee()+();+()vgvg ee()wsn3m()+(),三、材料与试剂器材,1.材料:WT黑腹果蝇及4种突变型:2(vg),6(w sn3 m),10(e),22(w)品系2.试剂:乙醚、乙醇、琼脂、白糖、酵母粉、丙酸、玉米粉3.器材:恒温培养箱、高压灭菌器、烧杯、量筒、天平、培养瓶、棉塞、滤纸
5、、毛笔、镊子、牛皮纸、记号笔、玻璃棒,四、实验步骤,1.四人一组,确定杂交组合(单、双因子、伴性遗传、三因子及互补),选定所需亲本2.实验设计:包括时间安排3.繁殖亲本,收集处女蝇4.杂交及互交,统计实验数据5.完成实验报告,实验操作,1.选处女蝇:提前3-5d收集8h内羽化的成蝇,分辨2.果蝇杂交:转移4-5对亲本,写明标签(杂交组合、日期及实验人)3.去亲本:杂交后一周4.F1观察及互交:去亲本后连续观察2-3d;转移5-6对至新培养瓶互交(是否需要选处女蝇?)5.再去亲本:互交后一周6.记录结果:连续统计3-4d7.野生果蝇的采集与培养,有幼虫、蛹 去亲本,处女蝇的选取,8-10h内羽化
6、的果蝇分离pm10:00去成蝇am6:00,pm2:00,pm9:30分别收集分离成蝇每瓶培养基放置3-5对亲本果蝇,实验结果的观察和统计,1.把各杂交组合的果蝇成虫分别倒出试管，并逐个组合麻醉，观察性状，做好记录。2.样本自由度为n-13.根据实际观察数计算理论值。4.计算2 值，结果必须与显著平准作比较 如：p0.05 无显著差异 p0.05 差异显著 p0.01 差异极显著5.计算过程各数值要求比2表所给数值的小数点后多取1位，以方便比较。,单因子杂交实验结果,单因子杂交实验卡方测验,双因子实验结果,F2(正、反交合瓶统计)数目,双因子实验2测验,F2结果统计,伴性遗传实验结果,正交X+
7、X+XwY,伴性遗传实验结果,反交XwXw X+Y,伴性遗传实验结果,正交F2,伴性遗传实验结果,反交F2,三点测交实验结果,观察的结果填入表格中,果蝇杂交注意事项,1.母本必须是处女蝇2.F1羽化之前必须去掉亲本3.F1必须转入新的培养基中进行互交4.亲本果蝇麻醉时间不宜过长5.必须倒入空瓶麻醉果蝇,严禁在培养瓶中麻醉,五、作业,1.P3,2;P5,2 2.画出三因子实验的遗传学图,把3个基因定位在CS上,计算并发率和干涉.3.m/m+、vg/vg+分别是等位关系,但是m与vg是非等位的.怎样理解等位及非等位基因对某一性状的影响?4.列时间表:采集果蝇放入培养瓶后,以天为单位,每个时期最早何时可见？,
