《《家畜人工授精》PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《家畜人工授精》PPT课件.ppt（163页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、第七章人工授精,目录,第一节 概述第二节 采精第三节 精液品质检查第四节 精液的稀释与保存第五节 输精第六节 冷冻精液,第一节 概述,概念,人工授精是利用器械采集雄性动物的精液。经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物的生殖道内，以代替自然交配而繁殖后代的一种技术。,一、人工授精的发展概况,人工授精的发展经历下列三个阶段：1.试验阶段：1780年，意大利生理学家Spallanzani，第一次成功地用狗进行了人工授精试验。2.实用阶段：上世纪40-60年代，人工授精的应用蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高。3冷冻精液阶段：50年代英国的Smit
2、h和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。,二、人工授精的优越性,1.提高了优良种公畜的配种效能和种用价值 2.加速家畜品种改良，促进育种工作 3.降低了饲养管理费用 4.防止各种疾病，特别是生殖道传染病的传播 5.有利于提高母畜的受胎率 6.可以进行精液的长期保存 7.这开展科学研究提供了有效手段,三、人工授精的限制,1、通过人工授精可能使不良的公畜影响范围更大2、必须投入一定资金，进行房舍建设和设备购置3、必须进行人员的技术培训，不良的操作会造成更严重的问题,第二节 采精,采精的基本要求,安全：对种公畜、对人员必须确保安全洁净：采集的精液不能受到任何生物和
3、化学污染全部：能够采集到种公畜全部的精液,一、采精前的准备,（一）采精场地,采精要有一定的采精环境，以便雄性动物建立起巩固的条件反射，同时防止精液污染。采精场地应该宽敞、平坦、安静、清洁，场内设有采精架以保定台畜，或设立假台畜，供公畜爬跨进行采精，采精场应与人工授精操作室和公畜舍相连。室内采精场的面积一般为1010平方米，并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。,公猪采精室,（二）台畜的准备,台畜有真假台畜之分真台畜是指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。选发情的母畜比较理想，经过训练的公、母畜也可作台畜。假台畜即采精台，是模仿母畜体型高低大小，
4、选用金属材料或木料做成的一个具有一定支撑力的支架。,（三）调教种公畜爬跨假台畜,利用假台畜采精，要事先对种公畜进行调教，使其建立条件反射。调教的方法有如下几种：1.在假台畜的后躯涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液，公畜则会受到剌激而引起性兴奋并爬跨假台畜，经过几次采精后即可调教成功；2.在假台畜旁边牵一发情母畜，诱使公畜进行爬跨，但不让交配而把其拉下，反复多次，待公畜性冲动达到高峰时，迅速牵走母畜，令其爬跨假台畜采精；3.将待调教的公畜拴系在假台畜附近，让其目睹另一头已调教好的公畜爬跨假台畜，然后再诱其爬跨。,公畜调教时应注意的事项,1.调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打
5、等不良剌激，以防止性抑制而给调教造成困难；2.调教时应注意公畜外生殖器的清洁卫生；3.最好选择在早上调教，早上精力充沛，性欲盛；4.调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜长；,(三)器械准备,采精所需要的器械要事先准备好，力求清洁无菌，在使用之前要严格消毒，每次使用后必须洗刷干净。,(四)种公畜的准备,种公畜采精前的准备，包括体表的清洁消毒和诱情（性准备）两个方面。这和精液的质量和数量都有密切的关系。采精前应擦拭公畜下腹部，用0.1%高锰酸钾溶液等洗净其包皮外并抹干，挤出包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。在采精前，需以不同诱情方法使公畜有充分的性兴奋和性欲，一般采取让公畜在台畜附近停留片刻，进行
6、几次假爬跨。,二、采精技术,采精方法,雄性动物的采精方法很多，主要有假阴道法、手握法、电剌激法、按摩法、海绵法等。假阴道法适用于各种家畜和部分小动物，手握法是当前公猪采精普遍应用的方法，按摩法主要用于禽类和犬类，电剌激法主要用于野生动物的采精。,（一）假阴道法,原理：它是模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。1.假阴道的结构 假阴道是一筒状结构，主要由外壳、内胎、集精杯及附件组成。外壳为一圆筒，由轻质铁皮或硬塑料制成，内胎为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶筒，装在外壳内，构成假阴道内壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，装在假阴道的一端。此外，还有固定内胎的胶圈，保定集精杯用的三角
7、保定带，充气用的活塞和双联球等一些附件。各种家畜的假阴道结构基本相同，但形状和大小不一。,2.假阴道的准备假阴道应具备五个条件：1)适宜温度：采精时假阴道内腔温度应保持在38-40，集精杯也应保持34-35。2)适当压力：借助注入水和空气来调节假阴道的压力。3)适当润滑度：涂抹润滑剂的部位是假阴道前段1/3-1/2处到外口周围，但涂布不可过长过多。4)无菌：凡接触精液的部分均须经消毒。5)无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。,牛羊假阴道安装充气后理想的状态,不太理想的状态（但可以用）,牛的假阴道法采精,羊的假阴道法采精,(二)手握法,适用于猪的采精。是目前广泛使用的采集的一种方法。操作时，采精员
8、要戴上灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧，待公猪爬跨台畜后，当阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后，锁定公猪的龟头。待阴茎充分勃起时，顺势牵引向前，就能导致公猪射精。另一只手持带有一次过滤网的的集精杯收集精子浓厚部分的精液，其它稀薄精液及颗粒状胶冻分泌物排出时可随时弃掉。分段采精：弃掉含副性腺分泌物多、精子较少、精液清亮白色的第一段和精液较稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液浓、精子多、呈乳白色的第二段。,目录,猪的拳握法采精,(三)电剌激法,本法是通过电流剌激公畜引起射精而采集精液的一种方法。适用于各种动物。电剌激采精器由电子控制器和电极探棒两部分组成。电剌激采精应将公畜以站立或侧卧
9、姿势保定。保定后，剪去包皮及其周围的被毛，并用生理盐水冲洗拭干，然后将电极探棒经肛门缓慢插入直肠，达到靠近输精管壶腹部的直肠底壁，大家畜插入深度约20-25厘米，羊10厘米，犬10-15厘米，兔5厘米。然后调节控制器，选择好频率，开通电源。调节电压时，由低开始，按一定时间通电及间歇，逐步增高剌激强度和电压，直至公畜伸出阴茎，勃起射精，将精液收集于附有保温装置的集精瓶内。,(四)按 摩 法,此法适用于牛、犬和禽类。这里重点介绍禽的按摩采精。,鸡的按摩采精一般二人进行，一人用两手分别握着公鸡两腿，以自然宽度分开，使鸡头向后，尾部朝向术者。术者先以剪子剪去公鸡泄殖腔周围的羽毛，再以酒精棉花球消毒泄殖
10、腔周围，待酒精干后再进行采精。采精时术者用右手中指和无名指夹着经消毒、清洗、烘干的采精器，使器口握在手心内，手心朝向下方，以避免按摩时公鸡排粪污染，左手沿公鸡背鞍部向尾羽方向，抚摩几次，以减轻公鸡惊恐并引起性感。接着术者左手顺势翻转手掌，将尾羽翻向背侧，并以拇指与食指跨在泄殖腔两上侧，右手拇指与食指跨在泄殖腔两下侧腹部柔软部，以迅速敏捷手法，抖动触摸腹部柔软处，然后迅速轻轻地用力向上抵压泄殖腔，左手拇指和食指即可在泄殖腔两上侧作微微挤压，精液即可顺利排出。与此同时，迅速将右手夹着的集精器口翻上，承接精液流入集精器中。,三、采精频率,采精频率是指第周对雄性动物的采精次数。为了既能最大限度地采集精
11、液，又能维持其健康体况和正常生殖机能，必须合理安排采精频率。牛：每周2天采精，当日采2次猪：隔日一次，最好3天一次羊：每周3天，当日采2次。犬：隔日一次,第三节 精液品质检查,一、目 的二、项 目三、方 法,一、检查的目 的,1.检查种公畜的配种能力 2.公畜的繁殖问题 3.确定精液可稀释的倍数 4.检查精液的处理方法是否正确 5.检查精液产品的质量,二、检查的项目,（一）直观项目（二）微观项目,(一)直观检查项目,射精量色泽气味云雾状PH值美兰退色试验,(二)微观检查项目,精子活力估测精子活力计数密度测定:计数板计数、比色计测定畸形率：形态畸形率、顶体畸形率,三、主要项目检查方法,（一）直观
12、项目检查（二）微观项目检查,（一）直观项目检查,1.射精量2.色泽3.气味4.云雾状,(1)射精量的测定方法(2)公畜的正常射精量(3)采精量不正常的原因,1、射精量,(1)射精量的测定方法,概念:射精量是指每次射精的体积测定:以连续3次以上正常采集到的精液的平均值代表测定方法:可用体积测量容器如刻度试管或量筒,也可用电子秤称重近似代表体积,(2)公畜的正常射精量,影响射精量的因素:种类、睾丸大小质地、季节、健康状况不同畜种的正常射精量：,不同畜种的射精量比较,（3）射精量不正常的原因,2.色 泽,色泽：是指精液的颜色及其浓厚程度，它某种程度反应精液是否正常，精子的浓度高低正常的精液：猪：浅灰
13、白至白色 牛羊：乳白色或乳黄色,不正常精液原因分析,3.气 味,正常的精液：应没有很浓的气味，或略带动物特有的腥膻味腥味：有脓液臊味：有尿液或包皮液,4.云雾状,是指新鲜精液在33-35 温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。,云雾状分级标准,+翻明显而且较快+翻明显但较慢+仔细看才能看到精液的移动-无精液移动,（二）微观项目检查,1.活力估测2.密度测定3.畸形率测定,1.活力的估测,(1)概念:37下,精液中前进运动精子占总精子数的百分率(2)主要测定方法:估测法,活力测定时精液的稀释用品,例：牛精子活力检查的程序,载玻片预温,精液稀
14、释,取样检查,镜检,活力估测,活力记录,将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37，然后放在载玻片,将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释,取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片,用100倍和400倍观察,判断视野中前进运动精子占的百分率,按10级制评分和记录,2.精子的密度检查,(1)密度的概念及表示方法,单位体积精液中所含的精子数表示方法:个/ml 或亿/ml,(2)各种家畜精液的精子密度,(3)各种家畜精子密度比较,(4)精子密度的测定方法,精子密度计数板(器)简介精液的稀释精液注入计数室精子计数精子密度计算,精子密度计数板(器)简介,精子计数室长宽各1mm,面积1mm2
15、高度0.1mm,体积0.1mm3由双线或三线组成25个(5X5)中方格每个中方格内有16个小方格(4X4)共计400个小方格,精子计数室及一个中方格,精液的稀释,将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便于计数稀释的比例根据动物精液的密度范围确定稀释方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小试管中进行组合不同的稀释.如牛精液稀释100倍,为5ul原精+500ul稀释液稀释液:3%氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数,注入计数室前各种家畜精液建议稀释比例,返回,精液注入计数室,将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片。取25ul稀释后的精液,将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处
16、。缓慢注入精液,使精液依靠毛细作用吸入计数室。,注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！,用吸管稀释后精液注入计数室,共有两个对称的计数室,用移液器注入精液,精子计数,将计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格。计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。,进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格,也可以是从左角到右下角五个中方格,以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数,计算精子密度,精子密度=5个中方
17、格总精子数5101000 稀释倍数,例：牛精子密度测定程序,放计数板于载物台上,取样稀释精液,精液注入计数室,镜检,精子计数,密度计算,计数板和盖玻片一定要清洁,取500ul 3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀,取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中,用100倍和400倍观察,计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右,精子密度=5个中方格总精子数5101000 100,（四）畸形率检查,1、染色剂,0.5克龙胆紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用。美兰、纯兰或红墨水。,2、稀释,稀释液0.9%Na
18、Cl牛：1:10 羊:1:20猪:1:2,3、抹片,左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取10ul稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后，使其自然风干。,4、固定,在抹片上滴95%的酒精数滴，固定4分钟，甩去多余的酒精。,5、染色,将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龙胆紫或其它染色剂5-10滴，5分钟后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分凉干。,6、检查畸形率,将载玻片放在400或640倍的显微
19、镜下进行观察，共记录若干个视野100-200个左右的精子。,7、畸形率种类,头部膨大、头部小于正常、双头、头部不完整尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾有近端原生质小滴,畸形精子,视野中的畸形精子,双头和双尾精子,第四节 精液的稀释,一、精液稀释的目的,精液稀释是向精淮中加入适宜于精子存活的稀释液。其目的有两个：1.扩大精液容量，从而增加输精头数，提高公畜利用率；2.延长精子的保存时间及受精能力，便于精液的运输，使精液得以充分利用。,二、精液稀释液的成分及作用,1营养物质 2保护性物质 1)缓冲剂 2)防冷抗冻物质 3)抗菌物质 3.稀释剂 4.其它添加剂 1)酶类 2)激素类 3)维生素
20、类 4)有机酸、二氧化碳等,二、精液稀释液的成分及作用,1营养物质 2保护性物质 1)缓冲剂 2)防冷抗冻物质 3)抗菌物质 3.稀释剂 4.其它添加剂 1)酶类 2)激素类 3)维生素类 4)有机酸、二氧化碳等,三、稀释液的配制方法,用品的清洗与消毒药品的称量、水的量取基础液的配制：溶解过滤消毒（水浴或直接加热）放凉稀释液的配制：基础液按比例加入抗生素、卵黄液：按比例加入卵黄和抗生素的稀释液液：按比例加入抗冻剂,四、稀释倍数和稀释方法,1稀释倍数确定,精液适宜稀释倍数与家畜种类和稀释液种类有关。确定稀释倍数应根据原精液的质量，尤其是精子的活率和密度、每次输精所需的精子数、稀释液的种类和保存方
21、法。一般牛4-6倍，猪1-3倍，免3-5倍。,稀释倍数的表示方法,正确的表示方法：N倍稀释：即1份精液:N份稀释液1:N稀释：意思同上实际应用表示方法：稀释后体积是原精液体积的多少倍。因此所谓的N倍稀释，实际上是1:(N-1)，但这种方法有利于进行相关计算。如N倍稀释后，精子密度为原来的1/N，体积为原精液体积的N倍，可分装的份数为：原精液体积稀释倍数/每份精液体积,2.普通稀释倍数的计算,3.冷冻精液稀释倍数的计算,4稀释方法,1）精液经检查合格后应立即进行稀释，越快越好；2）稀释时，稀释液的温度和精液的温度必须调整一致，以30-35为宜；3）稀释时，将稀释液沿精液瓶或插入的灭菌玻璃棒缓慢倒
22、入，防止剧烈震荡；4）若作高倍稀释，应先低倍后高倍，分次进行稀释；5）稀释后立即镜检，活力应和稀释前一样；6）稀释后精液立即进行分装（一般按一头母畜的输精量）保存。,5.冷冻精液稀释,第一次稀释倍数的计算：应为最终稀释后体积的50%。第二次稀释为1:1稀释意义：总稀释倍数受总有效精子密度的影响，第二次稀释时，稀释液中含有防冻剂，而防冻剂应在稀释后在精液中含有固定的浓度。最后一次稀释时，1:1稀释，可以保证稀释后防冻剂的浓度为液的1半。这样无论总稀释倍数是多少，最终精液中含的防冻剂浓度是不变的。,第四节 精液保存,一、精液的保存方法,现行精液保存的方法按保存的温度分：常温保存（15-25）低温保
23、存（0-5）冷冻保存（-79-196）三种。按精液的状态分：液态保存：常温保存和低温保存温度都在0以上，故称液态精液保存冷冻保存：超低温保存精液以冻结形式作长期保存，故称冷冻精液保存。,二、低温保存,原理：低温能抑制精子的代谢和微生物的繁殖，但迅速降温会使精子遭受冷休克，加低温保护剂和缓慢降温并保持较低温度，可使精液保存数天。稀释液主要成分：抗生素、15-25%的卵黄、基础液保存方法：用纱布包数层于装冰块的保温瓶中或冰箱中保存。保存温度：2-5,低温保存的关键性环节,1、含卵磷脂、抗生素的稀释液2、等温稀释3、缓慢降温4、保持恒温（2-4）5、在保质期内使用，用前进行活力检查,二、常温保存,原
24、理：精子自身所产生的酸性物质和稀释液中的酸性物质使精液的PH降低到一定的水平，能够抑制精子的代谢，从而延长精子的存活时间。抗生素能够抑制微生物的繁殖。稀释液成分：抗生素、单糖、缓冲剂保存温度：15-25,常温保存的关键,1、含缓冲剂、营养、抗生素的稀释液2、等温稀释及缓慢降温3、保持恒温（15-25）4、防止精子沉淀堆积时间过久5、在保质期内使用，用前进行活力检查,第五节 输精操作,一、输精前的准备,（一）输精器械的准备,与精液接触的用品，必须经过清洗、消毒灭菌，并且不能有任何不利于精子存活的化学物质残留。用前最好用稀释液或生理盐水冲洗，确保对精液无毒害作用。最好一头母畜准备一个输精枪或枪头，
25、一次性输精器只能一畜一支开膣器最好一畜一个，用前在消毒剂中浸过，用凉开水冲过后，放入干燥箱中干燥后，放凉使用（冬季应防止过冷）。,（二）精液的准备,输精前应将精液准备好，应确定精液品质符合要求方可用输精大剂量低温或解冻后精液，应将温度升至20-30后输精常温保存精液不须要升温小剂量冷冻精液也应正确解冻后输精,（三）母畜的准备,牛、马、羊等家畜输精前应进行保定，以确保顺利输精。大家畜可保定在输精栏内或六柱保定架内，羊也可倒提保定。猪输精前应对母猪进一步发情检查，并刺激相应部位，以促进母猪产生宫缩，有利顺利输精。由助手将动物的尾部拉向一侧，马输精前应将尾毛用绷带扎好，防止带入阴道内。输精前应将母畜
26、外阴部用肥皂水清洗后，用清水洗净，擦干。母猪的外阴可用干纸巾擦净即可。,（四）输精人员准备,输精人员可戴一次性长臂或PE手套操作，也可洗净双手即可。操作人员应指甲剪短，锉光马输精时手要伸入阴道内，手臂应用75%酒精消毒凉干后，涂少量石蜡油牛输精时，手臂要伸入到直肠内，应清洗双手，戴长臂手套醮少量水或石蜡油或肥皂水，也可不戴手套操作。,（一）牛的输精,牛的输精方法,开膣器法直肠把握子宫颈深部输精法,子宫颈口,尿道口,膀胱,卵巢,子宫颈,子宫体,牛的输精,对母牛进行发情鉴定，母牛发情结束，不再爬跨其它母牛，精神趋于稳定时输精。将母牛保定，尾部拉向一侧，外阴用高锰酸钾水棉球擦拭，并擦干。将冷冻精液解
27、冻，剪去封口端，剪口端向前放外套管中，输精器通针向后拉出15厘米。将外套管套在输精器上。分开外阴，将套管连同外塑料膜向前上方伸入阴道10厘米，将输精器捅透外膜。,牛的输精,左手（或右手）戴上长臂手套涂少量石蜡油伸入直肠，排出宿粪。手伸至直肠狭窄部后，将直肠向后移，向骨盆腔底下压，找到子宫颈（棒状，质地较硬有肉质感，长约10-20厘米。手移至子宫颈后端（子宫颈阴道部），使子宫颈呈水平方向，并用力将子宫颈向前推，使阴道壁拉直，方便输精器向前推进。右手将输精器前端伸到子宫颈外口附近，左手配合，使前端对准子宫颈外口。左右手配合，上下调整，使输精器前端进入子宫体内。,牛的输精,等确认输精器到达子宫体时（
28、短距离前后移动时，没有明显阻力），不要再向前推送输精器。将精液缓慢注入，并慢慢抽出输精器。注意：输精器插入阴道时，应向前上方。当遇到阻力时，切忌用蛮力。输精器插入子宫颈管时，推进力量要适当，以免损伤子宫颈、子宫体粘膜。如果输精器后端为胶头，将精液压子宫内后，不要松开胶头，以免精液流回输精器内。,牛直肠把握子宫颈输精示意图,直肥输精示意图,（二）羊的输精,羊输精前准备,用试情公羊对发情母羊进行发情鉴定，发现允许试情公羊爬跨的母羊应进行标记，并安排输精时间在母羊允许公羊爬跨后的6-12小时第一次配种将母羊保定在保定架内或两将其倒提，前肢着地。消毒外阴部，开膣器上涂以石蜡油。,羊输精操作,将开膣器侧
29、扁方向与阴道呈同一方向，插入母羊阴道内，向下转动开膣器，并保持打开状态。将准备好的输精器前端对准子宫颈外口，伸入1厘米或更深。将精液缓慢注入后抽出。注意：开膣器应保持开张状态，以免夹伤阴道粘膜。如果无法找到子宫颈口，应拨动粘液，使子宫颈口暴露。如果仍无法确认，可将精液注入颜色较深的区域。,羊的输精,（三）猪的输精,输精时间掌握,用种公猪试情的后备母猪发现发情（有压背反应），24小时后作第一次输精，间隔12小时第二次输精经产母猪发现发情12小时后第一次输精，12小时后第二次输精。地方品种均推迟6小时无种公猪试情的后备猪压背反应后6-12小时，经产猪立即输精，地方品种均推迟6小时,输精清单（1）,
30、拿到消毒过的输精导管存储精液在16-20的恒温箱中每天都用公猪检查发情次在出现静立发情的当天进行第1次输精,输精清单（2）,清洗双手清洁母猪阴户、润滑输精导管，将输精导管向上、向前插入阴道并按逆时针方向旋转直到锁定摇动输精瓶几次，充分混合精液，剪掉输精瓶的顶端慢慢地向输精瓶加压：输精将要持续5-10分钟精液流出阴户时，要重新锁定输精导管,输精清单（3）,使用后，立即用清水和去离子水清洗输精导管记录公母猪耳号间隔12-24小时后重复输精蒸煮10分钟消毒输精导管 避免使用洗涤剂和消毒剂来清洗人工授精设备 将输精导管头部向上挂在有热空气处使其干燥 当输精导管内外部干燥后，保存在清洁的输精导管袋中 第
31、二次输精时要用不同的、清洁的、干燥的输精导管,输精操作擦拭外阴部,输精操作在输精器上涂润滑剂,输精操作分开外阴将输精器前端向上呈45度角向左旋转插入母猪阴道内,输精过程,第六节 精液冷冻保存技术,一、精液冷冻概述,1950年英国科学家Polge和Smith采用卵黄和甘油作保护剂，用干冰作冷源进行精液的冷冻，解冻后授精成功，开创了世界人工授精的新世代。到90年代，发达国家的全部奶牛和绝大多数肉牛采用冻精输精。精液冷冻保存成为最可靠的保存方法。精液冷冻保存是目前精液保存最有效的方法,二、精液冷冻的原理（一）,1、超低温使精子处于零代谢状态，升温后能使精子复苏并且不失去受精能力。2、但精子冷冻过程会
32、由于形成冰晶使精子受到损害，这些损害包括：精子外的水分先形成冰晶，而形成精子内外的渗透压差，导致精子水分外渗，精子内渗透压增高，电解质浓度提高，酸碱失去平衡。冰晶的形成造成：产生机械压力，导致细胞表层破坏冰晶渗透入精子内部，破坏精子结构3、如果在冷冻过程只形成微小冰晶，即玻璃化状态，则精子就不容易受到损伤，解冻后能恢复活力。,精液冷冻的原理（二）,4、形成玻璃化状态的条件：防冻剂干扰晶格的排列形成“过冷溶液”快速降温，使水分子来不及移动和排列，就失去了能量，形成更“过冷溶液”快速降温使液体只能形成极微小的“微晶”5、保存和解冻过程的变化：冰晶很微小，所以表面能很高，微晶总是力图合并成大冰晶一旦
33、吸收一定的能量，冰晶就会合并成大冰晶，从而使精子受到破坏。保存过程中，即使冻精温度只升高到-60，也可能使精子死亡冻精在解冻时也需要快速升温，才能保证防止微晶在解冻过程中形成大冰晶,三、精液冷冻的稀释液,低温保护剂：糖类：蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖卵黄、奶类冷冻保护剂甘油二甲基亚砜乙二醇抗生素类：庆大霉素、青霉素、链霉素等,四、冷冻精液稀释液的组成,基础液：由糖类和盐类、水配制的等渗液第一液：由基础液和卵黄（15-20%）组成的低温保存稀释液。用于在33下稀释和逐步降温。第二液：由第一液和甘油或其它防冻剂组成。甘油含量通常比稀释后浓度高一倍。用于精液的第二次稀释（2-4）,五、解冻液的配制,一般
34、采用2.9%的柠檬酸钠作解冻液猪的冻精解冻液用常温保存稀释液BTS也可用VB12注射液作解冻液如果解冻液中加入2mmol的咖啡因有利于提高受胎率,六、冷冻精液的程序,1、精液的采集：牛羊采精可采用一次采精两个射精量的方法2、品质检查：精液的密度和活力都必须符合要求3、稀释前处理：羊、猪的精液在稀释前进行离心或清洗（羊）有利于提高解冻后活力4、稀释：可采用一次稀释也可采用二次或三次稀释。最常用的是二次稀释,冷冻精液的程序,5、稀释第一次稀释：在30温度下，根据计算的稀释倍数进行第一次稀释，放在500毫升的烧杯中与第二液一起缓慢降温至2-5。第二次稀释：在2-5 下进行6、平衡：是精液与防冻剂（甘
35、油）相互的时间。一般2-4小时。7、分装：冻精的剂型有细管（0.25ml、0.5ml），安瓿（2.5ml、5ml)、颗粒（0.1ml）、袋装等。,冷冻精液的程序,8、冷冻：冷源：干冰（-79）、液氮（-196）冷冻用品：冷冻面：铜网、氟板（聚四氟乙烯）、铝板冷冻槽：广口液氮罐、液氮槽钢匙、镊子、低温温度计冷冻方法：干冰埋藏法液氮熏蒸法不同剂型冷冻方法：颗粒冻精细管冻精9、解冻检查：活力0.3以上,精液冷冻仪,七、颗粒冻精的制作,（一）冷冻条件,1、冷源：液氮或干冰2、冷冻面：可以用铜网、聚四氟乙烯板、铝板等3、冷冻温度：-98-110 4、液氮槽,（二）颗粒冻精制作流程,1、冷冻面的预冷：将冷
36、冻面放入液氮中浸数分钟，待不再有大量气体放出时，取出，架在液氮面上1.5cm高处，数分钟后即可冷冻。2、冻前精子活力检查：平衡的精液应进行活力检查，如果活力合格方可滴冻3、滴冻：预冷至2-4 的滴管吸取精液，均匀地滴在冷冻板上，并使之间距为一个颗粒直径。每个颗粒0.1ml,颗粒冻精制制作流程,4、滴冻练习：每次用取样器取1ml精液，将其滴成10个大小相等的颗粒。5、熏蒸：一块冷冻板滴满后，可将冷冻板面加盖（也可不加）。6、将冷冻板浸入液氮：并用预冷后的不锈钢勺将颗粒铲下，倒入下面的网面上。7、将纱布袋浸入液氮中，将一塑料漏斗口插入纱布袋中。取出液氮中的纱网将颗粒冻精倒入漏斗中,颗粒冻精制制作流
37、程,8、取样解冻检查精子活力9、将纱布袋口抽紧，在袋口的线上作好标记。10、将提漏从液氮罐中取出，放入液氮槽中，将纱布袋放入提漏中11、将提漏迅速放入液氮罐中,（三）颗粒冻精液制作要求,形状一致，不连片，大小均匀，体积0.1ml无气泡（在液氮中不漂浮）解冻后活力0.3以上总有效精子数1200万个（牛）每ml中不得检出大肠杆菌,八、细管冻精的制作,（一）细管冻精的优点：,1、封闭包装，卫生安全：保存、输精时不与外界接触2、便于标记3、取出方便：直接用镊子夹取4、解冻方便：直接投入水浴中解冻5、输精方便：可安装在专用的输精枪内输精,（二）细管冻精的缺点,制作成本高必须进行大规模生产才有意义,（三）
38、细管分装,常温分装：一次性稀释后进行分装标记，然后进行精液降温与平衡优点：不需要低温操作台；缺点：对精子损害较大低温分装：在第二次稀释后进行分装标记，然后进行平衡，最后冷冻。优点：对精子损伤小，解冻后活力大 缺点：对设备要求高,（四）细管冻精的冷冻,大口径液氮罐冷冻将平衡后的细管用毛巾擦净，放入铜网上，将铜网降至距液氮面10cm的高度10分钟后沉入液氮中，取出分装在提漏内，放入液氮罐中程序冷冻仪冷冻,（四）细管冻精的要求,细管上要对供精者的场家、号码、生产日期进行标记容量0.25,0.5,5ml不等，牛细管冻精一般为0.25ml每剂有效精子数1000万个活力0.3以上其它同颗粒冻精,（五）细管
39、冻精的解冻,将水浴温度调整到40 将提漏提至罐口下3-5cm处，用镊子夹住细管的超声波封口端迅速移入水浴中不断摇动，3-4秒后全部变色后取出，用手搓动使之全部解冻,（九）冻精的解冻,解冻温度：有冰水解冻，30-40 解冻，高温（50-75）解冻，以第二种方法最常用解冻方法：湿解冻法：在试管中加入0.5-1ml解冻液，升温到30-40，投入一粒冻精，摇动并取出干解冻法：先将试管预热至30-40，投入冻精颗粒后，至融化一半时，取出加入20-30 的解冻液细管冻精解冻：将细管从液氮罐或液氮槽中取出，投入30-40 的水中至融化一半时取出用手搓至完全融化或用体温解冻解冻后温度：5-8解冻后保存：在2-
40、5下或冰瓶中可保存12小时以上。,颗粒冷冻精液的解冻,取2.9%的柠檬酸钠0.5ml放入灭菌的平底试管中将试管放入40 的水浴中预温1分钟将液氮倒入广口保温瓶或泡沫塑料槽中将液氮罐的提漏提至罐口下3-5cm处，看清标记后，将纱布袋取出放液氮槽中将镊子放入液氮中预冷片刻，夹取颗粒冻精后，迅速投入试管中，并摇动试管，至冻精解冻至绿豆大小时取出，摇动至全部融化。,（十）冷冻精液的保存,冻精（颗粒）应进行标记：公畜名（号）、采精日期、容量保持液氮罐中液氮面高度接触冷冻精液的用品都要进行预冷在冻精进行转移时，应尽可能减少在空气中暴露的时间。如果是颗粒冻精应先移入液氮槽中再解冻。液氮罐应放在凉爽通风处，避免放在高温或通风不畅的地方液氮罐在运输中应防止暴晒和碰撞。,The end！,
