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1、免疫学检查,盖星月,人们对生殖活动的免疫学研究已证实，全部生殖过程均存在着复杂的免疫学现象。免疫因素参与生殖过程和男女不育症的发生有着密切的关系。,免疫学,概述：,免疫系统的组成：由主宰或执行机体免疫功能的器官、组织和细胞所组成的一个系统，称为免疫系统。由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成。免疫系统的功能：免疫反应是机体对外来抗原的特殊反应。主要有三大免疫功能，即免疫防御、免疫稳定和免疫监视。在免疫功能正常条件下，机体对非己抗原可形成体液免疫和细胞免疫并产生排异效应，发挥免疫保护作用。抗精子抗体与生育：男性精浆中含有几十种抗原，精子具有抗原性，而且精子是在青春期之后才出现的因此人类精子的自身免疫
2、反应是造成男性不育的重要原因之一。,现代免疫学认为，机体的免疫功能是对抗原刺激的应答，而免疫应答又表现为免疫系统识别自己和排除非己的能力。免疫功能根据免疫识别发挥作用。这种功能大致有：对外源性异物（主要是传染性因子）的免疫防御；去除衰退或损伤细胞的免疫，以保持自身稳定；消除突变细胞的免监视。,一、不孕症的生殖免疫学检测,精子抗体免疫学方法性交后试验及精子-宫颈黏膜接触与穿透试验 Sperm-CM接触试验 精液 CM 加盖玻片 SpermCM穿透试验,（二)精子凝集试验：特异性差(三)精子制动及细胞毒试验：特异性高、敏感性低(四)间接免疫荧光试验：特异性差(五)ELISA及BA-ELISA法：敏
3、感、特异、易进行(六)放射性标抗免疫蛋白或A蛋白法：敏感、特异、设备贵(七)混合凝集法(八)免疫珠法：能定位,一不孕症的生殖免疫学检测,抗透明带抗体的免疫检测:1、透明带沉淀反应2、间接免疫荧光试验3、被动血凝法4、放射免疫法5、ELISA及BA-ELISA法6、精子透明带结合或穿透试验,二、生殖感染的免疫实验诊断,梅毒、支原体、衣原体的免疫学检测TORCH感染的免疫学检测,二、生殖感染的免疫实验诊断,梅毒螺旋体感染的实验室诊断 根据梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP）的生物学及免疫学特性，检测方法主要有以下几种：1病原体的检查 2梅毒血清学试验 3基因诊断技术,二、生殖感
4、染的免疫实验诊断,基因诊断技术：聚合酶链反应（PCR）从选择的标本扩增梅毒螺旋体DNA序列，使其拷贝数量增加，再用特异性探针来进行检测，能选择性地将靶基因扩增106以上，方法敏感特异。分子生物学检测方法：有基因探针、PCR、蛋白表达等方法,二、生殖感染的免疫实验诊断,衣原体感染的免疫学诊断：衣原体包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体。寄生于宿主细胞内，有特殊的生长繁殖周期，在周期中以形态和功能不同的状态存在，即细胞外具有感染性的原体和细胞内无感染性的始体或网状体。目前检测衣原体技术主要包括以下几方面：寻找抗原：1.鸡胚分离培养2.细胞分离培养 3.涂片检查包涵体 4.ELISA或荧光法检查
5、衣原体抗原 5.金标法衣原体快速检测等 寻找特异性核酸1.连接酶链反应（LCR）2.转录介导的扩增试验（TMA）3.酶放大免疫反应（PCE）4.聚合酶链反应（PCR）寻找特异性抗体,寻找特异性抗体：沙眼衣原体感染时血清和泌尿生殖道分泌液中会出现抗体，可用微量免疫荧光法等检测。,TORCH宫内感染的免疫学诊断：孕期TORCH感染相当普遍，但只有近期或活动性感染并发展到宫内感染时才会危及胎儿引起不良妊娠结局 PCR技术用于病原体DNA或RNA检测,敏感、准确、快速 与TORCH宫内感染相关的免疫分子的检测,二、生殖感染的免疫实验诊断,HPV感染的检测：HHPV分型及病理学作用 目前已知的HPV有1
6、10多种，根据病毒致癌性的大小分为两大类：(1)低危型HPV(非癌性相关型，LRHPV)(2)高危型HPV(癌相关型，HRHPV)HPV感染与宫颈癌及癌前病变的关系宫颈癌常规筛查方法分析：宫颈巴氏涂片及组织学荧光分光镜检查法等,HPV检测方法：传统的细胞学检测方法及其进展:巴氏涂片法、薄层液基制片技术、计算机辅助检测技术等HPV-DNA检测方法HPV检测新技术,HPV-DNA检测方法：通用型引物聚合酶链反应(PCR)核酸杂交检测核酸印迹原位杂交斑点印迹原位杂交 杂交捕获法(hybrid capture-II，又称HC-系统),HIV感染的检测：血清学检测试验 初筛试验:酶联免疫吸附试验(EL1
7、SA)、快速检测(RT)实验 确认试验:免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIV I)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。子生物学检测技术子生物学检测技术自动化PCR检测技术荧光实时定量PCR技术生物芯片技术的应用分子挂号费分子生物学检测技术,三、生殖系肿瘤的免疫学实验诊断,目前临床广泛应用的肿瘤标志物主要有胚胎抗原，天然自身抗原，糖类抗原，细胞角蛋白，肿瘤相关的酶、激素以及某些癌基因等。ELISA和酶免疫化学发光技术常用于检测血液或其他体 液中肿瘤标记物。免疫组化、流式细胞技术等用于检测肿瘤细胞表面标记物。原位杂交、PCR等技术已用于测定癌基因、抑癌基因、
8、端粒酶及细胞因子基因。单克隆抗体与同位素结合物的体内示踪技术，有助于对肿瘤的早期诊断和定位。,固相非竞争的直接夹心ELISA法检测肿瘤标记物 以双抗体夹心法为例，操作步骤如下,1）本法测定二价或二价以上的大分子抗原。不适用于测定半抗原及小分子单价抗原。（2）标本中含RF存在时，可出现假阳性，采用F（ab）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，可消除RF的干扰。,生殖系肿瘤常用主要酶免疫学检测指标：1、血清糖蛋白抗原肿瘤标记物2、胎儿胎盘蛋白肿瘤标记物 3、酶类肿瘤标记物肿瘤标记物检测的研究进展：1细胞因子及受体：多种细胞因子及其受体在卵巢肿瘤发生时，成为癌基因编码的异常蛋白而异常表达
9、，参与肿瘤细胞的信号传递、基因转录的调控。细胞因子产生的异常、细胞因子受体质与量的异常以及受体激活后信号传递系统的紊乱，对于妇科肿瘤的形成和发展起着重要的作用，因此有望成为新的诊断标志物。2蛋白质组学在肿瘤标记物筛选鉴定中的应用：蛋白芯片原理及种类:（1）生物学原理（2）色谱学或层析原理,四、生殖内分泌功能的免疫分析,免疫化学发光法测定性激素 卵巢储备功能的实验监测 卵巢早衰的免疫学分析,四、生殖内分泌功能的免疫分析,免疫化学发光法测定性激素 发光免疫分析根据不同体系和标记物及标记方法的不同，大体上可分为以下3种类型：化学发光酶免疫分析 化学发光免疫分析 生物发光免疫分析,酶免疫化学发光仪测定
10、原理：例如竞争法,四、生殖内分泌功能的免疫分析,卵巢储备功能的实验监测 卵巢储备功能是指卵巢内存留卵泡的数量和质量，反映女性的生育能力。实验室辅助诊断主要为以下几方面：性激素及促性腺激素的检测方法1被动检测方法（1）血清FSH水平的检测（2）性激素及促性腺激素水平的检测（3）FSH/LH比值测定（4）抗苗勒激素2.诱发性检测方法（1）氯米芬激动试验（2）促性腺激素释放激素刺激试验（3）促性腺激素刺激实验（4）卵巢过早黄素化时激素检测 相关细胞因子的检测,卵巢早衰的免疫学分析 自身免疫是POF的一个重要的致病因素，诊断主要依据FSH、LH及E2的检测结合病史，其中最敏感的是血清FSH 升高（4O IUL）。一些POF患者中可表现自身免疫症状以及血清中可检测到一些自身抗体。辅助检查方法有：抗卵巢抗体 抗透明带抗体 促性腺激素受体抗体 类固醇细胞抗体 细胞因子,
