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1、培养基的制备和高压蒸汽灭菌,2007.11,目的与要求,1、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。3、初步掌握划线和涂布平板的技术。4、了解抗生素对细菌的抑制作用。,配培养基,灭菌、倒平板,划线、涂布平板,抑菌圈实验,实验流程,任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理,培养基,培养基（medium)：由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。,在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。,培养基的配制过程,计算用量:200ml固体培养基称量：托盘天平溶解：自来水调pH：自然pH灭菌：一般培养基，121 0C,15-30
2、min：20min；含糖培养基：112 0C,15-30min；易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合倒平板,3g/L 牛肉膏,10g/L 蛋白胨,5g/L NaCl,2%琼脂粉,灭菌,灭菌（Sterilization）是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。,灭菌方法,化学药品灭菌,辐射灭菌,过滤除菌,加热法,干热灭菌,湿热灭菌,火焰灼烧,热空气灭菌,煮沸消毒法,常压蒸汽灭菌法,高压蒸汽法,高压蒸汽灭菌锅的构造,Be careful!,高压蒸汽灭菌锅的使用,待灭菌物品的包扎,装锅、加水,加盖（对角线均匀拧旋）,升温、排气（放大气5min）,恒温,切断电源、冷却,开锅取物
3、,12120min,Attention!,倒平板,融化的琼脂培养基,冷却至50左右(以手背能忍受的温度为准),平板划线的基本程序,灭菌接种环,沾取菌液,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,连续划线法,灭菌过的移液管,吸取菌液0.1ml滴在培养皿中央,用灭菌的涂布棒均匀涂布：将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。,三角铁扒,平板涂布的基本程序,抑菌圈实验,每组4人,需要灭菌的东西：固体培养基200ml（2g蛋白胨，0.6g牛肉膏，1gNaCl，4g琼脂，自
4、来水200ml，自然pH）培养皿10个（每人倒平板两个，一个划线，一个涂布；涂布的那个用于抑菌圈实验）1ml移液管4支(每人1支）滤纸片，每人两片，每组需剪10片，装入培养皿中灭菌,Ready?GO!,思考题,1、总结一下，配制培养基应注意哪些问题。2、高压灭菌的关键是什么？3、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会产生什么样的效果，为什么？,Game Over!,（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。（2）放入需要灭菌的东西。注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）（4）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后5分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到121），控制热源维持所需时间（20分钟），然后停止加热，让其自然冷却。注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。,具体操作步骤：,
