《《免疫实验技术》PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《免疫实验技术》PPT课件.ppt（24页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、免疫学实验技术,浙江大学医学院,利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分子等)及免疫细胞的实验过程。有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判断。,一、凝集反应 颗粒性抗原（细胞、细菌等）或吸附于免疫无关载体上的可溶性抗原与相应抗体，在适量电解质的存在下，形成肉眼可见的凝集团块。1、直接凝集反应（1）玻片凝集试验 ABO血型鉴定（2）试管凝集试验 肥达试验效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应现象的最高稀释度作为待检抗原（或抗体）的含量。,凝集反应（agglutination),颗粒型抗原细菌、细胞,抗体（凝集素）,电解质（生理盐水）,3750数小时,凝集反应（凝集成团）,1
2、.直接凝集试验,玻片法,试管法,含有已知抗体的诊断血清,待检菌液,生理盐水,特点,简便、快速不能定量,UUUU,待检血清,盐水,简便、快速能定量,肥达氏试验（widal test),伤寒、副伤寒,已知抗原,2、间接凝集反应 指可溶性抗原(或抗体)吸附在乳胶颗粒或红细胞等载体表面与相应抗体(或抗原)结合反应，在适宜的条件下，出现凝集现象。正向间接凝集反应 用可溶性抗原包被载体以检测抗体。反向间接凝集反应 用抗体包被载体以检测抗原。,二、沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体结合，当两者比例合适，并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线。,沉淀试验（precipitation test）,可溶性
3、抗原细胞裂解液,抗体（沉淀素）,电解质（生理盐水）,3750数小时,沉淀反应（清澄液中出现混浊沉淀）,沉淀反应分类（1）琼脂扩散试验 a.单向琼脂扩散试验 b.双向琼脂扩散试验（2）免疫电泳试验 对流免疫电泳：原理：在阴极孔内加抗原，阳极孔内加抗体。通电后，抗原带负电荷较多，分子较小，向阳极泳动；抗体分子带负电荷较少，加上分子量大，在琼脂的电渗作用下向阴极泳动。（3）环状沉淀试验,（1）单向扩散试验（Single redial diffusion test）,（2）双向扩散试验（Double diffusion test）,（3）对流免疫电泳,作用及特点：抗体球蛋白移向阴极，抗原分子移向阳极，
4、当两者在适当比例处相遇，即形成灰白色沉淀线。检查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比双向扩散法高约10倍，只需12小时即可获得检验结果。不能定量测定。,Ag,Ab,_,+,三、免疫标记技术 原理：利用酶、荧光素、胶体金、发光物质以及放射性核素等标记物来标记抗原或抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最后测定复合物中的标记物。优点：特异、敏感、快速，可作定性、定量或定位测定。,依据检测物分两类：1.免疫组化技术(immunohistochemical technique)，用于组织/细胞中抗原或抗体的定位；2.免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原或抗体的检测。依据标记物的不同，可分为：
5、酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术和放射免疫技术。1、酶免疫技术 酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原进行抗原抗体反应。,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)属固相酶免疫测定 ELISA原理：把待测标本(含有未知抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的顺序与固相抗原或抗体起反应，再洗涤固相载体，随后加入酶的底物，底物受酶催化转变为有色产物。根据颜色的深浅对待测物质定性或定量。,三种试剂：固相抗原或抗体 即把抗原或抗体用合适的方法连接到固相载体表面，同时保留它们的免疫活性；酶标抗原或抗体 即把某些酶用合适的方法连接到抗原或
6、抗体表面，同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)；酶作用的底物 常用的底物是邻苯二胺,ELISA的类型：(1)双抗体夹心法 测抗原 1）已知抗体包被 2）洗板 3）加待检抗原标本 4）洗板 5）加酶标记抗体 6）洗板 7）加底物显色，测定,（2）间接法 测抗体 1）己知抗原包被 2）洗板 3）加待检病人血清 4）洗板 5）加酶标记抗人IgG 6）洗板 7）加底物显色，测定（3）竞争法 测抗原或抗体 测定抗原：在待测管中加入受检抗原和酶标抗原，使它们同固相抗体进行竞争性结合。,酶联免疫吸附试验（ELISA）,间接法,Ag,待检血清,酶标抗抗体,检测抗体,双抗体法,Ag,检测抗原,待检抗原,抗原竞争法,Ag,待检抗原,酶标抗原,Ag,检测抗原,2、胶体金免疫技术 以胶体金为标记物的抗原抗体反应。常与膜载体技术结合，包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等。斑点金免疫层析试验(dot gold immunochromatographic assay，DICA)以硝酸纤维素膜为载体 如早早孕试验,荧光免疫技术 化学发光免疫技术 细胞免疫功能测定 流式细胞测定技术及HLA分型技术 请同学们参看免疫实验视听教材和CAI课件,
